氨基酸及肉碱非衍生化串联质谱法检测程序的测量不确定度评估

目的对Waters公司ACQUITY TQD串联质谱仪及其配套试剂检测氨基酸、肉碱的程序进行测量不确定度评估,探讨评估的意义。方法按照《医学实验室——测量不确定度的评定与表达》提供的方法,用两种不同批号的试剂盒检测室内质控品各20个工作日,每个工作日在常规标本检测前、后各检测一次质控品,随机更换检测者,计算测量复现性引入的测量不确定度;统计原卫生部临床检验中心2014年和2015年进行的20次新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸室间质评数据、16次酰基肉碱室间质评数据,计算偏倚引入的测量不确定度;根据测量复现性引入的测量不确定度和偏倚引入的测量不确定度计算相对合成标准不确定度和相对扩展不确定度。以原卫生部临床检验中心新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸和酰基肉碱室间质评的允许总误差指标作为目标扩展不确定度。结果瓜氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丙酰肉碱、辛酰肉碱、十二碳酰肉碱、十六碳酰肉碱、十八碳酰肉碱的相对合成扩展不确定度为19.1%-26.1%（k=2）,小于目标不确定度;亮氨酸、酪氨酸、缬氨酸、游离肉碱的相对合成扩展不确定度为31.0%-43.3%（k=2）,大于目标不确定度;异戊酰肉碱的不确定度需另行评估。结论通过氨基酸及肉碱非衍生化串联质谱法配套检测程序的测量不确定度的评估,不仅可以为持续改进检测质量提供机会,而且有助于实验技术人员正确解读检测数据及临床医师正确使用检验报告。

氨基酸及肉碱非衍生化串联质谱法检测系统的性能验证

目的按照ISO15189-2012《医学实验室质量和能力的要求》对Waters公司ACQUITY TQD串联质谱仪及其配套试剂、PerkinElmer公司NeoBaseTM Non-derivatized MSMS kit在测定氨基酸和肉碱方面进行性能验证。方法按照美国临床实验室标准化协会指南文件EP15-A2《用户对精密度和准确度性能的核实实验——批准指南》提供的方法,对检测系统进行正确度和精密度验证;按照卫生部行业标准WS/T408-2012《临床化学设备线性评价指南》提供的方法,对其进行线性范围验证。结果 6种氨基酸和7种肉碱的相对偏倚为0.13%~11.34%,均小于1/2允许总误差;批内精密度为0.55%~4.78%,均小于1/4允许总误差;期间精密度除缬氨酸低水平外,为2.52%~7.95%,小于1/3允许总误差;瓜氨酸、苯丙氨酸、游离肉碱在厂家给出的线性范围内呈一阶线性,缬氨酸呈二阶线性,其余呈三阶线性。结论氨基酸及肉碱非衍生化串联质谱法配套检测系统的性能特征验证通过,可按照常规临床化学检测系统进行管理和要求。

56例甲基丙二酸血症患儿的临床和串联质谱及气相色谱数据分析

目的探讨56例甲基丙二酸血症的临床和串联质谱及气相色谱检测数据特征,为诊断MMA数据分析积累经验。方法汇总整理2013年1-12月份的56例（男27例,女29例）临床患儿的血串联质谱（游离肉碱（CO）、丙酰基肉毒碱（C3）、丙酰基肉毒碱/乙酰基肉毒碱（C3/C2）、丙酰基肉毒碱/游离肉碱（C3/CO）、蛋氨酸（Met））及尿液气相色谱（甲基丙二酸、甲基枸橼酸）检测数据及临床诊断进行分析。结果 56例甲基丙二酸血症中新生儿期发病的有24例、1岁内发病的有28例、1岁以上发病的有5例;临床表现以生长发育迟缓、抽搐、癫痫及代谢性酸中毒最多见;56例MMA尿中甲基丙二酸浓度在13.89～1739.58 nmol/（mg.肌酐）,平均为362.9、甲基枸橼酸浓度在1.81～106.08 nmol/（mg.肌酐）,平均为15.9;但是血串联质谱仪中游离肉碱低下的有24例（42.9%）,浓度在2.6～9.2μmol/L（10～52）,平均为6.3μmol/L、C3正常的有11例（19.6%）,浓度在0.63～4.45μmol/L（0.53～4.80）平均为3.6μmol/L、11例中C3/C2均增高,数值在0.37～2.2（0.05～0.35）,平均为0.89,其中有9例C3/CO增高,数值在0.23～1.95（0.02～0.22）,平均为0.81,其中有10例蛋氨酸低下,浓度在3.03-6.16μmol/L（9～42）,平均为4.23μmol/L。结论生长发育迟缓、抽搐、癫痫及代谢性酸中毒是MMA的主要临床表现;临床上诊断甲基丙二酸血症需要结合血串联质谱（LC-MS/MS）及尿液气相色谱（GC-MS）综合分析,以免发生漏诊。

6137例临床患儿遗传代谢病串联质谱及气相色谱质谱数据分析

目的了解本实验室2013年度串联质谱及气相色谱诊断氨基酸、有机酸、脂肪酸氧化代谢性疾病数据分析,深入对遗传代谢病诊断的认识。方法汇总整理2013年1~12月份的6137例(男3678例,女2459例)临床患儿的串联质谱(LC-MS/MS)及气相色谱(GC-MS)检测数据及临床诊断进行分析。结果在6137例临床患儿共检测出氨基酸代谢病(AAD)、有机酸代谢紊乱(OAD)和脂肪酸氧化缺陷病(FAOD)共144例检出率2.3%(男84例,女60例)。其中氨基酸代谢病占43.8%(63/144例),有机酸代谢紊乱占48.0%(69/144例),脂肪酸氧化缺陷病8.4%(12/144例),检测出较多代谢异常的为甲基丙二酸血症(MMA)56例、高苯丙氨酸血症32例、戊二酸血症Ⅰ型9例、枫糖尿病及肉碱/酰基肉碱移位酶缺乏症(CACT)各6例。结论临床患儿遗传代谢病并不少见,科室以新生儿科、神经科、康复科、PICU最多见,地区以山东、江苏、河北、安徽省较多;其中甲基丙二酸血症、高苯丙氨酸血症、戊二酸血症Ⅰ型最多见。儿科医师对临床患儿应重视串联质谱(LC-MS/MS)及气相色谱(GC-MS)技术检测遗传代谢病,以达到早查、早治疗,降低临床患儿不可逆伤害的目的。

Waters TQD串联质谱仪2015年度维护保养及在遗传代谢病筛查的验证

目的遗传代谢病筛查目前国际及国内普遍使用串联质谱技术检测,对实验室拥有的Waters TQD串联质谱仪经工程师2015年度8月份维护保养后仪器性能进行验证,以符合实验室检测要求。方法按照行业要求使用PEG400进行MS1、MS2质量数校正,后经维拉帕米峰面积重现性、室内质控、内标离子响应强度重复性、准确度等进行验证。结果质量数校正MS1及MS2 STATIC(静态)、SCANNING(动态扫描)、SCAN Speed Compensation(FAST)(扫描速度补偿)20个校正质量数,从45.03~696.44无一离子丢失,小于厂家声明丢失个数小于2个、理论值与校正后采集到的绝对质量数相差均小于0.03Da小于厂家声明0.2Da,均方根(RMS)在0.00848~0.0195小于厂家声明0.05;维拉帕米峰面积相对标准偏差RSD为2.03%小于厂家声明5%;氨基酸及酰基肉碱室内质控高低值均在靶值±2SD范围之内,结果均不违反质控规则;氨基酸内标离子响应强度变异系数CV%在7.26%~10.2%均小于保养前20天内标离子响应强度的变异系数8.38%~11.82%、酰基肉碱内标离子响应强度变异系数CV%在5.01%~10.39%均小于保养前20天内标离子响应强度的变异系数5.38%~10.45%;卫生部PT材料201521~201525氨基酸中瓜氨酸(Cit)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(phe)、缬氨酸(Val)得分100,酪氨酸(Tyr)得分80,异戊酰肉碱(C5)、辛酰肉碱(C8)、棕榈酰肉碱(C16)、十八碳酰肉碱(C18)得分100,游离肉碱(C0),丙酰肉碱(C3)、月桂酰肉碱(C12)得分80,整体结果为合格满意。结论 Waters TQD串联质谱仪经年度维护保养后仪器的质量数校正、维拉帕米峰面积重现性、室内质控、内标离子响应强度重复性、准确度等均达到了厂家声明及相关行业检测的性能,满足实验室在遗传代谢病检测要求。

高效液相串联质谱仪氨基酸及酰基肉碱检测结果可比性分析

目的针对实验室内两台Waters TQD及两台Xevo TQD串联质谱仪分析9种氨基酸及15种酰基肉碱检测结果可比性分析。方法参照中华人民共和国卫生行业标准WST407-2012《医疗机构内定量检验结果的可比性验证指南》,验证两台Waters TQD及两台Xevo TQD串联质谱仪分析9种氨基酸及15种酰基肉碱的检测系统间的可比性。以卫生部临床检验中心新生儿遗传代谢病串联质谱筛查中的氨基酸及酰基肉碱室间质评总允许误差TEA(氨基酸为25%,肉碱为30%)要求比较,当比对偏差<1/2TEA时(即氨基酸为12.5%,肉碱为15%),系统间比对通过,否则未通过。结果9种氨基酸(丙氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸)的比对偏差在4%~12%,均≤1/2卫生部氨基酸室间质评总允许误差。15种肉碱(游离肉碱、乙酰基肉碱、丙酰基肉碱、丁酰基肉碱、异戊酰基肉碱、己酰基肉碱、辛酰基肉碱、癸酰基肉碱、十二酰基肉碱、十四酰基肉碱、十六酰基肉碱、十八酰基肉碱、戊二酰基肉碱\3-羟基己酰基肉碱、丙二酰基肉碱\3-羟基丁酰基肉碱、丁二酰基肉碱\3-羟基异戊酰基肉碱)比对偏差在3%~13%,均<1/2卫生部室间质评酰基肉碱总允许误差。结论实验室四台串联质谱仪检测的9种氨基酸及15种酰基肉碱检测系统的结果具有可比性。

21例枫糖尿病患者血串联质谱及尿液气相色谱检测数据分析及文献复习

目的探讨枫糖尿病(MSUD)患者血串联质谱亮氨酸、缬氨酸、LEU/PHE、VAL/PHE及尿液气相色谱2-酮-异戊酸、2-酮-异己酸、2-酮-3-甲基戊酸的检测数据及临床诊断为诊断枫糖尿病积累经验。方法分析2013年1月份至2017年5月份21例枫糖尿病临床患儿的血串联质谱(亮氨酸、缬氨酸、LEU/PHE、VAL/PHE)及尿液气相色谱(2-酮-3-甲基戊酸、2-酮-异戊酸、2-酮-异己酸)检测数据及临床诊断进行分析。结果 21例枫糖尿病患者中新生儿期发病的有15例(71.4%)、1岁以内发病的有3例(14.3%)、1岁以上发病的有3例(14.3%);临床表现常见喂乳困难、抽搐、反应差、尿异味、肌张力异常,实验室常规检查以代谢性酸中毒、高血氨、乳酸增高最多见;21例血串联质谱检测亮氨酸浓度在579.39～7172.76μmol/L(93～365)、缬氨酸浓度在325.97～1247.23μmol/L(61～307)、LEU/PHE在8.14～86.97(1.5～6.19)、VAL/PHE在1.88～19.28(1.3～5.9);15例枫糖尿病患者中尿液气相色谱检测2-酮-异戊酸、2-酮-异己酸、2-酮-3-甲基戊酸均呈现不同程度增高,2-酮-异己酸浓度在0.59～817.07nmol/(mg.肌酐)(<0.48)、2-酮-异戊酸浓度在6.79～83.15nmol/(mg.肌酐)(<0.1)、2-酮-3-甲基戊酸浓度在0.59～95.63nmol/(mg.肌酐)(<0.28)。结论枫糖尿病多在新生儿期发病,临床表现以喂乳困难、抽搐、反应差、尿异味、肌张力异常为主;常规实验室检查可见代谢性酸中毒及血氨增高;血串联质谱以亮氨酸、缬氨酸显着增高、尿检2-酮-异己酸、2-酮-异戊酸、2-酮-3-甲基戊酸增高为诊断枫糖尿病的特异性标志物,临床上诊断枫糖尿病需将两种检测方法结合以减少漏诊及误诊。