虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响

背景:虎杖多年来一直是烧伤、创伤创面愈合治疗方剂中的一味主药,因成分复杂,具体药理作用难以进一步研究,对于虎杖苷促愈合作用目前未见文献报道。目的:分析不同浓度虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响。方法:取烧伤后行瘢痕切除植皮4例患者剩余小中厚皮片,原代培养人成纤维细胞。用含有10-6,10-5,10-4,10-3,10-2mol/L不同浓度虎杖苷培养液作用第2代人成纤维细胞,未加虎杖苷的培养液作为对照。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;ELISA法检测上清中纤维结合蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果与结论:10-5、10-4mol/L组促进成纤维细胞增殖最明显,10-2mol/L组吸光度值显著下降,细胞生长受抑制。10-3mol/L组G1期细胞大幅度下降,细胞有S期阻滞现象。10-2mol/L组有明确的促凋亡作用。10-2mol/L组上清中Ⅰ、Ⅰ型胶原蛋白较其他各组显著增高(P<0.05);纤维结合蛋白较对照组显著增高(P<0.05),较其他各组有所下降(P<0.05)。说明低浓度虎杖苷有促进成纤维细胞增殖、保护细胞免于凋亡及促进纤维结合蛋白的表达与合成分泌的作用,促进成纤维细胞增殖的最适浓度应为10-5～10-4mol/L。

碱性成纤维细胞生长因子对培养的瘢痕成纤维细胞FN合成的调控作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成纤维细胞纤维连结蛋白(FN)合成的调控作用。方法采用细胞培养、ELISA法、RT-PCR方法观察bFGF在不同剂量下对瘢痕来源的成纤维细胞FN合成的影响。结果FN的表达在低bFGF浓度组与对照组无明显差异,随着浓度的升高表现为增高趋势,以50、100、500ng/m l最显著,与对照组之间有显著性差异(P<0.05)。FN mRNA表达在50-100ng/m l组明显升高,与对照组间有显著性差异(P<0.05)。mRNA表达趋势与上清中蛋白的表达具有一致性。结论高浓度bFGF刺激FN合成可能是bFGF促进创面愈合的重要原因。

瘢痕综合治疗方案治疗儿童手部瘢痕挛缩35例临床体会

【目的】探讨瘢痕综合治疗方案在儿童手部瘢痕挛缩临床治疗中的可行性及效果。【方法】选取2010年1月至2013年12月本院收治的35例儿童手部瘢痕挛缩患者作为研究对象，并对其实施瘢痕综合治疗方案（手术、支具及弹力套治疗、药物治疗、功能锻炼、定期门诊随访等），治疗方案持续6个月，连续随访1年，观察其效果。【结果】患儿及家属依从性良好，35例患儿均能按时复诊，患儿手部功能均恢复满意，无再手术。【结论】手术结合弹力套、支具及家长参与的功能锻炼等一系列瘢痕综合治疗方案，能最大限度恢复儿童手部功能，减少再手术，在儿童手部瘢痕挛缩治疗中可行性好、效果显著，值得临床推广。

外源性碱性成纤维细胞生长因子对创面愈合病理变化的影响

目的:探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在伤口愈合过程中可能的愈合机制以及对瘢痕形成的影响。方法:选用成年健康新西兰兔24只,建立兔耳创面愈合模型96个,随机分为bFGF治疗组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,观察平均愈合时间、瘢痕体积、组织学变化及超微结构。结果:①bFGF组与对照组愈合时间分别为(18．4±1．6)d、(21．3±1．4)d,两组之间有显著性差异(P＜0．05)。②bFGF组瘢痕体积明显小于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0．01)。③光镜观察,bFGF组在愈合期炎症反应、血管形成及成纤维细胞增殖更明显。在愈合后的瘢痕组织中,胶原纤维排列较规则。对照组炎症反应时间较长,胶原纤维较粗大,排列紊乱。④电镜下可见治疗组成纤维细胞胶原合成持续时间较短。肥大细胞与成纤维细胞紧密接触,调整愈合全过程。后期表皮与真皮间有部分基底膜重建;对照组成纤维细胞合成持续时间较长,未见有基底膜的重建。结论:在伤口愈合过程中,外源性bFGF通过对细胞的调控有效地发挥促愈合作用;同时,通过部分重建基底膜结构,改善瘢痕的形成。

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob last growth factor,bFGF)对瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:取术中切除的增生性瘢痕组织3例,以植块培养法进行成纤维细胞原代培养,取第2代用于实验。选用含1、5、10、50、100、500ng/mL不同浓度bFGF的培养液作用于细胞72h,以未加bFGF的培养液作为对照,并进行如下检测:①MTT法检测细胞增殖情况;②流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:①MTT显示,随bFGF浓度增高,OA值由0.1833±0.019递增至0.3432±0.041(P<0.05),且具有剂量依赖性。②流式细胞仪检测结果示:bFGF主要影响G1期,G1期细胞百分数随bFGF浓度增加由81.3%±3.24%递减至75.9%±1.21%。凋亡细胞百分比由7.2%±0.56%递减为2.3%±0.49%(P<0.05)。结论:bFGF可通过增加有丝分裂促进瘢痕成纤维细胞增殖,并有保护细胞免于凋亡的作用。

低分子肝素钙在岛状皮瓣静脉危象抢救中的临床应用

目的探讨应用低分子肝素钙和应用皮瓣放血、按摩法等措施在抢救岛状皮瓣静脉危象临床效果的比较。方法 73例岛状皮瓣静脉危象,应用低分子肝素钙皮下注射47例(Ⅰ组),26例应用皮瓣放血、按摩法(Ⅱ组)。应用低分子肝素钙后监测活化部分凝血酶时间测定(activated partial thromboplastin time,APTT),活化凝血因子Ⅹ(Ⅹa),活化凝血因子Ⅱ(Ⅱa)活性。结果应用低分子肝素钙皮瓣成活率为(87.46±8.54)%明显高于应用对照组(34.37±6.43%),P<0.001;APTT在应用低分子肝素钙前后(0、2、4 h)明显延长(24.28±6.71、41.35±7.64、32.34±6.35),P<0.01;Ⅹa活性在应用低分子肝素钙前后(0、2、4 h)明显降低(152.4±30.7、65.8±24.4、83.4±18.4),P<0.01;Ⅱa活性在应用低分子肝素钙(0、2、4 h)为(155.70±31.61、143.20±24.75、143.4±23.35,P=NS,没有明显差异。结论应用低分子肝素钙抢救岛状皮瓣静脉危象,可大大提高皮瓣成活率,且没有对患者全身凝血功能造成不良影响。

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白表达的影响(英文)

背景:碱性成纤维细胞生长因子能促进愈合伤口产生胶原蛋白、纤维连接蛋白和基质酶的基质成分。然而,细胞增殖、细胞外基质及新生血管的形成或伤口基质重塑过程失调,会导致瘢痕组织过度增殖。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中的作用。方法:从5例进行瘢痕修复手术患者身上同时取正常皮肤和增生性瘢痕组织,分离培养正常人皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞。应用RT-PCR和酶联免疫吸附法检测两种成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白基因表达和蛋白合成。采用JC-1染色和流式细胞术测定成纤维细胞线粒体膜电位改变,采用化学发光法检测细胞内ATP水平改变。观察碱性成纤维细胞生长因子对两种细胞的上述指标的影响。结果与结论:不同浓度碱性成纤维细胞生长因子可减慢增生性瘢痕成纤维细胞生长,抑制增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原表达和合成(P<0.05)。碱性成纤维细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞Ⅲ型胶原表达和合成均无影响。然而可上调正常皮肤成纤维细胞表达纤维连接蛋白(P<0.05)。此外,10,100μg/L碱性成纤维细胞生长因子处理后增生性瘢痕成纤维细胞线粒体膜电位呈去极化趋势,正常皮肤成纤维细胞中ATP水平显著增高(P<0.05)。结果表明,碱性成纤维细胞生长因子在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中可能有不同的作用和机制。

骨髓间充质干细胞对巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞分泌炎症因子IL-10、TNF-α的影响。方法体外分离、培养、鉴定骨髓间充质干细胞与巨噬细胞,分PBS、BMSCs、Macrophage、Macrophage+BMSC、BMSCs+LPS、Macrophage+LPS、Macrophage+BMSCs+LPS 7组进行细胞共培养实验。收集不同时间点培养基上清液,ELISA检测其炎症因子IL-10、TNF-α的含量。结果 B(BMSCs)组与E(BMSCs+LPS)组相比,IL-10与TNF-α的含量没有明显变化;F(Macrophage+LPS)组IL-10、TNF-α的含量均高于C组(Macrophage);G(Macrophage+BMSCs+LPS)组与F(Macrophage+LPS)组相比,TNF-α明显降低、IL-10明显升高。结论 BMSCs可以减轻LPS对巨噬细胞分泌炎症因子的刺激作用,减轻炎症反应的程度。

碱性成纤维细胞生长因子与瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的代谢

背景：研究证实碱性成纤维细胞生长因子有促进创面愈合的作用,然而其在促进创面愈合的同时是否会引起成纤维细胞的增殖而导致瘢痕增生已受到学者的广泛关注。目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成和降解的调控作用。方法：增生性瘢痕组织取自中山大学附属第一医院烧伤科行瘢痕整复术的患者,组织块法培养瘢痕成纤维细胞。取第2代细胞,采用氯胺T法、RT-PCR和Westernblot法检测不同浓度（0~500μg/L）碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕来源的成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及细胞基质金属蛋白酶1合成和分泌的影响。结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达均无促进作用。低质量浓度碱性成纤维细胞生长因子对细胞基质金属蛋白酶1的表达无明显影响,但随着质量浓度的升高表现为增高趋势,以50,100,500μg/L组增高最显著（P〈0.05或P〈0.01）。同时,细胞基质金属蛋白酶1的表达在细胞与上清中变化一致。说明高质量浓度碱性成纤维细胞生长因子可以通过增加细胞基质金属蛋白酶1的合成来促进胶原蛋白降解,从而避免细胞外基质的过度沉积。

腹腔镜大网膜轴型瓣转移修复乳腺癌术后胸部放射性溃疡

目的探讨乳腺癌术后胸部放射性溃疡新的有效外科治疗方法。方法 2011～2012年在本院住院治疗的乳腺癌术后胸部放射性溃疡3例,扩大切除溃疡、溃疡周围硬化组织以及坏死骨组织,腹腔镜获取大网膜轴型瓣转移填塞组织缺损,在大网膜组织表面移植自体皮肤,达到消灭创面、治疗乳腺癌术后放射性溃疡的目的。结果 3例患者治疗过程顺利,预后良好,术后随访11～18个月未见相关手术并发症。结论腹腔镜大网膜轴型瓣转移修复可以作为乳腺癌术后胸部放射性溃疡的一种有效治疗方法。

骨髓基质干细胞移植于皮肤全层缺损创面的动物模型

目的探讨建立适合骨髓基质干细胞移植于创面的动物模型,以研究骨髓基质干细胞在损伤修复中的作用机制。方法分离、培养、鉴定骨髓基质干细胞;在大鼠背部形成一4cm×4cm皮肤全层缺损创面;36只大鼠分3组(同种异体皮、脱细胞异种真皮、凡士林纱布)覆盖创面,将标记的P5代细胞移植于创面,观察覆盖物脱落时间、移植成活细胞数量。结果同种异体皮作为创面覆盖物比其他两组覆盖物脱落时间延长、成活细胞数量多;而脱细胞异种真皮覆盖物组又优于凡士林纱布覆盖物组。结论应用同种异体皮作为创面覆盖物能够较好地保护移植骨髓基质干细胞,成功构建一个创伤皮肤缺损模型用于研究骨髓基质干细胞的移植。

脂肪来源间充质干细胞移植对大鼠全层皮肤缺损的修复作用

目的探讨脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)移植在全层皮肤缺损修复中的作用。方法 25只SD大鼠制作大鼠背部全层皮肤缺损模型,随机分为3组,分别移植胶原膜(胶原膜组)、ADSCs+胶原膜(ADSCs+胶原膜组)后覆盖异体SD大鼠皮肤及直接以异体SD大鼠皮肤覆盖(空白对照组)。观察各组创口的愈合速度,并通过愈合皮肤抗拉力实验、HE染色、原位杂交的方法检测愈合后皮肤的抗拉性、组织学改变及ADSCs的表达。结果 ADSCs及胶原膜对大鼠一般情况无明显影响;ADSCs+胶原膜组创面愈合率为(94.24±3.13)%,显著高于空白对照组的(84.57±2.42)%及胶原膜组的(84.72±9.70)%,差异有统计学意义(P<0.05);ADSCs+胶原膜组皮肤的最大拉力、弹性位移和拉伸率与空白对照组及胶原膜组比较差异无统计学意义(P>0.05);ADSCs+胶原膜组皮肤真皮层中存在大量类似于正常皮肤的毛囊结构;在ADSCs+胶原膜组愈合创面皮肤组织中可追踪到雄性大鼠来源细胞的阳性表达。结论 ADSCs能促进大鼠全层皮肤缺损的修复。

层流洁净技术在烧伤治疗中的应用

目的探索层流洁净技术治疗大面积烧伤的价值。方法对室内空气及创面进行细菌培养;监测病房使用时间的细菌微粒数比较,各洁净级别杀菌率。不同级别地点细菌培养结果比较。结果千级以上层流病房细菌培养为“0”,与普通病房对照有较大差别,患者死亡率明显降低,疗程缩短,医疗费用下降,手术植皮及其他伤口均达Ⅰ期愈合,无交叉感染。结论层流洁净病房应用于烧伤治疗,疗效非常满意。

重组人酸性成纤维细胞生长因子临床应用观察

目的观察重组要酸性成纤维细胞生长因子对创面修复的影响和可能发生的毒副作用。方法将48例深Ⅱ°烧伤患者随机分为两组,治疗组外用aFGF,对照组外用bFGF,比较愈合时间及动态愈合率。观察治疗组用药过程中的不良反应。结果治疗组创面愈合时间为(16．36±3．56)天,对照组为(16．42± 4．33)天,两者愈合时间、愈合百分率比较无统计学差异。治疗组治疗前后未发现明确的毒副作用。结论 aFGF为临床促进创面愈合的又一良好选择。

骨髓基质干细胞与微粒皮组织促进皮肤缺损创面愈合的实验研究

目的探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)与微粒皮组织移植对皮肤缺损创面愈合的影响。方法分离、培养、鉴定雄性F344大鼠骨髓基质干细胞;在大鼠背部形成4cm×4cm皮肤全层缺损创面;48只雌性F344大鼠随机均分为4组,A组行骨髓基质干细胞注射+微粒皮组织创面移植,B组仅行微粒皮组织创面移植,C组仅注射骨髓基质干细胞,D组仅行生理盐水(0.5ml)创面注射。移植的微粒皮组织占1/4创面面积,注射5×106个BMSCs细胞。雌性Wistar大鼠异体皮覆盖创面。观察术后14d创面愈合率、创面愈合时间、创面收缩率,并行Y染色体检测,以观察骨髓基质干细胞在创面的成活增殖情况。结果A、B两组创面愈合率(分别为85.8%±3.5%、62.2%±4.4%)远高于C、D组(分别为30.4%±1.7%、30.0%6±1.3%),且A组显著高于B组(P<0.01),但C、D两组间比较没有显著性差异(P=0.898)。A、B两组愈合时间(分别为17.2±1.6、20.3±2.4d)明显短于C、D组(分别为23.1±1.3、25.2±1.5d),且A组明显短于B组,C组明显短于D组(P<0.01)。A、B两组收缩率(分别为36.9%±1.9%、39.6%±2.9%)明显小于C、D组(分别为92.5%±1.4%、92.4%±1.9%),且A组明显小于B组,而C、D两组的创面收缩率比较没有显著性差异。在A组、C组组织标本中可检测到数量不等的Y染色体阳性细胞。结论BMSCs可在移植创面成活,能够与微粒皮组织相互作用,促进创面愈合。

^(99m)Tc-亚甲基二磷酸骨扫描在确定开胸术后胸骨骨髓炎清创范围中的应用价值

目的探讨^(99m)Tc-亚甲基二磷酸(^(99m)Tc-methylene diphosphonate,^(99m)Tc-MDP)骨扫描在确定开胸术后胸骨骨髓炎清创范围中的应用价值。方法回顾性收集开胸术后胸骨骨髓炎患者67例,根据骨髓炎清创术前是否接受骨扫描检查分为骨扫描组和对照组,比较两组间胸骨骨髓炎的复发率是否具有差别。结果骨扫描组复发率较对照组明显降低,差异具有统计学意义(12.8%vs.56.3%,P=0.002)。结论胸骨骨髓炎清创术前采用骨扫描检查协助确定清创范围有利于彻底清创,减少骨髓炎复发,值得临床推广。

渗透性扩张器动物体内应用的安全性研究

背景:渗透性扩张器是内含甲基丙烯酸甲脂和N-乙烯基吡咯烷酮吸水性凝胶的自膨胀扩张器,植入机体后可通过吸附体液而缓慢膨胀。目的:通过大鼠皮下包埋实验,探讨渗透性扩张器在动物体内的近远期变化规律及组织相容性。方法:设计Wistar大鼠自身对照实验,将渗透性扩张器(样品)和高密度聚乙烯(对照品)分别植入大鼠皮下,观察术后创面愈合情况,渗透性扩张器植入不同时间的扩张情况及其在大鼠体内的炎症反应。结果与结论:所有大鼠术后创面均Ⅰ级甲等愈合;渗透性扩张器植入大鼠体内第1周膨胀速度最快,4周时可膨胀至原始体积的9倍,4周后膨胀速度逐渐减慢,至12周体积约为原始体积的10倍,而后维持此体积不变;病理切片显示,渗透性扩张器植入后的炎症反应与高密度聚乙烯组比较差异无显著性意义(P>0.05),说明渗透性扩张器具有缓慢持久的吸水膨胀能力及良好的组织相容性。

外用重组人表皮生长因子凝胶对供皮区创面愈合作用疗效观察

目的:观察外用重组人表皮生长因子凝胶在供皮区创面愈合中的作用。方法:供皮区创面60例随机分为重组人表皮生长因子外用组(实验组,30例,用重组人表皮生长因子凝胶均匀涂抹)和空白凝胶组(对照组,30例,用空白凝胶均匀涂抹),观察创面愈合情况。术后3个月随访瘢痕增生情况。结果:实验组创面愈合时间明显短于对照组(P<0.05),瘢痕增生也较对照组轻(P<0.05)。结论:外用重组人表皮生长因子凝胶能缩短供皮区创面愈合时间,减少近期瘢痕增生。

双向排斥反应联体动物模型的建立

目的探讨在异基因成年小鼠之间建立联体模型用以研究双向排斥反应。方法54只雄性C57BL/6(H-2b,C57)小鼠和54只雌性Balb/c(H-2d)小鼠配对分为3组:1组(注射生理盐水)、2组(注射脾细胞+环磷酰胺)、3组(注射脾细胞+环磷酰胺+环孢素A)。于术中经尾静脉注入对方的脾细胞;术前3d和术后1周每日分别腹腔注射环孢素A(30mg·kg·d-1);术后2d腹腔注射环磷酰胺(150mg/kg)1次。对经以上处理的部分联体小鼠在术后1周后分开,相互植皮。观察联体维持时间,并分别检测其混合淋巴细胞反应和诱导迟发型超敏反应(DTH)。结果第3组联体时间明显延长;第3组联体小鼠DTH,2、3组显示明显抑制,但3组小鼠抑制程度明显比第2组小鼠深。结论应用免疫抑制剂,可成功建立双向排斥反应联体动物模型。

烧伤患者血浆NT-proBNP和预后的关系分析

目的：探讨烧伤患者血浆N-末端脑利钠肽（ NT-proBNP）的变化对患者预后的评估价值。方法对39例严重热烧伤患者的临床资料进行回顾性分析。其中男33例，女6例；烧伤面积30％～98％体表面积，平均（65.5％±23.68％）；年龄19～72岁，平均（36.8±16.8）岁。观察39名患者心力衰竭情况、血浆NT-proBNP、肌钙蛋白I（cTnT）、心功能和患者的预后情况。结果9例出现心力衰竭的烧伤患者 NT-proBNP是（1676.03±2190.41） pg/L，其中3例患者死亡。30例没有出现心力衰竭的烧伤患者NT-proBNP是（196.97±104.39）pg/L，其中1例患者死亡。心衰组与无心衰组两组死亡率差异有显著性意义（ p＜0.01）。结论严重烧伤患者合并出现心力衰竭死亡率高，NT-proBNP能很好地评估严重烧伤患者的预后。