猪链球菌2型硫氧还蛋白还原酶介导细菌应激与致病作用

【背景】硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TRR)是硫氧还蛋白系统关键组成部分,对病原菌应对体内外氧化应激、调节细菌稳态和介导致病过程具有重要作用。【目的】探究硫氧还蛋白还原酶TRR在人畜共患猪链球菌2型感染过程中参与的生物学效应。【方法】同源重组法构建猪链球菌2型硫氧还蛋白还原酶trr基因缺失株(Δtrr)及回补株(cΔtrr),通过细菌染色、点板计数、体外细胞和动物感染模型等试验比较分析trr基因对细菌形态、抗应激反应及致病过程的影响。【结果】缺失trr对猪链球菌2型形态与生长特性的影响不大,但可增强细菌抗热应激、氧化应激和酸应激能力,缺失株对上皮细胞黏附力下降,侵袭进入脑血管内皮细胞作用显著降低,易于被吞噬细胞吞噬清除,对小鼠模型致病效应显著减弱。【结论】猪链球菌2型TRR因子参与细菌应激反应,介导细菌黏附、侵袭等致病过程,是猪链球菌2型新的潜在毒力因子。

猪链球菌2型硫氧还蛋白还原酶多克隆抗体制备与亚细胞定位分析

目的制备猪链球菌2型(Streptococcus suis,SS2)硫氧还蛋白还原酶(SsTrxR)抗体,分析其在SS2中的定位。方法对猪链球菌2型trxR基因进行生物信息学分析,PCR扩增TrxR基因,酶切、连接,构建重组表达载体pET30a-trxR。IPTG低温诱导表达SsTrxR重组蛋白,镍柱亲和纯化目的蛋白。皮下接种SsTrxR至日本大耳白兔,获取多克隆抗血清。Western blot分析SsTrxR抗血清特异性与在SS2中的定位。结果SsTrxR因子与细菌硫氧还蛋白还原酶的氨基酸序列存在多个保守区域与位点,同属内其它代表性链球菌硫氧还蛋白还原酶氨基酸序列同源性在68.5%以上,拥有Cys-Xaa-Xaa-Cys基序。成功构建pET30a-trxR表达质粒,SsTrxR原核蛋白呈可溶性表达,过镍柱纯化,获得目的蛋白。Western blot检测结果显示SsTrxR与抗血清反应性好,SsTrxR因子分布于细菌胞浆内。结论猪链球菌2型存在硫氧还蛋白还原酶SsTrxR,制备的兔源SsTrxR多克隆抗体特异性好,且该因子为胞内蛋白,为开展TrxR因子在SS2感染与免疫过程中发挥的功能研究奠定了基础。