人血丙种球蛋白和甲强龙联合冲击治疗对于流行性乙型脑炎远期疗效观察

目的研究人血丙种球蛋白和甲强龙联合冲击治疗对流行性乙型脑炎的远期疗效。方法 89例重度乙脑患儿,随机分为治疗组45例,常规治疗基础上,加用丙球加甲强龙联合治疗7 d,1周后,同剂量再给予治疗3 d;对照组44例,常规治疗基础上加甲强龙1周。观察1、2、3周后的治疗效果、复发情况,以及6个月后的后遗症发生率。结果治疗组总有效率明显高于对照组;治疗组复发率和后遗症发生率明显小于对照组。结论丙球结合激素治疗,对于乙脑的近期及远期疗效均较好。

基于倾向性评分匹配的小儿重症支气管肺炎危险因素分析

目的探讨小儿重症支气管肺炎发生的相关危险因素,为重症肺炎的早期诊断及判断病情变化提供依据。方法选取安徽医科大学第一附属医院儿科呼吸病区,2016年1月至2018年12月收治住院的重症支气管肺炎患儿108例和2018年1~12月住院非重症肺炎患儿204例,合计312例。运用倾向性评分匹配(PSM)法对重症组和非重症组患儿进行1∶1匹配,使组间一般人口学特征均衡。匹配后运用单因素分析和多因素logistic回归模型筛选小儿重症支气管肺炎的危险因素。结果倾向性评分匹配后,两组患儿一般人口学资料均衡。单因素分析结果显示,发病季节、早产、免疫缺陷、先天性心脏病、血小板计数5个变量与重症肺炎存在统计关联。进一步多因素logistic回归分析结果表明,免疫缺陷(OR=19.746,95%CI:5.401~72.187)、先天性心脏病(OR=15.329,95%CI:3.098~75.851)和佝偻病(OR=5.600,95%CI:1.021~30.699)是重症肺炎的危险因素;与春天比,秋天小儿发生重症肺炎的风险降低了67.4%(OR=0.326,95%CI:0.111~0.955)。结论合并有先天性心脏病、免疫缺陷或佝偻病三种基础疾病为重症肺炎的危险因素,同时需做好儿童冬春季肺炎的预防。

人巨细胞病毒pp65基因疫苗的研制

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)基因疫苗的研制及其预防和治疗HCMV原发和再发感染的效果。方法应用聚合酶链式反应(PCR)扩增HCMVpp65基因全长、巨细胞病毒(CMV)启动子的上下游序列,转化至质粒并载体,测序;合成分泌肽基因,构建自制的含CMV启动子、pp65基因和分泌肽基因的pcDNA5.0转染载体,即HCMVpp65基因疫苗。将该载体疫苗通过脂质转染法转至中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,Western点杂交检测CHO细胞上清中pp65蛋白。结果克隆pp65基因全长测序结果与HCMVAD169株上的pp65标准序列比较:一致性为99.99%。构建了含有分泌肽、CMV启动子(含有增强子和内含子)和pp65全长pcDNA5.0的转染载体,即HCMV基因疫苗。转染至CHO细胞,其上清培养提取物Western点杂交阳性。结论含有分泌肽、CMV启动子和pp65cDNA的pcDNA5.0真核载体即粗制的HCMV基因疫苗可成功构建。

神经干细胞植入鼠侧脑室后迁移与神经元分化

目的探讨人胎脑神经干细胞(hNSC)在新生鼠(生后9d内)脑内迁移与分化,为hNSC移植治疗新生儿脑病提供实验依据。方法无血清培养基从流产人胎脑前脑培养出hNSC球,取部分同批hNSC球,用酶消化为单细胞悬液。将培养14d的hNSC和消化好的单细胞悬液经脑室途径移植到出生8d的健康SD大鼠侧脑室内,于移植24、48、72h通过取脑,制作石蜡切片,免疫组织化学观察。结果体外培养获得典型的人胎脑hNSC球,神经细胞呈球样悬浮生长,移植入脑室内的2种类型细胞,其在脑内存活迁移的结果明显不同,用抗人细胞核抗体(Anti-hNuc)免疫荧光检测,移植入细胞球的72h就可迁移到嗅球、额叶皮层的内侧中央前区、海马、枕叶皮层等部位的颗粒层内、小脑回内相当于蒲氏细胞层位置有排列整齐的单层细胞,中脑区域也有广泛的细胞分布;抗神经纤维抗体Anti-NF可看到大脑皮层的颗粒层和嗅球部有阳性反应细胞,细胞间通过突起发生了连接。移植入单细胞悬液组24h可在脑室内见到大量的Anti-hNuc(+)细胞,72h组可在脑室内及其附近脑组织内均见少量的细胞。结论体外培养获得的hNSC移植入鼠脑后可存活并发生迁移分化,细胞形态不同存活迁移分化的效果有明显不同,以直接培养出来的细胞球移植较制备成单细胞悬液移植的后存活迁移的能力明显增强。

脑性瘫痪动物模型研究进展

利用不同脑瘫高危因素制备的脑瘫动物模型的脑组织病理改变和行为学变化,与脑瘫儿童的临床表现有许多相似之处。因此,脑瘫动物模型是进一步研究人类脑瘫的极佳工具。笔者主要综述有关模型动物和模型制作方法的研究进展。

引导式教育对小儿脑瘫的疗效分析

目的探讨引导式教育对小儿脑瘫的疗效。方法 99例脑性瘫痪患儿随机分为研究组和对照组,研究组采用Bobath疗法联合引导式教育,对照组采用单纯Bobath疗法,治疗6个月后比较两组间及每组治疗前后疗效情况。结果每组治疗前后,研究组和对照组之间的疗效比较,疗效差异有统计学意义(P<0.05)。结论引导式教育联合运动疗法对脑瘫儿童的疗效显著高于单纯Bobath疗法,特别是在改善认知、社交能力、生活技能方面。

儿童肺炎支原体感染的实验室诊断及临床特点分析

目的:评估RNA实时荧光恒温扩增技术(RNA-SAT)在儿童肺炎支原体(MP)感染中的应用价值及与MP-IgM抗体检测的差异性。方法:收集近2年安徽医科大学第一附属医院儿童呼吸病区送检的临床标本经SAT检测为MP-RNA阳性的菌株。对阳性株的标本来源、患儿年龄、性别、送检MP-IgM时间、结果、相关实验室指标及临床诊断进行统计分析。结果:181株经SAT检验为阳性的MP-RNA标本来源于155例患儿的咽拭子、痰液及肺泡灌洗液。MP感染患儿中位年龄为4岁,年龄均数及标准差为(4.78±2.957)岁;151例送检IgM抗体的患儿中,<5岁与≥5岁组间和≤7天、8~13天及≥14天组间IgM的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);肺炎支原体肺炎(MPP)组与非MPP组间白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞比例差异有统计学意义(P<0.05);难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)组与普通型肺炎支原体肺炎(GMPP)组间IgM抗体阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MP-IgM抗体检测阳性率与患儿年龄及采集标本的时间密切相关。RNA-SAT在儿童MP感染中的诊断价值较高,多次送检临床标本及联合多种实验室诊断有利于提高MP的检出率,指导临床诊断及治疗。

人神经干细胞在宿主鼠脑内分化成神经元呈脑位点特征

目的研究人胎脑神经干细胞植入年幼大鼠脑后的成神经元分化作用,探讨神经干细胞替代治疗小儿脑病的可行性。方法自孕16周的胎脑组织分离培养出神经干细胞球,在小儿脑脊液中培养诱导分化以证明其分化潜能。将培养14 d的神经干细胞球移植10 d龄鼠的侧脑室内,于移植后第4、7、14天杀鼠取脑,切片,行人神经丝特异性标志的免疫荧光分析,显示神经元的分布和细胞形态。结果培养获得典型神经干细胞球,呈漂浮生长,在小儿脑脊液中能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。用抗人神经丝混合单抗检测移植物的成神经元分化,移植后的第4天,观察到阳性反应细胞在颗粒层表现为颗粒性细胞,锥体细胞层则出现长突起的锥体细胞,还有连接神经元样中间神经元,小脑内有单层排列的浦肯野细胞。对比各时间点的观察结果,阳性细胞分布位置未变。随着移植后天数的后延,阳性细胞数量呈减少趋势,但锥体细胞的突起明显加长。结论体外培养获得的人神经干细胞脑室途径移植年幼大鼠,在脑内发生迁移,并分化成形态上与其临近宿主细胞一致的神经元。提示宿主脑组织局部微环境在引导移植物分化成神经元中发挥了重要作用。

儿童患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的流行病学特征及耐药性分析

分析安徽省内儿童与>14岁患者感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的流行病学特征及耐药性差异,为儿童感染临床治疗提供病原学依据。临床分离金黄色葡萄球菌(SA)738株,所有菌株进行药敏试验并通过PCR扩增技术检测mecA、杀白细胞素(pvl)基因,然后按年龄分组对所有菌株的mecA基因、pvl基因、科室来源、标本来源及耐药性进行统计学分析。738株SA检测为MRSA菌株共126株,占17.07%,pvl阳性菌株36株,阳性率为28.57%。其中分离自儿童患者MRSA菌株32株,占20.92%,pvl阳性MRSA菌株7株,阳性率为21.88%,与>14岁患者感染SA的mecA及pvl基因检出率差异无统计学意义。儿童患者感染MRSA主要来源于烧伤科(31.25%)、外科(15.63%)、ICU(9.38%),其中pvl(+)MRSA主要来源于外科(57.14%)、新生儿病区(28.57%)、呼吸内科(14.29%),儿童与>14岁患者感染MRSA主要来源科室之间差异有统计学意义(P<0.001)。儿童感染MRSA主要来源标本为脓液(31.25%)、痰(25.00%)、创面(15.63%),pvl(+)MRSA主要来源于脓液(71.43%)、血(28.57%),与>14岁患者感染MRSA标本来源之间差异有统计学意义(P<0.05)。儿童患者感染pvl(+)MRSA主要对β-内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、林克酰胺类耐药;pvl(-)MRSA主要对β-内酰胺类、林克酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、四环素类耐药,儿童与>14岁患者感染MRSA的耐药性差异无统计学意义。安徽省各地区儿童患者与>14岁患者感染MRSA的流行病学特征差异有统计学意义(P<0.05),耐药性差异无统计学意义,临床儿科医师应注意以上高发科室及标本感染SA的mecA及pvl基因鉴定并根据药敏结果合理用药以达到更好的治疗目的。

小儿脑性瘫痪诊疗指南探讨

我国小儿脑性瘫痪(脑瘫)康复事业起步晚,缺乏规范化治疗方法。在临床长期实践的基础上,现结合美国神经科学协会和WHO等关于小儿脑瘫诊疗指导,参考国内外最新文献和一些国际会议的资料,从脑瘫的定义、病因、分型、诊断、评估和康复治疗的方法等多方面进行归纳总结。

小儿脑性瘫痪危险因素研究

目的探讨小儿脑性瘫痪(简称脑瘫)发病的危险因素。方法对51例脑瘫患儿及102例对照进行以医院为基础的1∶2配比病例对照研究,所获数据采用条件Logistic回归分析。结果单因素分析提示,类似疾病家族史、孕母高龄、孕母反复阴道流血、早产、低出生体重、新生儿窒息、核黄疸、颅内出血,特别是新生儿窒息和早产(OR=11.043和OR=5.975)与小儿脑瘫的发生有关联。多因素分析结果显示,低出生体重、类似疾病家族史、早产、新生儿窒息、孕母高龄为其发病的主要危险因素。结论脑瘫发病的相关危险因素主要集中在孕期和围产期,积极预防和消除各种致病危险因素,可降低脑瘫的发病率。

人巨细胞病毒先天性感染大鼠海马空间学习记忆功能受损

目的 探讨先天性感染人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）的子代大鼠空间学习记忆情况及其影响机制. 方法 40只12周龄无特定病原体级Sprague-Dawley大鼠按雌雄3∶1合笼.用随机数字表法将受精大鼠分为研究组和对照组,每组15只.研究组妊娠3d腹腔接种组织半数感染量为1×10^-6的病毒悬液0.5 ml;对照组同时腹腔注射人胚肺成纤维细胞上清液0.5 ml.接种后l周检测2组孕鼠外周血HCMV特异性抗体IgM和IgG.于临产前,取研究组和对照组孕鼠各3只行剖宫产,用随机数字表法在2组剖宫产所获仔鼠中各取5只,取双侧海马组织进行病毒分离.仔鼠饲养至28日龄时,从各组随机选择6只进行神经行为学检测（包括Morris水迷宫学习后的定位航行试验和空间探索试验）.取完成神经行为学检测的大鼠脑组织,HE染色切片,光镜下观察;取仔鼠海马组织块透射电镜下观察、摄片.Morris水迷宫空间学习记忆测试数据采用广义混合线性模型,并用Origin 8.0绘制结果图.采用秩和检验、独立样本t检验和x2检验进行统计学分析. 结果 （1）研究组15只雌鼠中,11只成功分娩;对照组15只均成功分娩.研究组母鼠的产仔量低于对照组[（5.5±2.4）只与（8.7±3.1）只,t=2.366,P=0.033）,仔鼠生后1周内死亡率高于对照组[26.1％（18/69）与4.9％（6/122）,x2=191.020,P=0.000].研究组7只次海马病毒分离阳性,对照组均为阴性.（2）研究组第1-4天逃避潜伏期均长于对照组,差异有统计学意义（广义混合线性模型检验,F=499.473,P=0.000）.研究组第1-4天的总路程长于对照组（广义混合线性模型检验,F=440.167,P=0.000）.空间探索能力方面,研究组穿越平台次数少于对照组[（4.2l±1.44）次与（7.50±1.72）次,t=7.182,P=0.003],目标象限游泳时间占总时间比例少于对照组[（26±4）％与（47±5）％,t=15.487,P=0.000].（3）光镜观察可见研究组大鼠脑组织存在不同程度皮层液化坏死,空泡变性较多,海马结构紊乱;电镜下可见研究组大鼠脑组织存在典型的陈旧性髓鞘损伤及崩解. 结论 HCMV先天性感染仔鼠出现较明显的空间学习记忆功能下降,其病理机制主要与皮层和海马结构损伤有关.

人神经干细胞异种移植示踪检测分析

目的摸索人胎脑神经干细胞(hNSC)在动物移植研究中理想的示踪检测方法,探讨hNSC移植后的命运,为新生儿缺氧缺血性脑损伤的干细胞治疗提供依据。方法用添加表皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子+白血病抑制因子的N2培养基从流产的人胚胎前脑组织培养出神经干细胞球,通过免疫荧光技术检测神经干细胞巢蛋白(Nestin)抗原标志和细胞分化潜能以鉴定其干细胞属性。取体外培养6d的神经干细胞集落,进行PKH26标记后培养和分化示踪。将培养14d的神经球移植到缺氧缺血性脑病的新生鼠侧脑室,12只鼠分为PKH26标记示踪组(4只)、免疫反应检测组(4只)和对照组(4只),于移植后第4、7、14天杀鼠取脑,全脑切片,行抗人细胞核抗体(抗hNuc)和抗人神经丝抗体(AntihNF)的特异性免疫反应检测及PKH26的荧光观察。结果体外培养获得典型人胎脑神经干细胞球。PKH26能高效标记神经干细胞,标记的阳性率>95%,标记分子可伴随干细胞增殖、迁移和分化,但不进入细胞突起,仅位于胞体。AntihNuc免疫荧光检测和PKH26示踪结果显示:植入脑室的hNSC,4d即可迁移到嗅球、额叶皮层内侧中央前区、海马、枕叶皮层等部位的颗粒层内,小脑蒲氏细胞层有单层标记细胞排列,中脑区域也有广泛的标记细胞分布,损伤灶区有明显多的移植细胞分布。抗hNF检测结果显示:在大脑皮层的颗粒层有阳性反应细胞,彼此间有连接发生。结论可用PKH26对体外培养获得的hNSC进行标记示踪。AntihNuc可用于检测移植细胞在受体鼠脑内的分布,抗hNF可用于检测移植细胞的成神经元分化及神经元间发生的连接。hNSC经脑室途径移植缺氧缺血性损伤的新生大鼠脑,可快速迁移到全脑多处远距离部位,并构建神经元连接,损伤灶区对移植细胞有牵引作用。