四引物PCR扩增反应的单管SNP快速测定法

建立一种在单管中进行单核苷酸多型性 (SNP)快速测定的高效廉价方法 .以人ABCA1基因中的I82 3M为研究对象 ,设计 4种引物进行PCR扩增 ,其中两种引物用于扩增一段含有SNP位点的DNA片段 ,另两种引物为SNP位点特异性引物 ,4种引物在单管中同时进行PCR扩增反应 ,根据延伸产物的长度确定SNP的类型 .为提高SNP测定的特异性 ,在特异性引物的 3′端倒数第 3个碱基引入了一个人为错配碱基 ,使引物的错误延伸率显著降低 ,大大提高了SNP分析的准确性 .实验结果表明 ,所建立的方法简单 ,操作简便 ,可在单管中完成SNP的测定反应 .

红三叶草异黄酮的生物学功能及其在瘤胃中代谢的研究进展

红三叶草提取物含有植物雌激素,主要是异黄酮。已有研究表明,异黄酮有利于免疫、神经系统以及骨骼发育,同时,还对反刍动物瘤胃内菌群有影响。本综述将对红三叶草异黄酮的组成和生物学功能,以及其在瘤胃内代谢和对瘤胃功能的调节作用进行阐述,以期为新型饲料添加剂的开发提供参考。

第九届全军药学会药物分析与药物代谢专业分会第一次工作会议纪要

2012年8月10日，第九届全军药学会药物分析与药物代谢专业分会第一次工作会议在新疆鸟鲁木齐隆重召开。此次会议由新疆军区联勤部药品仪器检验所承办，共有26名分会委员及6名特聘委员出席。

人工修饰双等位基因特异性引物扩增法检测CYP1B1多态性与肺癌易感性的关系

[目的 ]应用一种新的快速检测单核苷酸多态性 (SNP)方法———人工修饰双等位基因特异性引物扩增 (di ASA AMP)法研究CYP1B1基因Leu43 2Val位点多态性与江苏汉族人群肺癌易感性的关系。 [方法 ]采用配对病例 对照研究 ,收集江苏汉族人群原发性肺癌患者 2 2 7例为病例组 ,同时按 1∶1配对选择非肿瘤、非呼吸道疾病患者 2 2 7例为对照组。应用diASA AMP方法检测了病例组与对照组CYP1B1基因Leu43 2Val位点多态性 ,分析Leu43 2Val位点突变与肺癌易感性之间的关系。并应用测序法验证diASA AMP法的特异性。 [结果 ]CYP1B1基因Leu43 2Val位点突变C和G的基因频率在对照组和病例组的分布差异无显著性 ( χ2 =0 .2 0 1,P >0 .0 5 ) ,单纯CYP1B1基因Leu43 2Val位点突变与肺癌危险性也不存在明显的相关关系 (OR =1.0 85 ,95 %CI =0 .73 0～ 1.615 ) ,但该位点突变与吸烟可能有一定协同作用 ,携带G等位基因的基因型可增加吸烟者患肺癌的危险性 (OR =2 .0 5 7,95 %CI =1.162～ 3 .64 2 )。对照组的CYP1B1C和G等位基因频率与现有的中国汉族人群资料结果相近 ,测序结果与diASA AMP结果相符。 [结论 ]CYP1B1Leu43 2Val多态性可能是江苏汉族人群吸烟者肺癌发生的易感因素。diASA

ALM-ASA法鉴别人参和西洋参ITS及5．8s基因上单核苷酸多态性位点

目的:查找并发现参类药材的单核苷酸多态性(SNP)位点,利用SNP的准确测定来鉴别人参和西洋参。方法:根据ITS及5.8s基因上人参和西洋参的SNP位点设计特异性引物,利用适配器连接介导的等位基因特异性扩增法(ALM-ASA)进行检测。结果:PCR反应体系优化后,能在同一反应中同时鉴别人参、西洋参。根据凝胶电泳中扩增片段的大小判断SNP的类型,出现294bp条带的为人参,111bp条带的为西洋参。结论:ALM-ASA法极大提高了PCR反应的特异性,结果准确,可同时测定多个SNP位点。采用该方法测定ITS及5.8s基因上的SNP位点能有效地对参类品种进行鉴别和质量控制。

13种软膏剂微生物限度检查的方法验证探讨

目的:建立13种软膏剂微生物限度检查方法。方法:采用常规法、培养基稀释法和薄膜过滤法,对13种软膏剂进行方法验证。结果:选择不同方法,各试验菌样品中的回收率均达到70%以上。结论:确立了13种软膏剂微生物限度检查方法,可有效控制其质量。

产后抑郁症与雌激素受体β基因的多态性

目的探讨汉族女性产后抑郁症与雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)基因多态性的相关性。方法收集产后抑郁症124例(观察组)和无抑郁症状的年龄匹配的健康女性144例(对照组),采用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法分析ERβ第5外显子Rsa-Ι酶切多态性和第8外显子Alu-Ι酶切多态性。结果两组ERβ第5外显子Rsa-Ι酶切多态性基因型rr、Rr、RR频率和等位基因r、R频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组ERβ第8外显子Alu-Ι酶切多态性基因型aa、Aa、AA频率比较,差异无统计学意义(P>0.05);产后观察组A等位基因频率高于对照组(P<0.05)。结论 ERβ第8外显子Alu-Ι多态性可能与常州本地区汉族女性产后抑郁症的易感性有关,含A等位基因的基因型增加患产后抑郁症风险,而ERβ第5外显子Rsa-Ι酶切多态性与本地区汉族女性产后抑郁症发病风险无相关性。

复方呋喃西林滴鼻液质量标准提高研究

目的提高并完善复方呋喃西林滴鼻液（呋麻滴鼻液）的质量标准。方法利用麻黄碱和呋喃西林在乙醚中不同的溶解性改进盐酸麻黄碱的化学鉴别方法;采用HPLC法同时测定呋麻滴鼻液中的盐酸麻黄碱和呋喃西林,选择PurospherSTAR RP-C18（4.6 mm×150 mm,5μm）色谱柱,以磷酸盐缓冲液（p H 3.0±0.1）-乙腈（85∶15）为流动相,流速为1.0ml·min^-1,检测波长257 nm。结果采用改进后的化学鉴别方法对3批样品中的盐酸麻黄碱进行鉴别,均呈正反应;盐酸麻黄碱和呋喃西林分别在400.25~2401.49、8.47~50.83μg·ml^-1浓度范围内线性关系良好,r=0.9997;平均回收率分别为99.4%和98.1%。结论提高后的质量标准具有专属性强、准确度高、重复性好的特点,可用于该制剂的质量控制。

3种医院糊剂微生物限度检查方法学研究

目的:建立复方水杨酸糊、氧化锌糊和复方松馏油糊3种医院糊剂微生物限度检查方法。方法:按《中国药典》2010年版二部微生物限度检查法中对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查法进行验证。结果:复方水杨酸糊和氧化锌糊细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查均采用培养基稀释法;复方松馏油糊细菌、霉菌及酵母菌计数检查和铜绿假单胞菌菌检查采用培养基稀释法,金黄色葡萄球菌检查采用薄膜过滤法。结论:确立了3种医院糊剂微生物限度检查方法可有效控制其质量。

苯海拉明麻黄碱滴鼻液的质量标准研究

目的建立苯海拉明麻黄碱滴鼻液的质量控制方法。方法采用HPLC法测定滴鼻液中盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱的含量;色谱条件：色谱柱以氰基键合硅胶为填充剂;流动相为乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5）（用冰醋酸调节pH值至6.5）;流速1 ml·min^-1;检测波长258 nm。结果化学反应和HPLC能检出盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱。在上述色谱条件下,盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱获得良好分离;进样浓度分别在0.0499~0.3996 mg·ml^-1（r=0.9999,n=5）,0.2000~1.6002 mg·ml^-1（r=0.9999,n=5）范围内与峰面积呈良好的线性关系。盐酸苯海拉明平均回收率为100.0%,RSD为0.4%（n=9）。盐酸麻黄碱平均回收率为99.68%,RSD为0.4%（n=9）。结论本方法准确,重复性好,可作为苯海拉明麻黄碱滴鼻液的质量控制方法。

无锡联勤保障中心安全合理用药监督检查发现问题与对策研究

根据全军开展以"五整治、三检查"为重点的安全合理用药专项整治活动通知要求,无锡联勤保障中心对所属医疗机构安全合理用药情况进行了监督检查。文章通过总结分析检查中发现医疗机构在合理用药组织领导、规章制度、制度落实、工作成效及军人合理医疗药品保障方面存在的问题,提出下一步持续改进的意见和建议,推动医疗机构以查促建,进一步规范和提高医疗机构合理用药整体建设水平,为推进中心所属医疗机构药品安全合理使用工作的制度化、规范化、常态化提供技术支撑。

硼酸甘油滴耳液质量标准提高研究

目的改进硼酸甘油滴耳液的鉴别以及含量测定的方法,以提高该制剂的质量标准。方法硼酸盐、甘油的鉴别反应均采用《中国药典》的鉴别方法;含量测定方法依据国家药品标准技术规范规定,增加取样量。结果分别对上述鉴别以及含量测定的方法进行试验验证,鉴别方法重复性良好,含量测定方法经过准确性、耐用性验证以及与原方法进行比较可行。结论所建立和改进的方法简便、灵敏、准确、专属性强,可作为硼酸甘油滴耳液的质量控制方法。

3种医院外用口腔膜剂的微生物限度检查方法研究

目的建立复方维A酸膜、复方硫酸庆大霉素膜和甲硝唑膜3种医院外用口腔膜剂微生物限度检查方法。方法按《中国药典》2010年版二部微生物限度检查法进行验证。结果复方维A酸膜细菌、霉菌及酵母菌计数和验证菌检查均采用常规法;复方硫酸庆大霉素膜和甲硝唑膜的细菌、霉菌及酵母菌计数检查及验证菌检查均采用薄膜过滤法。结论确立的3种医院外用口腔膜剂微生物限度检查方法,可有效控制其质量。

基于飞针测试仪的电子模块的测试与实现

重点讨论了飞针在线测试技术在电子模块测试中的测试与实现。介绍了飞针测试原理,阐述了电子模块飞针测试的流程以及测试中电子模块,提出了短路测试中出现的问题的解决办法,以及NOD文件的快速修改技巧,并且详细说明了飞针和针床的互补关系。飞针测试技术的使用能准确定位故障点,缩短调试周期,对批量生产的电子模块调试有重要作用。

HPLC法同时测定扑麻滴鼻液中2成分的含量

目的：建立同时测定扑麻滴鼻液中盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏含量的HPLC方法。方法：采用：PurospherSTAR RP18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,以磷酸盐缓冲液（p H 3.0±0.1）-乙腈（82∶18）为流动相,流速为1.0 ml·min^-1,在210nm波长处同时检测盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏,柱温35℃,进样量20μl。结果：盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏分别在19.81-118.85μg·mL^-1和6.21-37.25μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好,r分别为0.999 6和0.999 8。平均回收率分别为100.39%（RSD=0.69%,n=9）和100.11%（RSD=0.60%,n=9）。结论：该方法快速简便、重复性、准确性好,可用于该制剂中盐酸麻黄碱和马来酸氯苯那敏的含量测定。

多潘立酮片评价性抽验结果及分析

目的评价多潘立酮片的产品质量。方法按国家评价性抽验计划总体要求,采用法定检验方法结合探索性研究对11个厂家的239批样品进行检验,分析检验结果 ,并评价多潘立酮片的质量现状。结果多潘立酮片检验合格率为100.00%;实时溶出曲线在4种不同溶出介质中存在明显差异,且各厂家产品的实时溶出度在批内、批与批之间的均匀度有差异;建立了用于快速鉴别的近红外一致性检验模型,可用于"一厂一品一规一模"的快速鉴别。结论该品种现行标准基本可行,质量控制较好,但存在产品均一性问题。建议对多潘立酮片深入开展体外生物利用度再评价,制订更加严格的溶出度试验,以提高其生产工艺水平。

磺胺嘧啶麻黄碱滴鼻液定性定量方法研究

目的研究磺胺嘧啶麻黄碱滴鼻液的定性定量方法。方法采用化学反应法及HPLC法定性定量鉴别处方中的磺胺嘧啶及盐酸麻黄碱。采用HPLC法测定磺胺嘧啶及盐酸麻黄碱的含量,色谱柱为Hibar RP-18endcapped（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为磷酸盐缓冲液（pH值为3.0±0.1）-乙腈（90∶10）,流速1.0mL·min-1,检测波长210 nm。结果化学反应和HPLC法均能定性鉴别磺胺嘧啶及盐酸麻黄碱。磺胺嘧啶和盐酸麻黄碱分离良好;进样浓度分别为99.96-299.88μg·m L^-1（r=0.999 8,n=5）和19.86-59.58μg·m L^-1（r=0.999 9,n=5）与峰面积呈良好的线性关系。磺胺嘧啶和盐酸麻黄碱的平均回收率在98.0%-100%,RSD均〈1.2%（n=3）。结论本方法简便、快速、准确,重复性好,可用于磺胺嘧啶麻黄碱滴鼻液的质量控制。

把手引导曲线设计方法研究

针对把手引导曲线设计过程中需要考虑联动、销轴直径、引导距离、引导高度等因素的影响,提出了一种基于参数化设计的引导曲线设计方法;在相对坐标系的基础上,通过公式推导及对法则曲线的应用,求解出引导曲线的精确结果;在建模软件中,直接将引导曲线应用于把手建模曲面设计,实现了引导曲线精确求解及与建模过程的无缝过渡。

HPLC法同时测定复方环丙沙星滴鼻液中三组分的含量

目的建立同时测定复方环丙沙星滴鼻液中盐酸麻黄碱、乳酸环丙沙星、马来酸氯苯那敏含量的HPLC方法。方法采用：PurospherSTAR RP-18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,以磷酸盐缓冲液（p H 3.0±0.1）-乙腈（82∶18）为流动相,调节流速为1.0 ml·min-1,在210 nm波长处同时检测3组分。结果盐酸麻黄碱、乳酸环丙沙星和马来酸氯苯那敏分别在20.14~161.12、12.05~96.38和6.18~49.47μg·ml-1浓度范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9996、0.9999和0.9999,平均回收率分别为101.11%、99.83%和101.07%。结论该方法快速简便、重复性、耐用性好,可用于该制剂中3组分的测定。

盐酸普鲁卡因注射液无菌检查方法的验证

盐酸普鲁卡因注射液是短效局部麻醉药，用于浸润麻醉、阻滞麻醉、蛛网膜下腔麻醉、硬膜外麻醉和封闭疗法等，亦可用于静脉复合麻醉。本品属于注射剂，为确保临床用药安全，《中国药典》2005年版规定需进行无菌检查。本试验按《中国药典》2005年版二部所载“无菌检查法”，验证并建立盐酸普鲁卡因注射液的无菌检查方法。