α-磷酸甘油脱氢酶的提纯及性质的研究

应用液-液双水相提取、DEAE-纤维素层析及SIPI-I红色染料配基层析等方法提纯兔肌匀浆粗提取液中的α-磷酸甘油脱氢酶,其比活15u/mg蛋白,为原酶的50倍,总收率约50％。并对其分子量、米氏常数、酶作用的最适pH、最适温度,对pH和热的稳定性等性质作了测定。

甘油激酶的纯化与性质的研究

由嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus SIPI1.687)的粗提取液,经液-液双相抽提、DEAE-Toyopearl 650 M 离子交换柱层析及 SIPI-Ⅱ蓝色(?)料配基层析等分离提纯,可得甘油激酶(81U/mg),PAGE 鉴定为单带。用 Sephacryl 400凝胶过滤测得分子量为209,000道尔顿,SDS-PAGE 测定结果表明该酶由四个分子量均为50,000道尔顿的相似亚基组成。酶作用最佳 pH 9.4,pH 5.8~11.2时稳定;最佳温度为50℃,有较好的热稳定性。以甘油为底物时米氏常数为6.25×10M。

大肠杆菌碱性磷酸单酯酶的纯化研究

大肠杆菌的粗提取液经正丁醇提取、酸沉淀、硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析和交联葡聚糖 G-200凝胶过滤,所得碱性磷酸单酯酶,比活106u/mg 蛋白,酶活力的总回收率为54.3%,纯化倍数为18.8倍,以 SDS-PAGE 鉴定呈单带。对其分子量和亚基分子量、酶作用最佳 pH 和温度、米氏常数等进行了测定。

国产染料配基层析介质分离纯化甘油激酶α-磷酸甘油脱氢酶和心肌黄酶

以国产Sepharose 4 B和活性染料制备的YS一Ⅱ染料配基层析介质,分离提纯了甘油激酶、α-磷酸甘油脱氢酶和心肌黄酶,可使纯度分别提高6.6、2.9和3.3倍,收率为83.3、43.6和81.9%,所含的NADH 氧化酶和乳酸脱氢酶几乎全部可除去,各酶冻干后在10℃存放可稳定半年以上。所得的上述三个酶与自制的脂酶可组成血清甘油三酯酶联试剂盒。

皱落假丝酵母脂酶发酵及分离纯化工艺的研究

在皱落假丝酵母SIPI2.230发酵时,如在培养基中加入少量吐温-80及脂类物质,可使脂酶发酵单位从原来的1.6u/ml提高到100u/ml。脂酶提纯时,采用DEAE-纤维素搅拌吸附与洗脱、Bulyl-Toyopearl650 M疏水层析及交联葡聚糖G-100凝胶过滤层析工艺,可提高酶纯度66.8倍。

甘油激酶纯化工艺的改进研究

由嗜热脂肪芽胞杆菌(BacillusStearothermophilus SIPl1.687)的菌体,经细胞破壁,酸沉淀,DEAE-Toyopearl 650M离子交换层析及ys-Ⅱ染料配基层析等分离提纯,酶的回收率为35.5％,比活30.8u/mg蛋白,纯化倍数16.5倍,SDS-PAGE鉴定为单带,并除去了几乎所有的NADH氧化酶,由此纯化的酶经冷冻干燥后,10℃存放11个月活力未见明显损失,与其它自制的三个酶可组成测定血清甘油三酯酶联试剂盒,甘油三酯浓度在60—960mg/dl内呈直线并过原点。

皱落假丝酵母脂酶的研究Ⅱ.酶的性质的研究

对来源于皱落假丝酵母(Candida rugosa)SIPI2.230的脂酶的性质,进行了较为系统的研究,发现该酶能在常温下于短时间内完全水解底物为甘油和脂肪酸,可用于酶联试剂盒测定血清甘油三酯。