非洲猪瘟EP364R蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV)Georgia 2007/1毒株的EP364R基因序列(GenBank登录号:FR682468.1)合成EP364R基因序列,通过PCR技术扩增目的基因EP364R,并克隆到pET-32a(+)载体,成功构建了重组质粒pET-32a-EP364R,鉴定正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化的pET-32a-EP364R重组蛋白为诊断抗原,成功建立了检测ASFV的间接ELISA抗体检测方法。将建立的间接ELISA检测方法与法国ID-Vet非洲猪瘟抗体试剂盒分别对临床84份血清进行检测,总符合率达89.3%,表明该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。为ASFV的快速诊断、流行病学调查和血清学抗体检测提供了快速实用的检测手段。

非洲猪瘟病毒p72/p32蛋白的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的建立与比较

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的间接ELISA方法,试验基于p72/p32基因序列,构建了重组质粒pCold-p72/p32,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,利用IPTG诱导获得相应的重组蛋白,通过SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式,利用Ni柱亲和层析法纯化p72/p32重组蛋白,并以此为包被抗原建立2种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并对方法的临界值、有无交叉反应、重复性及敏感性进行了检测,并对来自不同猪场的临床样本进行验证性检测。结果表明:试验成功构建了重组质粒pCold-p72/p32,2种重组蛋白均能与ASFV阳性血清反应;p32以可溶性蛋白和包涵体蛋白形式表达,p72以包涵体蛋白形式表达。基于p32重组蛋白所建立的间接ELISA方法的临界值为0.543,基于p72重组蛋白所建立的间接ELISA方法的临界值为0.612;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%;与猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等常见病原的阳性血清无交叉反应;与商品化的非洲猪瘟抗体试剂盒检测结果的符合率分别为95.1%和91.3%。说明试验建立的2种间接ELISA方法均具有良好的特异性、敏感性和重复性。通过比较,可以初步认为以p32重组蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测效果更好,可以用于猪血清样本中ASFV抗体的检测。

2017-2019年广西猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及其gC、gG毒力基因分析

为了解2017-2019年广西猪伪狂犬病病毒(PRV)的流行和遗传变异情况,对2017年1月至2019年8月于广西各地区采集的284份疑似伪狂犬病发病猪临床样品进行检测和病毒分离,对分离毒株的gC、gG基因进行克隆、测序、遗传变异分析。被测样品中有85份阳性,阳性率为29.9%,从中共分离到10株PRV毒株,其中9株为国内变异毒株,1株为国内经典毒株。结果显示:广西地区流行的不同亚型PRV毒株在gC、gG基因上均存在相似的核苷酸和氨基酸变异特点,主要与国内变异株亲缘关系较近;广西地区PRV流行毒株主要为国内变异株。本研究结果丰富了广西PRV检测数据资料,为深入评估和预测广西PRV疫病的流行情况提供了可靠的数据基础。

观察优质护理在妊高征产妇产后出血护理中的应用

观察优质护理在妊高征产妇产后出血护理中的应用效果。方法 选取本院于2021年07月01日~2022年06月31日期间接收的妊高症产妇66例,采用随机数字表达法将其分实验组与对照组,各组33例,对照组采取常规护理干预,实验组采取优质护理干预,对比两组产后出血量、不良事件发生率、护理前后收缩压、舒张压以及生活质量(the MOS item short from health survey,SF-36)评分。结果 实验组产后2h出血量、产后24h出血量、沟通障碍、操作问题、医患纠纷发生率、舒张压与收缩压明显低于对照组,且具有统计学差异(P<0.05);实验组SF-36各维度评分明显高于对照组,且具有统计学差异(P<0.05)。结论 优质护理在妊高症产妇产后出血护理中具有重要的应用价值,减少产妇出血量,降低不良事件发生,提高产妇生活质量与医院的护理水平,保障产妇安全,值得应用。

初中信息技术教学中游戏化教学的应用探究

在信息技术飞速发展的今天,相比于从前而言,信息技术对人们的生活以及工作也产生了一定的影响。信息技术教育工作开始不断深入,并且受到了社会的广泛关注。初中作为学生进行学习十分重要的一个阶段,如何能够有效地提高学生的信息技术学习质量成为了教师教学过程当中重点关注的问题。因此,本文将简单对初中信息技术教学中的游戏化教学应用进行相应的探究,希望能够通过游戏化教学更加有效地提高学生的信息技术水平。

基于非洲猪瘟病毒B119L蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

为了建立一种针对非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的血清学检测手段,参考ASFV Pig/HLJ/2018株全基因组序列合成非结构蛋白B119L的基因序列,成功构建重组表达质粒pCold-Ⅰ-B119L,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达获得重组蛋白,利用纯化后的B119L重组蛋白作为诊断抗原,建立检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法。结果显示:原核表达的B119L蛋白的分子质量为14.4 ku,与预期相符;以其为包被抗原建立的间接ELISA检测方法的批间及批内变异系数均小于10%;标准阳性血清的最低检测稀释度为1︰5120;对ASFV阳性血清具有特异性,与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒阳性血清无交叉反应;该间接ELISA方法与商品化试剂盒的符合率为100%。本研究中建立的间接ELISA检测方法特异性、重复性、灵敏度良好,为ASFV的临床检测和流行病学调查提供了依据,对于预防ASFV的感染具有重要作用。

非洲猪瘟MGF360-11L蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV)HLJ/2018株(GenBank登录号:MK333180)MGF360-11L核苷酸序列,合成MGF360-11L基因序列,将其克隆至pET-32a(+)载体。测序正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达与纯化,纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以纯化的MGF360-11L重组蛋白作为包被抗原,建立了检测ASFV MGF360-11L抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法与法国ID-Vet非洲猪瘟抗体检测试剂盒分别对192份临床血清样品进行检测比较,结果显示,该间接ELISA方法的特异性为91.6%,敏感性为92.1%,符合率约为91.7%。表明,该间接ELISA方法敏感性高、重复性好和特异性强,可初步用于临床血清样品非洲猪瘟抗体的检测,该方法的建立为ASFV的快速诊断提供了更多选择,对非洲猪瘟的防控提供了技术支持。

《守株待兔》新编

大家都知道战国时那个守株待兔的宋国人吧!他的后代也一直是农民。不知是他的第几代后人,经常因祖先那不太光彩的故事受大家嘲笑。于是,他发誓要为祖宗争回脸面。

还是井底好啊

自从小鸟告诉青蛙外面的世界是那么的美丽,青蛙就开始发奋图强,学习跳高, 想跳出这个井口。终于有一天,它跳了出去。跳出井口的青蛙一下子惊呆了,自言自语地说:“