生物化学实验教学模式的优化

近年来,中国药科大学生物化学教研室在教学方法和手段、教学内容、成绩评估方式和教学资源等方面,对药学专业生物化学实验课程的教学进行了系列改革,取得显著成果。通过优化教学模式、构建课程新体系,提高了学生的科研素质和能力,为培养高质量药学人才奠定了基础。

纤维素类肠溶包衣材料的应用

纤维素类聚合物是非常重要的药用辅料。本文介绍了近年来纤维素类肠溶包衣材料的研究概况 ,包括其结构、理化性质、合成策略以及在包衣中的简单和特殊应用 。

气相色谱-负化学源质谱法测定蜂蜜和王浆中4种杀虫剂的残留

建立了气相色谱-负化学源质谱（GC-NCI/MS）测定蜂蜜和王浆中4种杀虫剂残留量的方法。蜂蜜样品由乙酸乙酯提取、乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）净化,而王浆样品经乙腈-水（1∶1,v/v）提取、C18固相萃取柱净化,采用GC-NCI/MS测定,外标法定量。结果表明：在50-500μg/L范围内4种农药的线性良好;所有农药的LOD在0.12-5.0μg/kg之间,LOQ在0.40-16.5μg/kg之间;在10、15、20μg/kg 3个添加水平下,4种农药的平均回收率在78.2%-110.0%之间,且RSD均小于14%。所有农药的测定均没有出现干扰峰。该方法简单、快速,准确度、精密度和选择性高,抗干扰能力强,可用于蜂蜜和王浆中这4种农药的快速检测。

降压中药有效成分组合对大鼠胸主动脉的舒张作用

目的研究杜仲、钩藤、葛根、决明子4种中药有效成分的单组分及其组合物对大鼠胸主动脉的舒张作用,筛选出最佳组合。方法从杜仲皮中提取降血压有效成分松脂醇二葡糖苷(PDG),钩藤中提取钩藤碱,葛根中提取葛根素,决明子中提取决明子蒽醌,以大鼠胸主动脉环为标本,观察单组分及组合物对去甲肾上腺素(NE)预收缩的血管舒张作用。结果 PDG、钩藤碱、葛根素和决明子蒽醌为2∶4∶4∶1时对NE预收缩的大鼠胸主动脉环舒张作用较明显,组合比例为1∶2∶2∶1在高质量浓度时血管舒张率为91.46%,强于阳性对照药维拉帕米。结论单组分及组合物对NE预收缩的大鼠胸主动脉均具有舒张作用,组合物舒血管作用强于单组分。

积累5-甲基四氢叶酸双抗突变株的选育及条件优化

目的选育积累5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)的双重药物抗性高产突变株,探讨发酵时间和温度对叶酸积累形式的影响。方法紫外线和EMS联合诱变;磺胺、甲氨蝶呤药物培养基筛选菌株;单因素实验检测发酵条件对叶酸积累形式的影响;HPLC检测叶酸含量和存在形式。结果获得稳定性良好的抗性突变株,其叶酸产量是原始菌株的2.2倍。适合5-MTHF积累的发酵时间为16 h,积累量为68.94μg/g干菌。结论抗性突变株能提高菌株产叶酸能力,5-MTHF含量受发酵时间影响大,而发酵温度对产物形式和产量影响不显著。

牛膝总皂苷对大鼠离体胸主动脉环舒张作用的机制研究

目的研究牛膝总皂苷(ABS)对大鼠离体胸主动脉血管环舒张作用及其作用机制。方法采用累积加药法,通过观察ABS对去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的血管环张力的影响,并观察几种抑制剂对其作用的影响。结果 ABS对NE预收缩的内皮完整和去内皮血管环均有舒张作用,L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、亚甲蓝(MB)、吲哚美辛(INDO)能显著减弱ABS诱导的血管环舒张作用;钾离子通道阻滞剂对ABS的舒血管效应有明显抑制作用(P<0.05);ABS对KCl预收缩的血管环有良好的舒张作用。结论 ABS的舒血管作用与NO介导途径有关,同时与钾离子通道的开放及血管平滑肌细胞上受体依赖性钙通道和电压依赖性钙通道有关。

催化合成谷胱甘肽的基因工程菌的构建及表达

目的利用基因工程菌合成谷胱甘肽。方法克隆γ-谷氨酰转肽酶,构建重组质粒pET30a-GGT,乳糖诱导融合蛋白的表达,利用pET30a-GGT/E.coliBL21和pET32a-GSH-II/E.coliBL21分两步法合成γ-谷氨酰半胱氨酸与谷胱甘肽。结果工程菌的最佳乳糖诱导条件为:浓度3mmoL.L-1、时间6h、温度28℃。工程菌经最佳条件诱导后,γ-谷氨酰转肽酶的酶活大约是出发菌株E.coliDH5α的21倍,酶活力得到明显提高,谷胱甘肽的产量达到0.524g.L-1。结论成功地为今后利用基因工程菌催化合成谷胱甘肽寻找到一种新的方法 。

基因工程法生产L-5-甲基四氢叶酸的研究

目的在E.coli BL21(DE3)中表达5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR),并检测MTHFR的表达情况及L-5-甲基四氢叶酸的增加量。方法采用PCR法获得MTHFR基因(metF)全长DNA,分别在其5'端和3'端加上BamHⅠ和SacⅠ酶切位点。经BamHⅠ和SacⅠ双酶切后,连接到经同样双酶切的表达载体pET-28a(+)中,经限制性酶切、菌落PCR和测序验证正确后,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测MTHFR表达量,HPLC检测L-5-甲基四氢叶酸量。结果经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pET28a-MTHFR构建成功,表达产物相对分子质量约为33 000,与MTHFR大小相符,工程菌的L-5-甲基四氢叶酸的产量显著增加。结论通过将MTHFR的基因导入L-5-甲基四氢叶酸产生菌能够提高L-5-甲基四氢叶酸产量。

探索生命科学与技术学院本科生专业英语教学新思路

依托抗白血病药物大肠杆菌左旋门冬酰氨酶研究课题,初步建立适合生命科学与技术学院本科生的专业英语教学模式,探索适合生命学科发展的专业英语教学新思路。

开放实验教学探索之“牛奶中酪蛋白的提取及检测”

选拔大学一、二年级不同专业本科生,通过"牛奶中酪蛋白的提取及检测"开放实验,分别从脱脂牛奶和全脂牛奶中用盐析法提取酪蛋白,在不同干燥时间下(0h、16h、72h)称重比较粗制品收率。通过此系列实验指导学生查阅文献、设计实验方案以及列出操作中可能出现的问题、注意事项,理解科研的意义,认识到研究性实验与教学性验证实验的不同。掌握并拓展了相关理论知识,为培养大学生科技创新能力积累经验。

吡柔比星的分离与纯化

目的确定用硅胶柱层析纯化吡柔比星粗品的工艺条件。方法采用薄层层析-硅胶柱层析法考察不同展开剂的层析效果,最优洗脱剂为二氯甲烷-甲醇;以吡柔比星的回收率和平均含量为评价指标,考察了流速、进样量与层析柱再生条件对层析粗分和精分的影响。结果硅胶柱层析粗分吡柔比星的最佳工艺条件:以梯度洗脱方式洗脱,洗脱剂流速5.0mL.min-1,上样量16.6mg.mL-1柱体积,0.5g.L-1氢氧化钠溶液离线再生硅胶。吡柔比星质量分数经粗分后由原来的35.7%提高到90%左右,回收率为96.2%。硅胶柱层析精分吡柔比星的最佳工艺条件为洗脱剂二氯甲烷-甲醇比例为90∶10,流速3.5mL.min-1,上样量16.6mg.mL-1柱体积,甲醇再生3倍柱体积。吡柔比星质量分数经精分后由粗分的90%提高到99.6%左右,回收率为97.5%。结论硅胶柱层析纯化吡柔比星所得产品符合质量要求。

MIP-SERS技术快速检测中药中非法添加的茶碱

建立了分子印迹技术(MIP)与表面增强拉曼光谱(SERS)联用对中药中非法添加的茶碱成分快速检测的方法。基于沉淀聚合方法合成MIP微球,对复杂中药基质中的茶碱进行简单分离,采用SERS对MIP中吸附的茶碱进行定性检测。实验利用SEM,FT-IR对MIP结构表征,考察了MIP的热力学、动力学和选择性吸附能力,以及掺杂成分的检出限。结果表明,MIP比NIP对茶碱具有更好的特异性吸附和选择性,该方法对茶碱的检出限低至0.1μg/L。方法用于5种止咳平喘类中药的检测,其中1种中药检出非法添加了茶碱成分。该法灵敏度高,特异性强,无需前处理,简单快速,实现了掺伪中药中茶碱的快速检测,有望进一步应用于其他复杂基质体系。

硅胶对吡柔比星的吸附热力学和吸附动力学研究

吡柔比星（pirarubicin，THP．ADM）是在阿霉素的4’-O-位上引入四氢吡喃基的半合成蒽环类抗肿瘤抗生素。吡柔比星对急性白血病、恶性淋巴瘤、头颈癌、尿路上皮癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、胃癌等有显著疗。吡柔比星的心肌毒性、骨髓抑制作用、脱发、胃肠道反应等不良反应比同类抗生素小，具有很高的临床应用价值。

黄芩苷对离体大鼠胸主动脉的舒张作用及机制

研究黄芩苷对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用并探讨其可能的机制。记录去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的大鼠离体主动脉环张力变化,观察黄芩苷的舒血管作用及不同工具药对其影响。实验发现黄芩苷对NE和KCl引起的去内皮和内皮完整大鼠胸主动脉环的收缩均有舒张作用;L-硝基精氨酸甲酯、亚甲蓝不能抑制黄芩苷对大鼠胸主动脉环的舒张作用,吲哚美辛能显著抑制;钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶、四乙基胺、BaCl2不能抑制黄芩苷对胸主动脉环的舒张作用,格列苯脲能抑制黄芩苷的舒张作用;无钙环境下,黄芩苷预处理对NE收缩有明显抑制作用。因此,黄芩苷具有浓度依赖性血管舒张作用,此作用具有内皮依赖性和非内皮依赖性特点,内皮依赖性收缩可能与前列环素途径有关,非内皮依赖机制可能与KATP通道及钙离子通道有关。

菌体中L-5-甲基四氢叶酸的HPLC法检测

目的:建立高效液相色谱法测定菌体中L-5-甲基四氢叶酸(L-5-MTHF)的方法。方法:加热法破碎细胞,强碱性阴离子交换树脂纯化,高效液相色谱柱为C18反向柱,流动相为K2HPO4(0.02 mol.L-1,pH7.2)-甲醇(84∶16)溶液,流速为1.0 mL.min-1,柱温为40℃,检测波长为290 nm。结果:L-5-MTHF在0.5～50μg.mL-1范围内线性良好,r=0.999 5,RSD为1.11%。结论:色谱法灵敏、准确、重现性好,可用于菌体中L-5-甲基四氢叶酸的定性与定量。

天麻素对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用及其机制

目的:研究天麻素对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用并探讨其可能的机制。方法:记录去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的离体大鼠主动脉环张力变化,观察天麻素的舒血管作用及不同工具药对其作用的影响。结果:天麻素对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol.L-1)和KCl(6×10-2mol.L-1)引起的去内皮和内皮完整胸主动脉环的收缩均有舒张作用,二者没有显著差别;L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol.L-1)、亚甲蓝(MB,1×10-5mol.L-1)、吲哚美辛(INDO,1×10-5mol.L-1)并不能抑制天麻素对胸主动脉环的舒张作用;钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol.L-1)、四乙基胺(TEA,1×10-3 mol.L-1)、格列苯脲(glibenclamide,1×10-5mol.L-1)、BaCl2(1×10-4mol.L-1)均能抑制天麻素对血管环的舒张作用;在无钙环境下,预孵育天麻素对去甲肾上腺素收缩有明显抑制作用。结论:天麻素有浓度依赖性的血管舒张作用,此作用不依赖血管内皮,与钾离子通道及抑制血管平滑肌细胞内质网储存钙的释放和外钙内流有关系。

杜仲降血压成分的组合及血管舒张作用

目的:对杜仲降血压有效成分进行组合,研究单组分及组合物对大鼠胸主动脉的舒张作用。方法:从杜仲皮中提取降血压有效成分松脂醇二葡糖苷,绿原酸,京尼平苷,京尼平苷酸,槲皮素,芦丁,桃叶珊瑚苷,以大鼠胸主动脉环为标本,观察单组分以及各组分两两组合后对NE预收缩的血管舒张作用。结果:实验表明,组合后有效成分的舒血管作用较单个组分明显。结论:松脂醇二葡糖苷和槲皮素在组合比例为1∶1时,其血管舒张作用最好。

降压中药有效组分配伍对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用

目的:研究天麻素、黄芩苷、川芎嗪、葛根素4种中药有效单体及其组合对大鼠胸主动脉的舒张作用,筛选出最佳组合。方法:以大鼠胸主动脉环为标本,观察单组分及组合物对去甲肾上腺素(NE)预收缩的血管舒张作用。结果:天麻素、黄芩苷、川芎嗪、葛根素单体存在浓度依赖性的舒张血管效应。正交实验结果显示天麻素(0.64 g.L-1)、黄芩苷(0.12 g.L-1)、川芎嗪(0.32 g.L-1)、葛根素(0.64 g.L-1)是最优组合,舒张率达到89.37%。结论:单组分及组合物对NE预收缩的大鼠胸主动脉均具有舒张作用,组合配伍强于单组分。

杜仲降压组分对大鼠胸主动脉的舒张作用

分离纯化得杜仲5种降压成分。以SD大鼠的胸动脉条为标本,对比杜仲的各种降压成分单独在不同浓度水平下及它们之间正交组合之后舒张血管的效果与杜仲的水提物有何差异。实验结果表明,杜仲中各种降压成分及其组合都有不同程度的舒张率,很多组分组合后还超过了杜仲的水提浸膏在中剂量下的舒张率。其中各组分单独进样时以京尼平苷和京尼平苷酸这两种组分舒张率的值最大,组合进样时以绿原酸(0.25mg/ml)加京尼平苷(1.0mg/ml)加京尼平苷酸(0.5mg/ml)加木脂素(0.25mg/ml)这种组合舒张率最大,有显著舒张血管的效果。

中药单体组合的血管舒张作用研究

目的比较钩藤碱、葛根素、天麻素、黄芩苷单体及组合物对血管的舒张作用,为中药组分结合研究提供实验依据。方法以大鼠胸主动脉为对象,分别考察钩藤碱、葛根素、天麻素、黄芩苷单体和组合物对去甲肾上腺素预收缩血管的舒张作用。结果 6种组合物中,天麻素和葛根素的比例为1∶1时血管舒张效果最强。结论组分结合后,舒血管效果较单体有了明显提高,提示组分结合理论研究具有一定的意义。