咖啡因对幼大鼠睾丸生殖细胞的影响及其可逆性的研究

观察用0.6mM咖啡因培养2、5及7天对出生4天SD大鼠睾丸组织块生殖细胞数量的影响。为了解此作用是否能逆转,在0.6mM咖啡因作前培养后,换上基本培液或0.06mML-PIA、0.06及0.6mM腺苷作1至2周的后培养,观察生殖细胞数量的恢复情况。结果显示,0.6mM咖啡因减少培养块生殖细胞的数量。用基本培液、0.06mM的L-PIA或腺苷作后孵育都不能逆转此影响。唯有0.6mM的腺苷能扭转用咖啡因前培养2及5天对生殖细胞的抑制作用,但不能拮抗用它作前孵育7天的影响。推想咖啡因及腺苷对生殖细胞DNA合成的直接或间接作用、腺苷受体等因素都可能与本实验结果有关。

咖啡因对睾丸影响的体外研究

用出生4天的SD大鼠睾丸作器官块组织培养,观察不同浓度的咖啡因单独、与腺苷或苯异丙基腺苷协同对睾丸培养块的生殖细胞数量及所有细胞成份DNA合成的影响。结果表明,高浓度的咖啡因(0.6mM)引起培养块的生殖细胞数目及有DNA合成标记的细胞核数减少。高剂量的腺苷(0.3及0.6mM)能抵抗同剂量的咖啡因对生殖细胞数量的影响;而低10倍浓度的腺苷及苯异丙基腺苷则无此作用。但加入以上两种药物都能拮抗高浓度咖啡因所导致睾丸培养块DNA合成的下降。本文讨论了咖啡因及腺苷作用的可能性机制。

胎鼠和幼鼠运动神经元诱向因子的免疫组织化学定位

用免疫组织化学ＡＢＣ法检测了ＳＤ大鼠胚胎（Ｅ１３、１４、１８、２０ｄ）和幼鼠（Ｐ１、３、６ｄ；２周、３周）体内运动神经元诱向因子（ＭＮＴＦ）的分布。结果表明，大鼠Ｅ１８ｄ之前的胚胎组织或脏器的ＭＮＴＦ－ＭｃＡｂ免疫组织化学反应均为阴性。在大鼠Ｅ１８ｄ的心肌、骨骼肌呈免疫阳性反应，而平滑肌为阴性反应；肝、肾、脊髓的边缘层和套层的原始神经细胞、胶质细胞及Ｅ２０ｄ前角运动细胞均为阳性反应。从Ｐ１ｄ到３周龄大鼠的心肌、骨骼肌仍为阳性反应；肝和肾的阳性反应逐渐减弱；胰腺泡上皮细胞为阴性反应，但胰岛内分泌细胞免疫阳性反应明显，而且随着动物成长其阳性反应逐渐增强，直至成体大鼠的胰岛才转为阴性反应。在３周龄动物，主要是脊髓前角运动神经元有明显的阳性反应。实验结果表明，ＭＮＴＦ在ＳＤ大鼠胚胎晚期才出现，而且分布范围比较局限。提示ＭＮＴＦ在体内的主要功能为促进其效应细胞（运动神经元）的生长、成熟和行使功能。

咖啡因对睾丸生殖细胞PCNA表达、DNA含量影响的体外研究

为了深入了解咖啡因对胎儿、新生儿生殖细胞的影响及其机制，本实验采用低（０３ｍＭ）、中（０６ｍＭ）、高（１２ｍＭ）浓度咖啡因体外培养ＳＤ孕１８天胎鼠（１８ｄ）、０天（０ｄ）及４天（４ｄ）乳鼠睾丸组织块，培养时间分别为１周、２周、３周，观察咖啡因对睾丸内生殖细胞数量的影响并用免疫组化、计算机图像分析等技术检测生殖细胞ＰＣＮＡ（增殖细胞核抗原）的表达、ＤＮＡ的含量等与ＤＮＡ合成有关的指标，以研究咖啡因作用的可能机制。结果如下：（１）１８天胎鼠睾丸培养组织生殖细胞受咖啡因影响最少，０天乳鼠次之，４天乳鼠受影响较大。（２）低浓度的咖啡因对生殖细胞影响较少；中等浓度的咖啡因在培养三周后，生殖细胞的数量、ＤＮＡ的含量才降低；而高浓度的咖啡因在培养二周后，以上指标已有下降，三周更明显。（３）生殖细胞数量的减少往往伴随ＤＮＡ含量的降低，也与ＰＣＮＡ表达程度的减少有一定的一致性。由此推测高浓度咖啡因长时间培养后使生殖细胞数量减少，可能与抑制ＰＣＮＡ表达的阳性程度，干扰ＤＮＡ复制有关。

咖啡因对胎鼠及乳鼠睾丸生殖细胞数量的影响

为了了解咖啡因对胚胎及新生时期男性生殖系统的影响，采用低（０３ｍｍｏｌ／Ｌ）、中（０６ｍｍｏｌ／Ｌ）、高（１２ｍｍｏｌ／Ｌ）浓度咖啡因体外培养ＳＤ孕１８ｄ胎鼠、０ｄ及４ｄ乳鼠睾丸组织块，用ＨＥ染色及放射自显影方法检测咖啡因对睾丸内生殖细胞数量及其摄取３Ｈ－ＴｄＲ的影响。结果：１８ｄ胎鼠睾丸培养组织内生殖细胞数量及３Ｈ－ＴｄＲ的摄取受咖啡因影响较少；中等浓度的咖啡因在培养３周后，生殖细胞的数量、３Ｈ－ＴｄＲ的摄取才降低；而高浓度的咖啡因在培养２周后，检测指标已有下降，３周更明显。生殖细胞数量的减少往往伴随３Ｈ－ＴｄＲ摄取的降低，由此推测高浓度咖啡因长时间培养后使生殖细胞数量减少可能与抑制生殖细胞摄取３Ｈ－ＴｄＲ，从而干扰ＤＮＡ的合成有关。

咖啡因对胎鼠及乳鼠睾丸生殖细胞数量和PCNA表达的影响

为了深入了解咖啡因(Caffeine,Caf.)对胎儿、新生儿生殖细胞数量及其PCNA(增殖细胞核抗原)表达的影响,本实验采用低(0.3mM)、中(0.6mM)、高(1.2mM)浓度Caf.体外培养SD孕18天胎鼠、0天及4天乳鼠睾丸组织块,培养时间分别为1周、2周、3周,观察Caf.对睾丸内生殖细胞数量及其表达PCNA的影响.结果如下:(1)18天胎鼠睾丸培养组织内生殖细胞数量受Caf.影响最小,0天乳鼠次之,4天乳鼠受影响较大.(2)低浓度的Caf.对生殖细胞数量影响较少;中等浓度的Caf.在培养三周后,生殖细胞的数量才减少;而高浓度的Caf.在培养二周后,生殖细胞数量已有下降,三周更明显.(3)Caf.对生殖细胞PCNA表达阳性率无明显影响,但PCNA含量在大多数实验组都有降低.由此可知高浓度Caf.长时间培养后使生殖细胞数量减少,降低了生殖细胞PCNA的含量.

咖啡因对胎鼠及乳鼠睾丸生殖细胞数量及合成DNA的影响

为了深入了解咖啡因对胎儿、新生儿生殖细胞的数量及其合成ＤＮＡ的影响，本实验采用低（３×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）、中（６×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）、高（１．２×１０－３ｍｏｌ／Ｌ）浓度咖啡因体外培养ＳＤ孕１８天胎鼠、０天及４天乳鼠睾丸组织块，培养时间分别为１周、２周、３周，观察咖啡因作用后睾丸内生殖细胞数量的变化，并且利用计算机图象分析系统测定生殖细胞ＤＮＡ的含量，以探讨两者的关系。结果如下：（１）１８天胎鼠睾丸培养组织的生殖细胞受咖啡因影响最少，０天乳鼠次之，４天乳鼠受影响较大。（２）低浓度的咖啡因对生殖细胞数量影响较少；中等浓度的咖啡因在培养３周后才有生殖细胞数量的降低；而高浓度的咖啡因在培养２周后，已有下降，３周更明显。（３）生殖细胞数量的减少往往伴随ＤＮＡ含量的降低，由此推测高浓度咖啡因长时间培养后使生殖细胞数量减少，可能通过抑制ＤＮＡ复制发挥作用。