T1和T2期直肠癌淋巴结转移规律及其影响因素研究

目的阐述T1和T2期直肠癌淋巴结转移规律及其影响因素,探讨直肠癌局部切除适应证。方法选择2002年1月—2012年12月浙江省立同德医院和浙江省海盐县中医院收治的并接受根治性手术的原发性T1和T2期直肠癌患者116例,回顾性分析其临床病理资料。结果本组116例直肠癌患者发生淋巴结转移24例,总淋巴结转移率为20.7%,T1、T2期患者淋巴结转移率分别为3.9%(2/51)、33.8%(22/65),T1期患者淋巴结转移率低于T2期患者(χ2=15.595,P<0.001)。单因素分析结果显示,肿瘤大体类型(χ2=6.839,P=0.033)、组织类型(χ2=7.756,P=0.005)、分化程度(χ2=46.039,P<0.001)和T分期(χ2=15.595,P<0.001)与淋巴结转移有关。二分类多元Logistic回归分析发现,肿瘤分化程度(OR=3.374)及T分期(OR=6.727)对回归方程的影响有统计学意义(P<0.05)。结论肿瘤分化程度和浸润深度是T1、T2期直肠癌发生淋巴结转移的最主要影响因素,对分化程度较高的T1期直肠癌可考虑局部切除。

冬凌草甲素联合吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞抑制作用的研究

目的探讨冬凌草甲素在体外联合吉西他滨对胰腺癌细胞株SW1990抑制作用及其可能机制。方法不同浓度的冬凌草甲素(0、10、20、40、80、160μmol/L)作用胰腺癌SW1990细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用;冬凌草甲素(40μmol/L)与吉西他滨(20μmol/L)单独及联合处理细胞48 h,并设立对照组,CCK-8法检测SW1990细胞的存活率;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR检测SW1990细胞中NF-κB和XIAP基因的表达水平。结果冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的增殖抑制作用呈明显的剂量与时间依赖性;与其他各组相比,冬凌草甲素联合吉西他滨组细胞存活率明显降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05);另外,联合组明显下调胰腺癌细胞中NF-κB和XIAP表达水平(P<0.05)。结论冬凌草甲素在体外能显著增强吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞的抗瘤效果,其机制可能是通过下调NF-κB及其下游XIAP的表达,进而诱导胰腺癌细胞的凋亡而实现。

冬凌草甲素对结肠癌LOVO细胞增殖和EMT影响的实验研究

目的探讨冬凌草甲素(oridonin,ORI)对结肠癌细胞株LOVO细胞增殖和上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的影响及可能的机制。方法不同药物浓度(0、2、4、8、12和16μg/m L)冬凌草甲素处理结肠癌LOVO细胞,不同时间点(24、48和72 h)采用CCK-8法观察细胞增殖情况,RT-PCR检测E-cadherin和Vimentin mRNA表达水平,Western blot检测磷酸化糖原合成酶激酶-3β(phospharylated glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)、β-catenin、E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平。结果冬凌草甲素对LOVO细胞增殖抑制率呈时间和剂量依赖性(均P<0.05)。4、8和12μg/m L冬凌草甲素作用48 h,增加LOVO细胞E-cadherin基因表达量,减少Vimentin的基因表达量(均P<0.05),也增加LOVO细胞p-GSK-3β(Tyr216)蛋白表达量,减少p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达量,同时下调β-catenin蛋白表达量(均P<0.05)。GSK-3β特定的抑制剂CHIR 2μmol/L作用1 h后,再加入12μg/m L冬凌草甲素共同作用24 h,能逆转冬凌草甲素对β-catenin、E-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响(均P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌LOVO细胞的生长增殖和EMT过程。

养阴润肠方调控水通道蛋白改善慢传输型便秘的疗效及机制研究

目的:探讨养阴润肠方治疗慢传输型便秘(STC)患者的临床疗效及分子机制。方法:80例STC患者被随机分为观察组和对照组,分别给以养阴润肠方和聚乙二醇散剂口服治疗,疗程21天。观察两组用药前后患者生活质量自评表、慢性便秘严重程度评分表、伴随其他次要临床症状等指标,以及临床疗效情况。荧光定量PCR检测AQP3和AQP8基因水平的表达;蛋白质印迹法检测AQP3和AQP8蛋白水平的表达。结果:疗程结束后两组便秘患者生活质量自评表、慢性便秘严重程度评分表以及伴随的其他次要临床症状等指标均有降低,且观察组减低更为显著,观察组和对照组的总有效率分别为87.5%和77.5%(P<0.05),停药2月后两组短期复发率分别为17.65%和50.00%(P<0.05);两组用药后AQP3和AQP8基因、蛋白表达量较用药前均增加(P<0.05),且观察组较对照组增加更为显著(P<0.05)。结论:养阴润肠方能降低STC的临床症状、提高近期疗效,其可能的机制与AQP3和AQP8的表达上调有关。

辣椒素对胰腺癌SW1990细胞作用的研究

目的:探讨辣椒素对胰腺癌细胞株SW1990细胞增殖的抑制作用及其可能的机制。方法:不同浓度的辣椒素(0,100,150,200,250,300μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞12,24,48 h后,CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用;辣椒素(0,150,200,250μmol·L-1)作用胰腺癌SW1990细胞24 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡细胞的比率,分光光度法检测Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3)酶活性,Western blot方法检测SW1990细胞中p38和p53蛋白水平表达。结果:辣椒素对胰腺癌细胞SW1990具有明显的生长抑制作用,并呈现时间、剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,细胞周期被阻滞在G1/G0期,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加;磷酸化的p38,p53蛋白的表达量增加。结论:辣椒素可通过阻滞G1/G0细胞周期和诱导凋亡抑制胰腺癌细胞SW1990的生长,其分子机制可能是通过上调p38及其下游p53的表达,并进一步激活Caspase-3,从而促进SW1990细胞发生凋亡。

冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的机制。方法 选取胰腺癌SW1990和Panc-1细胞株作为研究对象。采用细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况,蛋白印迹法检测内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)、环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-12(cleaved cystein aspartate specific proteinase-12,cleaved Caspase-12)、活化的(active)Caspase-3、cleaved Caspase-3、cleaved多腺苷二磷酸多聚酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]的蛋白表达水平,实时荧光定量RCR检测GRP78、CHOP、Caspase-12的m RNA表达水平。结果 冬凌草甲素浓度和时间相关性抑制SW1990和Panc-1细胞增殖,冬凌草甲素可诱导SW1990和Panc-1细胞凋亡,可增加SW1990细胞中cleaved Caspase-3和cleaved PARP的蛋白表达水平(P<0.05);进一步研究发现冬凌草甲素能上调GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA及GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12的蛋白表达水平,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。且在内质网应激抑制剂4-PBA的作用下,冬凌草甲素处理后细胞凋亡率和GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、active Caspase-3蛋白表达水平均被逆转,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草素对SW1990和Panc-1细胞的促凋亡作用依赖于内质网应激的激活,冬凌草甲素可通过激活内质网应激介导胰腺癌细胞凋亡,为冬凌草甲素治疗胰腺癌中的抗肿瘤活性研究提供了新的思路。