齐帕特罗残留检测酶联免疫吸附试验方法的建立及优化

为建立检测齐帕特罗(ZIL)残留物的间接竞争酶联免疫吸附试验(ic-ELISA),以获得的抗ZIL兔多抗血清为基础,以制备的完全抗原为包被源,通过优化反应条件,建立了检测ZIL残留物的ic-ELISA检测方法。结果表明,兔血清最佳稀释比例为1∶6000,抗原最佳包被浓度为2μg/mL,半数抑制浓度(IC 50)为0.317 ng/mL,线性检测范围(IC 20~IC 80)为0.136~1.181 ng/mL,最低检测限(LOD,IC 10)为0.081 ng/mL。经优化后,检测体系最佳pH为7.4,盐浓度≤0.4 mol/L,甲醇、乙醇、丙酮和和DMSO的含量≤5%,乙腈含量≤10%,且检测基质中牛尿液浓度≤15%时能够获得较高的检测灵敏度,并且该检测方法具有良好的稳定性和特异性,批内和批间重复试验样品添加回收率分别为101%~112%和101%~120%,变异系数均低于10%,检测结果与HPLC-MS检测结果的相关系数为R 2=0.9906。该检测方法检测速度快、灵敏度强、准确性高、重复性好、检出限低,适用于ZIL残留的高通量检测和现场快速筛查。

齐帕特罗人工抗原合成及其多克隆抗体制备

为制备齐帕特罗(ZIL)完全抗原,获得抗ZIL多克隆抗体(pAb),将ZIL与4-溴丁酸乙酯反应后,采用EDC/NHS方法使ZIL-丁酸盐中间体与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别用紫外全波长扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定后,通过免疫新西兰大白兔获得抗ZIL多抗血清,并对抗体效价、半数抑制浓度(IC_(50))和特异性进行鉴定。HPLC-MS检测结果显示,改造后的主产物分子质量为348.21 u,约占整个反应体系产物的92.23%,与ZIL-丁酸盐分子质量完全相符;SDS-PAGE电泳结果显示,BSA/OVA在电泳中的迁移速率明显大于偶联产物;UV结果显示,相比载体蛋白,偶联产物ZIL-BSA/OVA的特征吸收峰均发生了明显变化;ELISA效价检测结果表明,ZIL多抗血清效价在1∶6400以上,通过建立标准曲线测得IC_(50)分别为0.38 ng/mL和1.13 ng/mL,并且与沙丁胺醇(SAL)、特布他林(TBL)、溴布特罗(BRO)、西马特罗(CIM)、克仑特罗(CLB)、盐酸多巴胺(DH)、莱克多巴胺(RAC)、达氟沙星(DAN)、泰乐菌素(TYL)均不存在任何交叉反应。成功制备了ZIL完全抗原ZIL-BSA/OVA,获得了一种高灵敏度和高特异性的抗ZIL pAb,为后续建立ZIL免疫学快速检测方法奠定了基础。

长链非编码RNA对免疫功能的调控作用研究进展

免疫系统中基因的精确表达和调控是生物体产生对病原体强大免疫能力及限制自身免疫的重要因素。越来越多的研究表明,长链非编码RNA(lncRNA)与免疫功能密切相关,能够通过调控免疫细胞分化发育以及免疫细胞效应功能参与免疫反应的调节。论文结合lncRNA调控作用的分子机制,阐述相关lncRNA在免疫应答和免疫调节过程中发挥的生物学效应,以期为从事lncRNA调控免疫应答机制研究提供参考。

齐帕特罗检测方法研究进展

齐帕特罗(zilpaterol,ZIL)是β2肾上腺素受体(β2-adrenergic receptors,β2AR)激动剂的一种,被动物食用后,可以明显增加动物的胴体瘦肉率,提高生长速率,减少饲料消耗。经美国、加拿大、巴西、哥伦比亚等15个国家批准用于牛的饲料添加剂,给全世界食品安全带来严重威胁。目前,食品安全检测技术较低是影响我国食品安全现状的重要原因。因此,建立有效、快速、简便、高灵敏度的食品污染物检测方法是当务之急。文章综述了当前针对ZIL残留检测方法研究进展的同时,结合ZIL生物学效应及其残留特性等,指出目前关于ZIL残留检测存在的问题及在检测方面的未来发展方向,旨在为进一步建立高灵敏度的快速检测方法提供科学依据,同时为进一步丰富我国食品安全检测技术体系,提高我国食品安全检测水平和检测速度提供理论基础。