+Gz重复暴露大鼠海马细胞凋亡及相关基因bcl-2和p53表达的观察

目的探讨细胞凋亡在反复高 +Gz暴露所致脑损伤中的病理作用。方法 2 0只SD大鼠随机分成对照组、+Gz重复暴露后 30min、6h、2 4h和 48h 5组 ,每组 4只。对照组大鼠G值为 + 1Gz,实验组大鼠在动物离心机上经历了 3次 + 1 4Gz/45s(两次间间隔 30min)作用。分别于暴露后 30min、6h、2 4h和 48h处死大鼠取脑 ,固定包埋。用原位末端标记法 (TUNEL)检测大鼠海马细胞凋亡及用免疫组化方法检测凋亡相关基因bcl 2和 p53表达的变化。结果对照组和 +Gz重复暴露后 30min组海马各亚区未见凋亡细胞和bcl 2、p53表达变化 ,6h组海马CA1区可见部分细胞凋亡和明显的bcl 2、p53表达变化 ,但在 2 4h组和 48h组基本恢复正常。结论 +Gz重复暴露可引起大鼠海马细胞凋亡及凋亡相关基因bcl 2和 p53的表达变化 ,细胞凋亡是反复高Gz暴露致脑损伤的机制之一。

+Gz重复暴露大鼠脑组织中IL-1β和TNF-αmRNA表达变化

目的了解反复高 +Gz暴露后大鼠脑组织中IL 1 β和TNF αmRNA表达变化。方法 2 0只SD大鼠随机分成对照组、+Gz重复暴露后 3 0min、6h、2 4h和 48h五组 ,每组 4只。对照组大鼠G值为 +1Gz ,实验组大鼠在动物离心机上经历了 3次 +1 4Gz/45s(两次间间隔 3 0min)作用。分别于暴露后 3 0min、6h、2 4h和 48h处死大鼠取脑 ,提取总RNA ,用半定量反转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测方法检测大鼠脑组织中IL 1 β和TNF αmRNA表达水平。结果 +Gz暴露后 3 0min、6h和 2 4h大鼠脑组织IL 1 β和TNF αmRNA均有升高 ,但 48h时均恢复正常。结论反复高 +Gz暴露可刺激大鼠脑组织内IL 1 β和TNF αmRNA表达 ,它们在 +Gz所致脑损伤中起一定的作用 。

飞行员中血管紧张素转换酶基因插入或缺失多态性研究

为了解飞行员血管紧张素转换酶 (ACE)基因插入或缺失 (I/D)多态性情况 ,探讨ACE基因多态性与飞行员耐力可能的关系 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增技术检测 118例飞行员和 96例健康对照者的ACE基因I/D多态性。结果位于ACE基因内含子 16的I/D多态性经PCR扩增后呈三种基因型 :纯合子插入型 (II)、纯合子缺失型(DD)和杂合子插入或缺失型 (I/D)。飞行员组II基因型 (4 4.0 7%)和I等位基因频率 (0 .6 5 )显著高于健康对照组 (分别为 31.2 5 %和 0 .5 2 )。结果表明ACEI基因有可能在飞行员的飞行耐力中起重要作用。

抗PAI抑制作用的组织纤溶酶原激活剂在大肠杆菌中的表达

目的: 构建t-PA活性不被PAI-1抑制的新一代t-PA突变体.方法: 根据t-PA的结构特点,去除t-PA分子中的指状区、表皮生长因子和Kringle1区,以含全长t-PA编码区序列的pUC18质粒为模板,经PCR扩增编码氨基酸1～3和176～527位的截短式t-PA DNA序列; 并将该t-PA分子中的PAI-1结合位点,即第373～384位核苷酸(AAG CAC AGG AGG)突变为(GCG GCC GCG GCG),相应的氨基酸KHRR则变为AAAA.结果:测序证实,t-PA突变体的DNA序列正确,将其克隆于大肠杆菌表达载体中,并在大肠杆菌中得到高效表达.表达蛋白占总菌体蛋白的30%,以包涵体形式存在.经蛋白质变性、复性,得到有活性的t-PA突变体.t-PA突变体与PAI-1反应后t-PA的活性未受到抑制.结论:t-PA突变体可能是一种用于治疗心肌梗死和脑血栓等血栓性疾病的强效且剂量要求低的新型生物工程药物.

bFGF及丹参对+Gz重复暴露大鼠脑组织中iNOS mRNA表达影响

为了解诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在正加速度 (+Gz)重复暴露大鼠脑组织中表达的变化 ,探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)及丹参对反复高 +Gz暴露致脑损伤的防护作用 ,用半定量反转录聚合酶链反应(RT -PCR)方法检测 +Gz重复暴露大鼠和bFGF、丹参处理再暴露大鼠脑组织中iNOSmRNA表达变化。结果+Gz重复暴露组可见明显的iNOSmRNA表达增高 ,而bFGF和丹参能阻断这种iNOS表达变化。表明 +Gz重复暴露可引起大鼠脑内iNOSmRNA表达变化 ,它可能在反复高 +Gz暴露致脑损伤中起重要作用 ,而bFGF和丹参对 +Gz暴露所致的脑损伤具有防护作用。

白癜风患者血清抗黑素细胞抗体的免疫荧光检测

目的建立抗黑素细胞抗体免疫荧光检测方法,测定白癜风患者血清中抗黑素细胞抗体。方法取外科手术后人眼睑正常皮肤,用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液,在M2黑色素细胞选择性培养基中培养,每周传代1次,经4～5次传代,以免疫荧光和多巴胺染色检测培养细胞的纯度和生物学特性,转移到明胶包被的玻璃片上生长至70%融合,丙酮固定后,与不同稀释度的白癜风患者和正常对照血清反应,加入FITC标记的兔抗人抗体,观测荧光染色效果。结果黑素细胞能在培养基中选择性生长,经4～5w培养获得纯的黑素细胞,无成纤维细胞和角质形成细胞的污染。19例发展期患者抗黑素细胞抗体阳性15例,抗体阳性率79%;10例高于1:50,5例抗体滴度为1:10。稳定期15例中,抗黑素细胞抗体阳性4例,抗体阳性率27%。结论建立了抗黑素细胞抗体免疫荧光检测方法,白癜风患者血清中有抗黑素细胞抗体,且其滴度与病情发展相关。

rhTNFα D11a对S180肉瘤的体内抗肿瘤作用

ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ是利用基因工程技术制备的一种新型ＴＮＦ。体外在极低浓度下对多种人源性和鼠源性肿瘤细胞均有明显的细胞毒作用，与原型ｒｈＴＮＦα相比，其活性高１０倍以上；在小鼠和猴子体内进行的急性毒性和慢性毒性试验表明：其毒性比原型ｒｈＴＮＦα低约７倍。本文研究了ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ在荷瘤小鼠体内的抗肿瘤作用，结果表明：瘤内注射１×１０４Ｕ的ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ，７０％的动物肿瘤完全消失，其余动物肿瘤极显著减小，且发生组织重度坏死；注射１×１０３Ｕ，１０％的动物肿瘤完全消失，９０％的肿瘤不同程度地减小，肿瘤组织坏死程度以轻、中度为主；注射１×１０２Ｕ的动物肿瘤无明显减小，但生长率均显著低于对照组。

一种新型人TNFα对人肝癌裸鼠移植瘤的抗瘤作用

用人肝癌Ｂｅｌ７４０２瘤株建立了人肝癌裸鼠移植瘤模型，探讨新型重组人ＴＮＦα（ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ）对这种移植瘤的抗瘤作用。结果表明，ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ和原型重组人ＴＮＦα（ｒｈＴＮＦα）的抑瘤率在３０％左右时，后者所用的活性单位数是前者的２倍；两者用量相同时，前者的抑瘤率比后者提高２３个百分点。

DnaJ类分子伴侣PBP基因的原核表达及兔抗PBP抗体的制备

目的:在原核系统中表达DnaJ类分子伴侣感光受体外周蛋白结合蛋白(PBP)基因,并制备兔抗PBP的抗体鉴定其特性。方法:应用RTPCR从人胎脑组织总RNA中扩增PBPcDNA。测序后将其克隆到表达载体pET28a中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。表达产物经NiNTA亲和层析柱纯化后,用SDSPAGE进行鉴定。以所获纯化的PBP免疫新西兰白兔,制备兔抗PBP抗体。抗体的效价及特异性用Westernblot进行测定和分析。结果:扩增和克隆出了720bp的PBP基因。构建的重组质粒pET28aPBP在大肠杆菌中得到高表达,诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清中,纯化的PBP经SDSPAGE鉴定呈单一条带。以纯化的PBP免疫兔,制备了兔抗PBP抗体。Westernblot鉴定证实,该抗体可与原核表达的PBP特异性结合,抗体效价为1∶1600。结论:在原核细胞中表达了具有生物学活性的PBP,并以其为免疫原制备了兔抗PBP的抗体,为进一步研究PBP的结构与生物学活性奠定了基础。

刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中表达及在tPA纯化中的应用

目的构建刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体(rserETI)原核表达载体,制备表达产物,用于tPA的纯化。方法设计合成rserETI编码序列DNA片段,以PCR法扩增出全长编码区序列,经酶切后克隆至pET9a表达载体,转化大肠杆菌JM109DE3,以IPTG诱导表达。表达产物经变性、复性、QFF层析纯化后,测定其活性,并与溴化氰活化的Sepharose偶联合成亲和层析柱,纯化rtPA。结果rserETI的表达量约占大肠杆菌菌体总蛋白的30%,复性率为80%,经QFF层析纯化后,蛋白浓度为1.58mg/ml,SDS-PAGE检测显示无杂蛋白污染,纯度大于95%,对rtPA突变体的抑制比活性为4×104IU/mg。偶联合成的rserETI-Sepharose亲和层析柱能特异性地纯化rtPA,rtPA突变体纯度达96%,比活性为5.07×105IU/mg。结论已成功构建了rserETI原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,制备的表达产物可用于rtPA的纯化。

大鼠在反复高加速度暴露后脑组织中bcl-2、bax、p53和ICE的表达

为了解反复高正加速度 (+Gz)暴露后大鼠脑组织中bcl 2、bax、p5 3和白细胞介素 1β转化酶基因的表达变化 ,探讨细胞凋亡在反复高 +Gz暴露所致脑损伤中的病理作用 ,用半定量逆转录聚合酶链反应方法检测反复高 +Gz暴露后大鼠脑组织中bcl 2、bax、p5 3和ICE表达水平 ,并用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测脑组织中的凋亡细胞。结果bcl 2在 +Gz重复暴露后 6h和 2 4h表达明显降低 ,而bax、p5 3和ICE在 6h和 2 4h表达明显升高 ,6h组和 2 4h组在大脑皮质、海马CA1区和纹状体可见部分神经元发生凋亡。表明反复高 +Gz暴露可引起大鼠脑组织中bcl 2、bax、p5 3和ICE表达变化 ,细胞凋亡是反复高

感光受体外周蛋白结合蛋白对虫荧光素酶体外折叠的促进作用

探讨感光受体外周蛋白结合蛋白 (PBP)在体外是否有促进变性蛋白质复性的作用。虫荧光素酶用盐酸胍变性 ,然后在PBP、HSP70、HSP6 0存在下进行体外复性 ,用虫荧光素酶分析系统检测该酶的复性程度。结果显示PBP对虫荧光素酶的复性能力很低 ,当与HSP70同时作用时 ,酶活力明显高于PBP或HSP70组 ,而PBP与HSP6 0组合对酶的复性能力较HSP6 0组未见有明显差异 ;当PBP ,HSP70 ,HSP6 0三者同时存在时 ,酶活力恢复率最高。去除复性缓冲液中的ATP及其再生系统 ,酶活力的复性率明显下降。结果表明PBP具有协助HSP70 。

人膀胱癌细胞角蛋白20 mRNA表达的研究

目的 评估细胞角蛋白 2 0mRNA(CK2 0mRNA)是否可以作为膀胱癌临床诊断的一种有用标志物。方法 对 84例肉眼血尿患者的尿液进行尿脱落细胞学及CK2 0mRNA标记物RT/PCR检测。分析参数包括肿瘤数目、大小及WHO分级 ,术前或活检前尿脱落细胞学和CK2 0mRNA标志物。结果 病理活检证实 2 2例移行细胞癌中 ,CK2 0mRNA 18例为阳性 ,4例阴性 ;6 2例非膀胱癌患者中 ,CK2 0mRNA标志物 2例假阳性。与尿脱落细胞学比较 ,CK2 0mRNA标志物对膀胱移行细胞癌诊断的特异性和阳性预报值更高 ,分别为 96 .8%比 77.4 % (U =3.2 1,P <0 .0 1) ,90 %比 5 1.7% (U =2 .81,P <0 .0 1) ;但两者在敏感性和阴性预报值间无显著性差异 (U值分别为 :1.0 4和 1.2 1,P >0 .0 5 )。CK2 0mRNA表达与肿瘤分级间无明显相关性。结论 通过RT/PCR方法检测CK2 0mRNA是诊断膀胱移行细胞癌的一种良好生物标志物 ,其特异性明显优于尿脱落细胞学。

强直性脊柱炎患者肿瘤坏死因子α启动子308位点基因多态性分析

目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF)α启动子308位点基因多态性与强直性脊柱炎(AS)的相关性。方法:用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对112例AS患者和96例健康对照人群,以及98例HLA B27阳性AS患者和14例阴性AS患者的TNF-α启动子308位点基因多态性进行分析。结果:AS患者GG、GA和AA三种基因型频率分别为60.71%、36.61%和2.68%,G和A的等位基因频率分别为0.790和0.210,对照组三种基因型频率分别为81.25%、17.71%和1.04%,等位基因频率分别为0.901和0.099,两组基因型和等位基因频率分布有显著性差异(P<0.01),AS患者的A等位基因频率明显高于对照组。HLA-B27阳性AS患者和阴性AS患者的基因型频率亦有显著性差异(P<0.01)。结论:TNF-α启动子308位点基因多态性与AS相关,A等位基因可能增加AS的易感性。

一氧化氮与地塞米松对内毒素肺损伤治疗作用的比较

目的比较一氧化氮(NO)与地塞米松(Dex)对内毒素所致大鼠肺损伤的治疗作用及机制。方法将30只大鼠随机分成对照组、内毒素(LPS)组、Dex组、NO组、Dex+NO组,每组6只。通过LPS静脉注射制备大鼠肺损伤模型,观察不同干预方式(Dex腹腔注射和/或NO吸入)对肺损伤的治疗作用。结果LPS组大鼠肺组织出现水肿、出血,大量炎症细胞浸润及弥漫性肺泡塌陷,支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-8水平显著升高,肺组织中核因子κB(NF-κB)核阳性表达细胞增多,糖皮质激素受体(GR)核阳性细胞表达下降,与对照组比较有显著差异(P均<0.05)。予以Dex腹腔注射或/和NO吸入干预后,大鼠肺组织肺泡水肿、炎症细胞浸润及出血均不同程度减轻;BALF中TNF-α、IL-1β及IL-8水平较LPS组降低(P均<0.05);肺组织中NF-κB核阳性表达细胞减少,与LPS组比较有显著差异(P<0.05);干预组肺组织GR核阳性细胞较LPS组明显增多(P<0.01),其中NO组肺组织GR阳性表达高于Dex组(P<0.05)。结论NO及Dex能有效减轻LPS所致的肺部炎症反应,NO还能提高肺损伤时肺组织内GR的表达,增强糖皮质激素的抗炎效果。

模拟失重对大鼠动脉血胃动素和一氧化氮的影响

背景：随着载人航天事业的迅速发展，对失重状态下身体各器官系统变化的研究越来越受到重视。目前，关于失重状态下胃肠激素变化的研究尚少。目的：研究模拟失重状态下大鼠动脉血中胃动素和一氧化氮的变化，初步探讨两者在失重状态下胃肠功能调控中的可能作用。方法：90只雄性Wistar大鼠随机分为三组，每组各30只。第一组悬吊14d（SUS-14d组），第二组悬吊21d（SUS．21d组），第三组（对照组）不予悬吊。腹主动脉采血，测定动脉血胃动素（放射免疫法）和一氧化氮（硝酸还原酶法）水平。结果：模拟失重状态下（SUS-14d组和SUS．21d组），大鼠动脉血胃动素水平较对照组明显升高，差异有统计学意义（P〈O．05）；一氧化氮水平与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）。结论：模拟失重状态下，大鼠动脉血胃动素水平明显升高，一氧化氮水平变化不明显。胃动素水平的变化可能与失重状态下发生的胃肠功能改变有关，其具体机制有待进一步研究。

强直性脊柱炎患者肿瘤坏死因子α-857和-863位点基因多态性分析

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)α-857和-863位点基因多态性与强直性脊柱炎(AS)的相关性。方法用序列特异引物PCR方法对112例AS患者和96例健康对照人群,以及98例HLA B27阳性AS患者和14例阴性AS患者的TNF-α-857(C/T)和-863(C/A)位点基因多态性进行分析。结果AS患者组TNF-α-857位点基因型和等位基因频率分布与健康对照组有显著统计学差异(P<0.01),AS患者的T等位基因频率明显高于对照组,而AS患者TNF-α-863位点基因型和等位基因频率分布与健康对照组无统计学差异(P>0.05)。HLA-B27阳性AS患者和阴性AS患者TNF-α-857位点基因型频率亦有显著统计学差异(P<0.01)。结论TNF-α-857位点基因多态性与AS相关,T等位基因可能增加AS的易感性。

脂蛋白脂酶基因第6内含子PvuⅡ位点多态性与飞行员高脂血症的关系

目的探讨脂蛋白脂酶(LPL)基因第6内含子PvuⅡ位点多态性与飞行员高脂血症的关联性。方法采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性方法检测87例飞行员高脂血症患者和79例血脂正常飞行员LPL基因第6内含子PvuⅡ位点多态性,并与血脂水平的关联进行对照研究。结果飞行员高脂血症组和血脂正常组的三种基因型P+P+、P+P-和P-P-及等位基因P+和P-构成比差异有显著性(P<0.01),高脂血症组P+P+基因型和P+等位基因明显高于正常血脂组。高脂血症组P+P+基因型者血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显高于P+P-和P-P-基因型,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平则降低(P<0.0 1)。结论LPL基因第6内含子PvuⅡ位点多态性与飞行员高脂血症相关。