鸢尾素改善载脂蛋白E基因敲除糖尿病小鼠动脉粥样硬化

目的:探索鸢尾素(Irisin)对动脉粥样硬化的作用及其可能机制。方法:建立载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠糖尿病模型(n=20)并分为鸢尾素组(n=10)、糖尿病对照组(n=10),同时设立空白对照组(n=10),分别静脉注射鸢尾素或等量生理盐水。鸢尾素干预4周后,测定血管内皮依赖性舒张功能。干预12周后,检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白、白细胞介素-6(IL-6)及氧化低密度脂蛋白等炎性因子水平;油红O及苏木素伊红(HE)染色分析主动脉粥样斑块表面积及横断面积;抗CD68和抗CD90免疫组化染色测定斑块巨噬细胞及T淋巴细胞浸润;实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉壁IL-6、白细胞介素-10、TNF-α等炎性因子信使核糖核酸(m RNA)转录水平。结果:鸢尾素组与糖尿病对照组相比,小鼠内皮依赖性舒张功能改善,血中炎性因子水平降低,粥样斑块表面积[(22.57±2.17)%vs(35.09±2.38)%,P<0.05]及横断面积[(19.36±1.85)%vs(25.53±7.87)%,P<0.05]减小,斑块巨噬细胞[(30.5±2.79)%vs(41.34±9.13)%]、T淋巴细胞[(28.11±4.24)%vs(35.79±9.11)%]浸润减少,主动脉壁炎性因子m RNA转录水平下降[IL-6:1.76±0.50 vs 3.78±1.15;TNF-α:1.05±0.30 vs 2.11±0.48;细胞内黏附分子-1:1.96±0.69 vs 2.71±0.72;血管细胞黏附分子-1:0.87±0.21 vs 1.45±0.25;单核细胞趋化蛋白-1:1.34±0.34 vs 1.77±0.55],差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鸢尾素可改善Apo E-/-糖尿病小鼠动脉粥样硬化,内皮保护及抗炎反应是其保护血管的重要机制。鸢尾素具有潜在的防治动脉粥样硬化的临床价值。

基于“互联网+”的心脑血管疾病“协防共管”健康管理模式对社区重点监测人群血压改善的效果评价

目的·探讨基于“互联网+”的心脑血管疾病“协防共管”健康管理模式对社区重点监测人群的血压改善效果。方法·选取2020年1月—2021年7月在广州市增城区新塘镇参与国家基本公共卫生服务项目年度体检至少2次的社区重点监测人群,按照是否接受“互联网+”心脑血管疾病“协防共管”健康管理模式将其分为常规治疗组(n=2987)和“协防共管”模式组(n=2876)。常规治疗组接受常规模式管理,即每年1次的常规体检;“协防共管”模式组除常规治疗外,还需接受“互联网+”健康教育,其所在村落被投放可穿戴心电监测设备。对2组受试者的基线水平(干预前)进行比较,观察2组受试者于干预前后的血压变化差值情况。采用协方差分析不同干预措施对血压的影响是否受其基线血压水平的影响,并运用多因素线性回归模型探讨基于“互联网+”的心脑血管疾病“协防共管”健康管理模式与血压及其他心血管疾病危险因素控制情况的相关性。结果·与常规治疗组相比,“协防共管”模式组受试者的基线收缩压、舒张压均较高(均P=0.000)。在中位干预时间227 d后,“协防共管”模式组受试者的收缩压、舒张压在干预前后的变化分别为−0.28 mmHg(95%CI−0.94~0.37,P=0.398)、−0.68 mmHg(95%CI−1.09~−0.27,P=0.001);常规治疗组受试者的变化分别为2.92 mmHg(95%CI 2.29~3.54,P=0.000)、−0.12 mmHg(95%CI−0.51~0.28,P=0.554);干预前后收缩压、舒张压变化差值的2组间差异分别为3.20 mmHg(95%CI 2.29~4.11,P=0.000)、0.56 mmHg(95%CI−0.01~1.13,P=0.055)。协方差分析显示,在校正了干预前的收缩压后,与常规治疗组相比,“协防共管”模式组受试者干预后的收缩压降低了2.06 mmHg(P=0.000)。在多因素线性回归模型中,校正混杂因素后,基于“互联网+”的心脑血管疾病“协防共管”健康管理模式与收缩压下降相关(P=0.000)。结论·基于“互联网+”的心脑血管疾病“协防共管”健康管理模式有助于改善社区重点监测人群的收缩压控制。

鸢尾素通过激活3-磷酸磷脂酰肌醇激酶-蛋白激酶B-内皮型一氧化氮合酶信号转导途径抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：探索鸢尾素对高糖培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）作用及其相关机制。方法 HUVECs加或不加磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002或（和）内皮型一氧化氮合酶（eNOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）预培养30 min后，按是否加入鸢尾素分为6组：正糖（NG）组、高糖（HG）组、高糖＋鸢尾素组、高糖＋LY294002＋鸢尾素（LY）组、高糖＋L-NAME＋鸢尾素（L-NAME）组、高糖＋LY294002＋L-NAME＋鸢尾素（LY＋L-NAME）组，培养48 h后应用原位末端标记（TUNEL）法检测各组细胞凋亡率，活性氧试剂盒及实时-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞氧化应激水平，Western blotting法检测各组细胞蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（P-Akt）、eNOS、磷酸化eNOS （P-eNOS）水平。HUVECs以随机序列小干扰RNA（Scr-siRNA）转染作对照或以eNOS干扰RNA （eNOS-siRNA）转染沉默eNOS基因后，分成4组：正糖＋Scr-siRNA（NG＋Scr-siRNA）组、高糖＋Scr-siRNA（HG＋Scr-siRNA）组、高糖＋Scr-siRNA＋鸢尾素（HG＋Scr-siRNA＋irisin）组、高糖＋eNOS-siRNA＋鸢尾素（HG＋eNOS-siRNA＋irisin）组，培养48 h后应用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染法检测各组细胞凋亡率。采用单因素方差分析（ANOVA）法比较各组数据。结果高糖组HUVECs氧化应激和凋亡率比正糖组明显升高（25.6%±3.2%比6.0%±1.5%，t=-13.55，P〈0.01），而鸢尾素组凋亡率较高糖组显著下降（19.8%±2.3%比25.6%±3.2%，t=-3.55，P〈0.01）。LY组、L-NAME组和LY＋L-NAME组HUVECs凋亡率均较鸢尾素组显著升高（t=-3.85、-5.19、-7.11，均P〈0.01）。HUVECs的eNOS基因沉默后，高糖＋Scr-siRNA组细胞凋亡率比正糖＋Scr-siRNA组显著增加（58.0%±7.8%比12.4%±2.8%，t=-13.48，P〈0.01），高糖＋Scr-siRNA＋鸢尾素组细胞凋亡率明显低于高糖＋Scr-siRNA组（27.8%±5.3%比58.0%±7.8%，t=-7.84，P〈0.01），而高糖＋eNOS-siRNA＋鸢尾素组细胞凋亡率显著高于高糖＋Scr-siRNA＋鸢尾素组（48.1%±5.5%比27.8%±5.3%，t=-6.48，P〈0.01）。高糖组P-Akt/Akt、P-eNOS/eNOS水平比正糖组显著降低（均P〈0.01），鸢尾素组P-Akt/Akt、P-eNOS/eNOS水平明显高于高糖组（均P〈0.01），而LY组、L-NAME组及LY＋L-NAME组P-Akt/Akt、P-eNOS/eNOS水平较鸢尾素组均显著降低（均P〈0.01）。结论鸢尾素可抗高糖诱导的HUVECs氧化应激和凋亡，其保护内皮细胞的机制与激活PI3K-Akt-eNOS信号转导途径有关。鸢尾素具有潜在的防治糖尿病血管并发症的临床价值。

GDF11对高脂喂养ApoE-/-小鼠主动脉保护作用的研究

目的：探讨生长分化因子11（GDF11）对载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠主动脉的作用及可能机制。方法4周龄健康雄性ApoE-/-小鼠适应性喂养1周后分为阳性对照组（Vehicle组,n=10）、GDF11干预组（ GDF11组, n=10）、腺相关病毒-绿色荧光蛋白组（ AAV-GFP 组, n=10）和腺相关病毒-GDF11组（AAV-GDF11组,n=10）。分别给予腹腔注射磷酸盐缓冲液、GDF11蛋白、尾静脉注射AAV-GFP和AAV-GDF11,干预4周后,测定血清GDF11/8浓度和血管内皮依赖性舒张功能。干预12周后,检测血清GDF11/8、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、氧化型低密度脂蛋白（ ox-LDL）及游离脂肪酸（ FFA）水平；油红O及苏木素伊红（ HE）染色分析主动脉粥样斑块表面积及横断面积；抗CD68和抗CD90免疫组化染色测定斑块巨噬细胞及T淋巴细胞浸润；实时定量PCR分析主动脉壁IL-6、TNF-α及IL-10等炎性因子mRNA水平。结果与对照组相比,GDF11和AAV-GDF11显著改善小鼠内皮依赖性舒张功能,降低血中炎性因子、血脂水平,减少动脉粥样斑块表面积[ Vehicle组：GDF11组：（31.23±3.12）%对（17.18±2.17）%；AAV-GFP组： AAV-GDF11组：（38.01±4.43）%对（14.54±2.86）%,P＆lt;0.05]及横断面积[Vehicle组： GDF11组：（19.87±2.11）%对（10.32±1.47）%；AAV-GFP组： AAV-GDF11组：（23.02±2.76）%对（9.06±1.63）%,P＆lt;0.05],减轻斑块内巨噬细胞及T淋巴细胞的浸润,降低主动脉壁炎性因子mRNA转录水平（均P＆lt;0.05）。结论 GDF11可减轻ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化病变,其机制可能与保护内皮、减轻炎症及改变斑块中细胞组成有关。

生长分化因子11对软脂酸诱导小鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的探索生长分化因子11 （GDF-11）对软脂酸（PA）诱导的小鼠主动脉内皮细胞（MAECs）的作用及其相关机制。 方法通过加或不加内皮型一氧化氮合酶（eNOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）或Smad3抑制剂SIS3研究eNOS和Smad通路在GDF-11保护软脂酸诱导的MAECs中的作用，将MAECs分为：（1）对照组；（2）PA组；（3）PA＋GDF-11组；（4）PA＋GDF-11＋L-NAME组；（5）PA＋GDF-11＋SIS3组，培养24 h后，活性氧试剂盒及实时-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞氧化应激水平；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；Western blotting法检测各组抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax及Cleaved-caspase3蛋白表达水平。研究GDF-11对MAECs Smad信号通路的影响，MAECs分为：（1）对照组；（2）GDF-11组；（3）GDF-11＋转化生长因子β（TGF-β）受体Ⅰ抑制剂组（GDF-11＋ SB431542组），培养30 min后，免疫荧光染色法检测各组MAECs细胞磷酸化Smad2/3 （P-Smad2/3）表达水平；研究GDF-11对MAECs AMPK/eNOS信号通路的影响，MAECs分为：（1）对照组；（2）GDF-11组；（3） GDF-11＋AMPK抑制剂Compound C组；（4）GDF-11＋L-NAME组；（5）GDF-11＋Compound C＋L-NAME组，培养30 min后，Western blotting法检测各组细胞AMPK、磷酸化AMPK （P-AMPK）、eNOS、磷酸化eNOS （P-eNOS）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt （P-Akt）、蛋白激酶A （PKA）、磷酸化PKA （P-PKA）水平。多组之间比较采用单因素方差分析，组间多重比较用最小显著性差异t检验。 结果与对照组相比，PA组细胞氧化应激和凋亡率显著增加（28.9%±2.2％比7.9%±1.5%），PA＋GDF-11组细胞氧化应激和凋亡率明显低于PA组（12.6%±1.6％比28.9%±2.2%），而PA＋GDF-11＋L-NAME组和PA＋GDF-11＋SIS3组细胞氧化应激和凋亡率又明显低于PA＋GDF-11组（分别为21.8%±2.0%、20.1%±1.8%、12.6%±1.6%，F= 97.89，P〈0.05）。与对照组相比，GDF-11组P-Smad2/3表达水平明显增加，而GDF-11＋SB431542组P-Smad2/3表达水平明显降低（F=325.30 ，P〈0.05）。与对照组相比，GDF-11组P-AMPK/AMPK、P-eNOS/eNOS水平显著提高，P-Akt/Akt、P-PKA/PKA水平无明显差异，分别加入了Compound C、L-NAME或者Compound C联合L-NAME显著抑制了P-AMPK/AMPK、P-eNOS/eNOS表达水平（F=237.65、281.08，均P〈0.05），而对P-Akt/Akt、P-PKA-PKA水平无明显影响（F=1.94、1.48，均P〉0.05）。 结论GDF-11可抗软脂酸诱导的MAECs氧化应激和凋亡，增加Bcl-2表达水平、降低Bax、Cleaved-caspase3表达水平，其保护内皮细胞的机制与激活TGF-β/Smad和AMPK/eNOS信号途径有关。

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体对2型糖尿病大鼠内皮依赖性血管舒张功能的影响

目的观察TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)对T2DM大鼠主动脉内皮依赖性血管舒张功能的影响及其可能的机制。方法选取4周龄雄性SD大鼠,分为正常对照组(NC,n=10)与模型组(n=40),随机将模型组分为T2DM亚组(n=10)与TRAIL亚组(TRAIL,n=10)。TRAIL干预6周后,检测各组FPG及FIns水平,计算ISI。检测NC组与TRAIL亚组血清TRAIL水平。观察大鼠离体主动脉内皮依赖性血管舒张反应,并检测主动脉一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶活性(eNOS)。结果与NC组比较,T2DM亚组FPG、FIns水平升高(P<0.01),ISI降低(P<0.01),血清TRAIL水平降低(P<0.01);血管内皮功能失调,乙酰胆碱(Ach)引起的血管最大舒张率降低(P<0.01),血管中NO含量及eNOS阳性表达降低(P<0.01或P<0.01)。TRAIL亚组血管Ach的舒张反应改善(P<0.01);血管中NO含量增加且eNOS阳性表达上调(P<0.05或P<0.01);FPG、FIns降低,ISI提高(P<0.01)。结论 TRAIL改善T2DM大鼠内皮依赖性血管舒张功能的同时,可促进具有血管保护作用的NO生成。

GDF11对ApoE-/-糖尿病小鼠内皮依赖性血管舒张功能的作用

目的 研究生长分化因子11(GDF11)对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)糖尿病小鼠胸主动脉内皮依赖性血管舒张功能的影响,探讨其可能的机制.方法 40只4周龄健康雄性ApoE-/-小鼠按随机数字法选择10只作为正常对照组(NC组),以正常饲料喂养,其余30只以高脂饲料喂养4周后,连续5d腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)制备2型糖尿病模型.将造模成功小鼠共20只按随机数字法分为GDF11组(0.1 mg·kg-1·d-1腹腔注射,n=10)和糖尿病对照组(T2DM组,等量磷酸盐缓冲液腹腔注射,n=10).干预4周后,检测各组空腹血糖、空腹胰岛素、HbA1c、GDF11浓度,并计算稳态模型评估-胰岛素敏感性指数(HOMA-ISI);测定各组小鼠离体胸主动脉条的张力反应及主动脉一氧化氮含量,Western印迹检测主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化eNOS(P-eNOS)、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)水平.结果 与NC组相比,T2DM组空腹血糖、空腹胰岛素、HbA1c水平升高,GDF11浓度及HOMA-ISI降低,乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张反应降低;与T2DM组相比,GDF11组上述指标均有改善(F=70.923～675.430,P均＜0.01).而硝普钠诱导的内皮非依赖性舒张反应各组间差异无统计学意义(P＞0.05).与NC组相比,T2DM组血管中一氧化氮含量、P-eNOS水平、磷酸化Smad2/3水平下降,GDF11组上述指标均有显著升高(F=40.120～148.060,P均＜0.01).结论 GDF11通过促进一氧化氮生成,激活Smad2/3信号通路,改善ApoE-/-糖尿病小鼠内皮依赖性血管舒张功能.

TRAIL对糖尿病大鼠主动脉的保护作用

4周龄雄性SD大鼠经高脂喂养8周后予小剂量链脲佐菌素腹腔注射以建立糖尿病模型,分为糖尿病组和瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis ligand,TRAIL）干预组,另选正常SD大鼠为对照组.TRAIL干预3个月.与糖尿病组相比,TRAIL干预组总胆固醇、甘油三酯、血糖、胰岛素显著降低,大鼠主动脉粥样斑块病变面积及光镜下内膜厚度减小[（23.8±5.7）％对（47.6±7.8）％].提示TRAIL可减轻糖尿病大鼠动脉粥样硬化病变.