目的探讨泛素样含PHD和环指结构域1(Ubiquitin like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1)在肺腺癌(Lung adenocarcinoma)细胞的增殖、自噬中的作用及其潜在机制。方法通过生物信息学网站(TCGA)检测UHRF1在肺腺癌组织中的表达。qR...目的探讨泛素样含PHD和环指结构域1(Ubiquitin like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1)在肺腺癌(Lung adenocarcinoma)细胞的增殖、自噬中的作用及其潜在机制。方法通过生物信息学网站(TCGA)检测UHRF1在肺腺癌组织中的表达。qRT-PCR和Western blot检测肺腺癌细胞系(PC-9、A549和H1299)以及人支气管上皮细胞(16HBE)中UHRF1的表达。转染UHRF1-shRNA后,采用CCK-8、克隆形成以及Ki-67检测肺腺癌A549细胞活性和增殖能力的改变;蛋白免疫印记检测自噬相关LC3-I/II、Beclin-1蛋白以及增殖相关蛋白CDK6、Rb和PCNA蛋白的变化;透射电镜观察敲除UHRF1后A549细胞中对于自噬小体的影响。结果在肺腺癌患者组织中UHRF1表达明显高于癌旁组织,而相对于正常的支气管上皮细胞16HBE,肺腺癌细胞系A549与H1299中UHRF1的mRNA和蛋白水平均明显升高。此外,CCK-8法和克隆形成实验表明沉默UHRF1能够降低肺腺癌细胞系A549的生长效率。Ki-67免疫荧光法检测结果显示敲除UHRF1后A549细胞增殖能力相对于正常对照组明显降低。此外我们发现,敲除UHRF1导致CKD6和PCNA蛋白水平相对于Control-siRNA组表达升高,而Rb蛋白表达下调。我们同时还发现,沉默UHRF1后能够提高LC3-II/LC3-I的比例,诱导Beclin-1的表达上调。沉默UHRF1促进A549细胞中自噬小体的形成。结论 UHRF1在肺腺癌中高表达,沉默UHRF1能够发挥抑制增殖的作用。而这种作用可能是通过促进细胞自噬产生的。展开更多
文摘目的探讨泛素样含PHD和环指结构域1(Ubiquitin like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1)在肺腺癌(Lung adenocarcinoma)细胞的增殖、自噬中的作用及其潜在机制。方法通过生物信息学网站(TCGA)检测UHRF1在肺腺癌组织中的表达。qRT-PCR和Western blot检测肺腺癌细胞系(PC-9、A549和H1299)以及人支气管上皮细胞(16HBE)中UHRF1的表达。转染UHRF1-shRNA后,采用CCK-8、克隆形成以及Ki-67检测肺腺癌A549细胞活性和增殖能力的改变;蛋白免疫印记检测自噬相关LC3-I/II、Beclin-1蛋白以及增殖相关蛋白CDK6、Rb和PCNA蛋白的变化;透射电镜观察敲除UHRF1后A549细胞中对于自噬小体的影响。结果在肺腺癌患者组织中UHRF1表达明显高于癌旁组织,而相对于正常的支气管上皮细胞16HBE,肺腺癌细胞系A549与H1299中UHRF1的mRNA和蛋白水平均明显升高。此外,CCK-8法和克隆形成实验表明沉默UHRF1能够降低肺腺癌细胞系A549的生长效率。Ki-67免疫荧光法检测结果显示敲除UHRF1后A549细胞增殖能力相对于正常对照组明显降低。此外我们发现,敲除UHRF1导致CKD6和PCNA蛋白水平相对于Control-siRNA组表达升高,而Rb蛋白表达下调。我们同时还发现,沉默UHRF1后能够提高LC3-II/LC3-I的比例,诱导Beclin-1的表达上调。沉默UHRF1促进A549细胞中自噬小体的形成。结论 UHRF1在肺腺癌中高表达,沉默UHRF1能够发挥抑制增殖的作用。而这种作用可能是通过促进细胞自噬产生的。