叶片用超低碳不锈钢冶炼技术

介绍了我厂为冶炼三峡不锈钢叶片ZGOCr13Ni4Mo钢进行的设备改造,以及ZGOCr13Ni4Mo钢VOD(真空氧脱碳)冶炼工艺流程和试验结果等。

锅炉的运行安全与管理

加强锅炉运行管理是保证安全生产、节能降耗、加强环保重要的手段。要从管理入手,实现锅炉运行各项指标。

人呼吸道合胞病毒纳米抗体的构建及活性

目的 通过免疫羊驼和噬菌体建库筛选出人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)纳米抗体(nanobodies,Nbs),并评价其结合活性和中和活性。方法 使用RSV重组F蛋白免疫2只羊驼,构建噬菌体文库,筛选得到纳米抗体的骨架区(framework region,FR)和抗原互补决定区(complementarity determining region,CDR)序列,将序列重组构建出3株RSV纳米抗体,使用Ni-NTA亲和层析纯化后,ELISA法检测纳米抗体的结合活性,RSV A2株评价纳米抗体的中和活性。结果 3株纳米抗体BF-42、BF-46、Fh-24相对分子质量约为17 000,纯化后抗体纯度约为95%;BF-42、BF-46浓度为0.16μg/mL,Fh-24浓度为32 ng/mL时仍有结合活性,三者结合能力存在剂量依赖性;3株纳米抗体浓度为450μg/mL时,均可保护50%Hep2细胞免受病毒感染,出现50%致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),能够有效中和病毒。结论 构建的3株纳米抗体具有较高的结合活性和一定的中和能力,为RSV纳米抗体的应用奠定了基础。

生产场地变更对水痘减毒活疫苗质量的影响

目的评价生产场地变更对水痘减毒活疫苗质量的影响。方法采用新一代基因测序技术(next-generation sequencing,NGS)。将生产场地变更前后的水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株毒种(VW-前、SYVW-后)与水痘减毒活疫苗原液(P-前、YZP-后)经DNA抽提、纯化、建库和测序,并对测序结果进行质量评价。以GenBank中登录的Dumas株基因序列(NC_001348)作为位置参考基因组,将生产场地变更前后4个样品全基因序列进行对比,从突变位点、碱基组成及突变频率(variant allele frequency,VAF),评价生产场地变更前后样品的一致性。结果4个样品的测序深度均>1500×,毒种及疫苗原液GC含量均约46%,测序质量较高。生产场地变更前后毒种及疫苗原液的突变位点和碱基组成一致,且VAF接近,4个样品两两比较,均呈高度相关(R^(2)均≥0.990,P均<0.001)。结论经NGS检测,工艺变更对水痘减毒活疫苗质量无影响。

呼吸道合胞病毒重组F蛋白疫苗的制备及免疫效果评价

目的制备呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)重组F蛋白疫苗,并对其免疫效果进行评价。方法制备两种基于RSV F蛋白的RSV疫苗:一种是以细菌样颗粒(bacterial like particle,BLP)为佐剂的黏膜疫苗,一种是以Al(OH)_(3)为佐剂的注射疫苗。将40只雌性BALB/c小鼠随机分为4组:BLP-F、BLP对照、AL-F和AL对照组,每组10只,BLP-F和BLP对照组经鼻内接种,AL-F和AL对照组经皮下接种。分别于第0、14、28天各免疫1次。末次免疫后2周,ELISA法检测小鼠血清IgG抗体效价及鼻洗液中IgA抗体效价,空斑试验检测中和抗体效价。结果两种疫苗均诱导了高水平的血清结合抗体和中和抗体,注射疫苗的诱导能力强于黏膜疫苗,注射疫苗可诱导血清中IgG升高,比黏膜免疫应答高约10倍,但不能诱导IgA升高,而黏膜疫苗可诱导高水平的黏膜IgA,但血清中IgG抗体相对较低。结论两种基于RSV F蛋白的疫苗均为有前途的候选疫苗,每种疫苗均有其自身的优势。后续研究将采用联合免疫的方式评估这两种疫苗作为免疫原的可行性,以同时增强针对RSV的全身和黏膜免疫应答。

抗肺炎链球菌溶血素蛋白单克隆抗体的制备及表征

肺炎是导致全球5岁以下儿童发病或死亡的常见疾病。目前市售疫苗均为多糖或多糖结合组分，难以对90多种肺炎链球菌进行广谱的覆盖，且随着疫苗的广泛应用，血清型替代现象也日趋严重。为解决这些问题，以肺炎链球菌蛋白作为疫苗组分的蛋白疫苗被寄予厚望。肺炎链球菌溶血素蛋白（ Ply）在所有肺炎链球菌株中均表达且高度保守，成为广谱肺炎蛋白疫苗的候选组分。前人研究表明，Ply在肺炎链球菌感染模型上，与野生型相比较，Ply的缺失与肺部损伤的降低、细菌菌落数的降低、肺部中性粒细胞的减少及延长生存时间等具有直接关联。天然结构的 Ply （Plywt）溶血活性极强，对细胞毒性很大，无法直接作为免疫原，本实验室制备了Plywt的减毒突变体Plym2。本研究利用Plym2研制了Ply的单克隆抗体，用于建立准确简便的检测Ply的方法。

水痘-带状疱疹病毒高效价中和抗体的制备及应用

目的制备水痘-带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV)高效价特异性免疫血清,用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。方法将高纯度重组gE糖蛋白分别与弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂及MF59佐剂组合,免疫雄性家兔,每组2只,免疫后第56天,每只最大量采血(心脏或颈动脉)制备血清,与VZV混合进行中和反应后,接种至长满单层MRC-5株人二倍体细胞的6孔板中,孵育7 d,计数空斑数,检测免疫血清的中和效价和中和病毒能力;选择高中和效价和高中和病毒能力血清进行水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗VZV(Oka株)工作种子批毒种鉴别试验和外源病毒因子检查。结果重组gE糖蛋白的多种组合免疫家兔后制备的免疫血清均具有中和活性,其中重组gE糖蛋白与弗氏佐剂组合免疫后制备的血清中和效价最高,为1:512,中和病毒能力可达240000 PFU/mL;制备的免疫血清用于VZV(Oka株)工作种子批毒种鉴别试验和外源病毒因子检查,结果均符合要求。结论重组gE糖蛋白可用于VZV高效价中和抗体制备,制备的高效价中和抗体适用于水痘减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗质量控制。

肺炎球菌表面蛋白的制备及免疫原性评价

目的：获得PspA4蛋白，并检验其免疫原性。方法通过基因合成获得PspA4基因，通过体外重组技术构建重组质粒，并使用大肠杆菌表达PspA4蛋白，免疫后通过ELISA测定小鼠血清中特异性IgG的效价研究PspA4蛋白的免疫原性。结果获得了纯度90％以上的PspA4蛋白，抗体效价检测的实验结果显示PspA4免疫组的抗体滴度与空白组有明显提高，说明重组的PspA4蛋白在大肠杆菌的表达产物具有高免疫原性。结论该研究为以肺炎球菌表面蛋白为基础的疫苗研究奠定了基础，结合PspA蛋白的多亚型特点，PspA4作为肺炎疫苗的备选蛋白之一有待进一步研究。

呼吸道合胞病毒感染的防治及疫苗研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)引起的感染是造成婴儿与老年人呼吸道疾病的主要原因之一。当机体免疫力低下时,RSV可引起机体上呼吸道感染,严重者可导致支气管炎和肺炎,甚至死亡,严重威胁婴幼儿及老年人的生命和健康。治疗上,主要以对症支持治疗为主。接种疫苗是最有效的预防RSV感染的手段,目前,国外已有两款RSV疫苗于今年上市;但国内至今无RSV疫苗上市。随着研究的深入以及新技术的应用,很多候选RSV疫苗已经做到临床晚期研究并且已经显示出很好的安全性和有效性,本文对呼吸道合胞病毒病原体的生物学特征、致病机制、预防与治疗、以及疫苗的研究进展进行了综述。

戊型肝炎病毒ORF2抗原的制备及其免疫原性评价

目的制备戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2抗原,并对其免疫原性进行分析。方法通过基因合成获得HEV ORF2目的基因,构建重组杆状病毒,并在sf9昆虫细胞中优化表达;采用超声、硫酸铵沉淀及层析纯化HEV ORF2蛋白,免疫小鼠分析其免疫原性。结果制备的重组杆状病毒滴度为1×108 PFU/m L;重组蛋白表达条件MOI为1,收获时间为5 d时,表达量最高为20 mg/L;通过纯化获得HEV ORF2蛋白纯度> 95%;其疫苗组血清特异性抗体效价与PBS对照组比较差异有统计学意义(P <0. 05)。结论成功表达并纯化了HEV ORF2蛋白,该纯化方法可获得纯度较高的目的蛋白,且制备的HEV ORF2蛋白具有很好的免疫原性,可用于制备和开发预防性疫苗。

细菌样颗粒作为疫苗佐剂的研究进展

细菌样颗粒(bacterium-like particle,BLP)是一种无生命活性的球型颗粒,主要成分为乳酸乳球菌肽聚糖壳。BLP可作为系统免疫疫苗与黏膜免疫疫苗的佐剂,通过激活固有性免疫系统发挥佐剂的功能,特别是作为黏膜佐剂,能同时增强抗原特异性黏膜免疫应答和全身免疫应答。本文对BLP佐剂疫苗的优势、应用与疫苗设计进行综述。

呼吸道合胞病毒滴度间接免疫荧光检测方法的建立及验证

目的建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度的间接免疫荧光检测方法,并进行验证。方法以Synagis(Palivizumab)为一抗,荧光标记羊抗人IgG为二抗,建立用于RSV滴度检测的间接免疫荧光法,并对HEp-2细胞接种密度(3×104、4×104、5×104、6×104、7×104、8×104个/孔)、细胞培养液中胎牛血清浓度(2.5%、5%、10%、20%)、病毒培养时间(20、24、26、30、38、48 h)、抗体稀释度[一抗:1∶(1000/3)、1∶1000、1∶3000、1∶9000,二抗:1∶(400/3)、1∶400、1∶1200]进行优化。验证方法的特异性、线性范围、准确性、重复性。结果建立的方法最佳工作条件:HEp-2细胞接种密度为6×104个/孔,胎牛血清浓度为2.5%,病毒培养时间为24~26 h,一抗稀释度为1∶1000,二抗稀释度为1∶400。RSV可见特异性荧光,狂犬病病毒、流感病毒、风疹病毒均未见荧光;RSV滴度理论值在1.70×107~5.43×103 FFU/mL范围内,与检测值呈良好的线性关系,回归方程为y=1.0313 x-0.2508,R2=0.9897;准确性验证回收率在70%~130%范围内;重复性验证RSD均≤15%。结论建立的RSV滴度间接免疫荧光检测方法具有良好的特异性、准确性、重复性,且检测周期短,可用于RSV滴度快速检测。