芽胞杆菌JZB30-1的鉴定及其对番茄灰霉病的生防作用

为获得对番茄灰霉病具有良好防效的生防芽胞杆菌,采用对峙培养、双层平板以及生防相关特性检测等方法筛选高活性拮抗菌株,根据形态学、生理生化特性及多基因测序进行菌株种类鉴定,通过离体果实和盆栽试验明确供试菌株的防病促生效果。结果表明,芽胞杆菌JZB30-1对番茄灰霉病菌等10余种植物病原真菌和细菌具有广谱抑菌活性;该菌株具有合成蛋白酶、纤维素酶、脂肽类物质,分泌铁载体、生长激素及溶磷等特性,经鉴定其为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens;菌株JZB30-1无菌发酵滤液50倍液喷施处理,对番茄果实灰霉病防效为95.0%,发酵液10倍稀释液灌根,番茄株高、鲜重分别较对照增加25.7%和28.4%。相关结果为利用解淀粉芽胞杆菌JZB30-1进行番茄灰霉病生物防治提供理论依据。

解淀粉芽胞杆菌MH71摇瓶发酵培养基及发酵条件优化

从黑龙江省漠河多年永冻土层采集的冻土样品中分离的拮抗菌解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens MH71,对多种植物病原真菌和细菌具有较强的拮抗作用。本研究主要以无菌滤液对番茄灰霉病菌的抑菌活性为检测指标,采用单因素试验筛选菌株MH71的最佳产抗菌物质培养基及最佳碳源、氮源和无机盐,运用Minitab软件,通过Box-Benhnken试验及响应面分析相结合的方法对该菌株产抗菌物质的发酵培养基配方和摇瓶发酵条件进行了优化。结果表明,菌株MH71产抗菌物质最佳培养基组成为玉米粉36.6 g/L、牛肉膏3.2 g/L、Na Cl 1.33 g/L、葡萄糖14 g/L、蛋白胨7 g/L、Mg SO40.4 g/L、K2HPO4 0.8 g/L、Ca CO3 8 g/L。最适发酵条件为培养温度30℃、摇床转速200 r/min、发酵起始p H 7.0、接种量3%、装液量100 m L/500 m L、发酵时间为72 h。在最佳培养基和培养条件下,菌株MH71的活菌数达到了2.1×109 CFU/m L,芽孢数为1.2×109 CFU/m L,同时对番茄灰霉病菌的抑菌能力较优化前提高了37.4%。

一株甘蓝枯萎病拮抗细菌的筛选、鉴定及其抑菌活性测定

采用系列稀释法和平板涂布法从黑龙江漠河地区的永久冻土层20份土壤样品中分离得到172株细菌菌株,经平板对峙法初筛得到10株拮抗菌,经复筛得到了1株对甘蓝枯萎病菌有较强抑制作用的拮抗细菌MH71菌株。通过菌落形态观察、生理生化测定、16S rDNA和16S^23S rDNA之间的ITS特异性序列分析等,表明MH71菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。该菌株对镰刀病菌、灰葡萄孢及炭疽病菌等15种农业生产上常见的植物病原真菌和黄瓜角斑、平菇褐斑、大白菜黑腐和啤酒酵母菌等植物病原细菌和酵母菌均有不同程度的拮抗作用,表现出广谱抗菌活性。此结果表明:MH71菌株是一株极具开发潜力的生防菌株。

利迪链霉菌A01活性代谢产物对甘蓝枯萎病菌的抑制作用及其机理

【目的】明确生防利迪链霉菌A01菌株的活性代谢产物纳他霉素对甘蓝枯萎病菌的抑制作用及其机理,为其下一步的产品开发和应用提供科学依据。【方法】分别采用带毒平皿法和凹玻片法测定活性产物对病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用,采用电导率法和美蓝染色法分别测定其对菌丝体细胞膜通透性和细胞存活性的影响,借助电镜观察其对菌丝超微形态和结构的影响。【结果】纳他霉素对甘蓝枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发的最低抑菌浓度分别小于或等于31.92和41.04μg.mL-1,抑制中浓度分别为8.69和3.06μg.mL-1;30μg.mL-1以上浓度的纳他霉素处理90 min后可使菌丝悬浮液电导率明显升高,其作用强度与纳他霉素的浓度和作用时间呈正相关;处理后的菌丝生长异常或畸形,并出现细胞器解体、细胞液泡化等现象;10μg.mL-1以上纳他霉素处理120 min后菌丝大部分可被美蓝染成蓝色。【结论】纳他霉素对甘蓝枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发均有明显的抑制作用,能够增加病菌细胞膜的通透性,破坏菌丝细胞的形态和结构,导致其丧失存活能力。

解淀粉芽胞杆菌MH71的生防活性及脂肽类抗生素基因检测

从漠河多年永冻土层采集的冻土样品中分离的拮抗菌解淀粉芽胞杆菌MH71,对多种植物病原真菌和细菌具有较强的拮抗作用。本文对该菌株的生防活性相关特性及其对番茄灰霉病的离体防效进行了研究,同时,应用特异性引物对MH71中脂肽类抗生素合成有关基因进行检测。结果表明,该拮抗菌产生嗜铁素、蛋白酶、纤维素酶和吲哚-3-乙酸(IAA),不产生磷酸酯酶和几丁质酶;番茄离体叶片第5天调查结果表明该菌发酵液对番茄灰霉病的防效为92.8%,而在番茄果实上第7天和第11天调查的结果表明,与清水对照对比,发酵原液、发酵液5倍稀释液与50%啶酰菌胺1 000倍液化学农药对番茄灰霉病均有良好的防治效果,防效均为100%;从该菌的基因组DNA中扩增得到了fenB、mycB、ituA、sfp等脂肽类抗生素合成酶基因。此研究结果为该拮抗菌生防潜力的深入评价及活性物质的分离、鉴定和番茄灰霉病的生物防治提供了重要的参考资料。

植物微生态制剂对草莓育苗·灰霉病及产量的影响

通过在草莓育苗和定植后施用植物微生态制剂,与常规施肥进行对比,比较不同处理对草莓育苗情况、灰霉病及草莓品质、产量的影响。结果表明,在草莓苗期,增施植物微生态制剂能够显著提高叶面积、茎粗、定植成活率,降低发病率。草莓整个生长期增施植物微生态制剂,对灰霉病的防治效果为68.37%,增产16.28%,且能够显著提高草莓的甜度。由此可知,植物微生态制剂能够有效控制草莓灰霉病,同时起到提质增效的效果,值得大面积推广。

拮抗放线菌A02活性产物的分离和鉴别特性研究

为了明确利迪链霉菌A02抑菌活性物质的分离和鉴别特征,利用pH纸层析和纸电泳试验检测了其离子特性,有机溶剂萃取和硅胶薄层色谱分离测定了其极性,捷克八溶剂系统纸层析、紫外光谱扫描、官能团化学反应和蛋白酶敏感性试验分析了其化学类型。结果表明,菌株A02代谢活性产物在酸性和碱性溶液中呈电中性,但其极性较强,能被正丁醇高效萃取,乙醇∶氨水∶水(8∶1∶1,V/V)的溶剂组合对其薄层色谱分离效果较好;对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感,化学反应显示出不饱和烯键或炔键、糖苷键、氨基和醛基特性;结合纸层析谱型和紫外吸收图谱,判断其为四烯大环内酯类抗生素。此结果揭示了利迪链霉菌产生四烯大环内酯类抗生素的新功能。

放线菌A01发酵液中活性成分稳定性及其化学类型

本文研究了对多种植物病原真菌均表现出良好抑菌活性的菌株A01发酵液中活性成分对热、酸碱、蛋白酶及紫外线的稳定性,并采用pH纸层析、捷克氏八溶剂系统纸层析、纸电泳和紫外波长扫描等方法对其进行了化学类型的早期鉴别。结果表明,菌株A01发酵液中活性物质在中性及偏碱性环境中比较稳定;100℃处理30min相对活性还保持在81.19%;对蛋白酶不敏感,但对紫外线较敏感;紫外扫描在291、305和319nm处有典型共轭四烯生色基团的吸收峰,结合纸层析和纸电泳结果,表明该活性物质归为四烯类中性抗生素。

解淀粉芽胞杆菌MH71抗菌物质理化特性及对番茄灰霉病菌的抑菌活性

解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens MH71是一株高效广谱拮抗活性菌株,明确该菌株发酵液中活性物质的理化特性和抑菌活性,为解淀粉芽胞杆菌生物农药开发应用奠定坚实的基础。本研究在对菌株MH71抑菌活性物质理化特性研究的基础上,以番茄灰霉病菌为供试致病菌,探究了抗菌活性物质对番茄灰霉病菌的抑菌作用;采用酸沉淀和硫酸铵沉淀分别获得脂肽类和蛋白类活性物质,SDS–PAGE电泳和HPLC分别对活性物质进行检测。该菌活性物质具有较强的耐热性和p H适应性,100℃处理60 min和121℃处理30 min后抑菌活性分别为原有活性的88.98%和79.60%,在pH 3~11时均有抑菌活性,且对紫外线、蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶不敏感。该抗菌活性物质对番茄灰霉病菌菌丝的毒力测定结果表明,不同浓度发酵液处理的番茄灰霉病菌菌丝呈现出较多局部膨大或溢缩等异常菌丝。其发酵液经酸沉淀法得到抗菌脂肽类活性物质,经硫酸铵沉淀法得到抗菌蛋白,脂肽类的抑菌活性高于抗菌蛋白类物质,SDS–PAGE电泳检测,得到约40 k D的蛋白条带,HPLC检测表明该抗菌物质中有surfactin存在。

响应曲面法优化利迪链霉菌A02发酵培养基

为了提高纳他霉素新产生菌利迪链霉菌Streptomyces lydicus A02的发酵水平,采用部分因子法、最陡爬坡试验和中心组合试验相结合的方法对该菌株的发酵培养基进行了优化。试验结果表明,培养基中的玉米淀粉、棉籽精粉和葡萄糖是影响纳他霉素产量的主要因子,由所得响应曲面方程预测出这3个主要因子的质量浓度分别为52.7,31.7和11.7g?L-1时,纳他霉素产量达最大值1735.3mg?L-1;经摇瓶和30L发酵罐试验验证,该理论预测值与实测值无显著差异;优化后培养基的产能较基础发酵培养基提高了32.9%～34.8%。据此认为,响应面法对利迪链霉菌产纳他霉素发酵培养基的优化具有实效性,本研究为其高产发酵工艺的建立奠定了基础。

一株芽胞杆菌QD-10的鉴定及生防特性分析

从青岛黄海海域采集的海泥中分离得到了1株具有较高拮抗活性的菌株QD-10,通过培养性状、形态特征观察、生理生化特性测定及16S rDNA、ITS、gyrA和rpoB基因部分序列比对,将其鉴定为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens。该菌株对本研究中选择的14种常见植物病原真菌和平菇褐斑病菌Pseudomonas tolaasii、大白菜黑腐病菌Xanthomonas campestris pv.campsetris 2种植物病原细菌均有不同程度的抑制作用,具有较宽的抑菌谱。该菌株能够产生嗜铁素、蛋白酶、纤维素酶和吲哚乙酸(IAA),表明其具备一定的生防相关性状。该菌株的不同浓度发酵液对番茄灰霉病的防效测定结果表明,在人工接种后第7 d和第11 d,菌株QD-10的发酵原液处理的防效均为100%,稀释5倍的发酵液防效分别为100%和41.7%,且二者均显著高于多抗霉素和多菌灵的防效。

纳他霉素及其生产菌育种研究进展

纳他霉素是一种高效、广谱、安全的抗真菌天然产物,广泛用做食品防腐添加剂和医用抗菌剂,对植物病原真菌也有强烈抑制作用。由于其主要通过褐黄孢链霉菌等发酵生产,因此高产菌种的选育是纳他霉素研究的热点之一。介绍了纳他霉素的主要理化性质、抑菌特性及其在不同领域的应用,综述了其生产菌育种研究进展,并对不同的育种方法进行了简要的比较分析,探讨了纳他霉素高产菌种选育的发展前景。

康绿功臣可湿性粉剂防治番茄根结线虫的效果

用康绿功臣可湿性粉剂(有效成分:1.1%苦参碱)处理温室土壤以防治番茄根结线虫,试验表明,康绿功臣可湿性粉剂可较好地控制番茄根结线虫的为害。康绿功臣可湿性粉剂45.0、52.5、60.0 kg/hm23个处理,药后90 d土壤中2龄幼虫数量减退率分别为66.12%、71.12%和73.51%,而对照药剂1.8%阿维菌素15.0 L/hm2处理的线虫减退率为75.68%。药后90 d康绿功臣可湿性粉剂各处理防治效果分别为50.96%、57.51%和61.04%,而对照药剂为62.87%。

利用葡萄籽油防治桃子采后褐腐病的研究

为探索桃采后褐腐病的新型非化学农药防治手段,研究了不同用量葡萄籽油处理(体积分数分别为0.5%、0.1%、0.05%、0.01%)对桃采后褐腐病的抑制效果。将褐腐病菌(Monilinia fruc-ticola)(终浓度:5×104 cfu/mL)和不同体积分数的葡萄籽油于PDB培养基中25℃下共培养24～96h,然后调查病原菌孢子萌发及芽管伸长情况。结果表明,当葡萄籽油体积分数≥0.05%时,其对病原菌孢子萌发的抑制率为100%。以打孔法人为模拟接种褐腐病菌(浓度:5×104 cfu/mL)至桃子上,随后接种不同体积分数的葡萄籽油,25℃下贮藏6d后调查褐腐病斑大小。结果表明,当葡萄籽油体积分数≥0.05%时,其在桃子体内对褐腐病斑的抑制率在50%以上,而且0.1%和0.5%的葡萄籽油用量对褐腐斑的抑制效果相当;当体积分数为0.01%时,葡萄籽油对病菌孢子萌发及桃褐腐斑的抑制效果大大降低。因此,将0.1%定为葡萄籽油抑制桃褐腐病菌的最佳用量。自然条件下,在1℃冷藏21d后,经0.1%葡萄籽油处理过的桃子发病率为20.0%,化学药剂戊唑醇处理过的桃子发病率为18.7%,而空白对照组发病率为45.5%,表明0.1%葡萄籽油的防治效果(56.0%)接近化学药剂防治效果(58.9%)。同时,对葡萄籽油处理过的果实进行了果实品质参数测定,包括果实硬度、可溶性固形物含量、维生素C含量、可滴定酸含量,结果表明,与空白对照组相比,葡萄籽油处理过的果实品质没有发生显著变化。说明葡萄籽油在防治桃采后褐腐病方面具有代替化学农药的潜力。

生防解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)最新研究进展

解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是与枯草芽胞杆菌相似,可产芽胞、革兰阳性(G+)、具有生防活性的益生细菌。其代谢过程中产生的抗菌物质种类多、抗菌谱广,其抗菌制剂或抗菌提取物具有无毒、无害、无残留、抑菌时效长等优点,可广泛应用于果蔬保鲜、果蔬生长期及采后微生物病害的生物防治,是极具开发价值的生防菌。本文从抗菌机理、抗性基因组成、基因工程菌构建、抗性产品开发及对微生物病害防治等几个方面,对解淀粉芽胞杆菌的研究及应用现状进行了归纳和总结,为其在农业生物工程中的规模化安全应用提供参考。

侵染节瓜的小西葫芦黄花叶病毒CP基因的克隆、表达及其抗血清的制备

通过鉴别寄主反应、病毒部分序列测定确定了采自广州白云区表现花叶、斑驳症状的节瓜上的病毒为ZYMV。采用RT PCR方法扩增和克隆了该病毒的外壳蛋白基因 ,连接到原核表达载体pET 2 2b(+)上。获得的重组子pET ZCP转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,用IPTG进行诱导表达。SDS PAGE和Westernblot分析表明 ,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,融合蛋白分子量约为 33 0kD。将融合蛋白纯化后免疫兔子 ,获得了特异性较高的抗血清。ELISA测定其效价为 1 4 0

桃采后褐腐病生防酵母菌的筛选及鉴定

为筛选对由美澳型核果褐腐病菌(Monilinia fructicola)引起的桃褐腐病具有抑制作用的酵母菌株,采用平板对峙的试验方法,从新疆北部12个地区分离的102株酵母菌中筛选出7株对桃褐腐病菌具有显著抑制作用的酵母菌株,其中菌株EEQS-7D拮抗活性最强,该菌株对桃褐腐病菌的抑菌率达78.90%。人为打孔接种活体试验结果表明,该菌株可显著降低桃褐腐病发病程度,抑制率达51.83%。生防相关性状检测结果显示,该菌株能够产生蛋白酶,透明圈直径达到34.5 mm,说明EEQS-7D主要通过分泌蛋白酶达到抑制桃褐腐病的效果。通过对菌株EEQS-7D的形态特征观察、生理生化测试以及26S r DNA序列分析,鉴定该菌株为出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)。

6%增效阿罗蒎兹微乳剂防治黄瓜根结线虫

用6%增效阿罗蒎兹微乳剂(有效成分:苦豆子水提取物、阿维菌素)处理温室土壤防治黄瓜根结线虫试验表明:阿罗蒎兹微乳剂可较好地控制黄瓜根结线虫危害。阿罗蒎兹微乳剂7.5、15.0、22.5L/hm2三个处理,药后90d土壤中2龄幼虫减退率分别为-12.23%、31.50%、43.52%,而对照药剂1.8%阿维菌素15L/hm2处理的线虫减退率为-37.65%。药后90d6%增效阿罗蒎兹微乳剂及各处理防治效果分别为54.52%、70.16%、74.84%,而对照药剂为50.81%。阿罗蒎兹微乳剂可有效地控制黄瓜根结线虫的危害,有较高的推广应用价值。

2%Agri-Terra颗粒剂防治番茄根结线虫

用2%Agri-Terra颗粒剂(有效成分:海藻酸丙二酯)温室处理土壤防治番茄根结线虫试验表明:2%Agri-Terra颗粒剂可较好地控制番茄根结线虫危害。2%Agri-Terra颗粒剂22.5、30.0、37.5kg/hm2三个处理,药后90d土壤中2龄幼虫数量减退率分别为75.67%、77.13%、84.42%,而对照药剂1.8%阿维菌素乳油15.0L/hm2处理的线虫减退率为75.88%。药后90d,2%Agri-Terra颗粒剂各处理防治效果分别为58.63%、66.91%、80.75%,而对照药剂为61.79%。2%Agri-Terra颗粒剂可有效地控制番茄根结线虫的危害,有较高的推广应用价值。

桃褐腐病菌拮抗酵母的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

以北京平谷桃果实表皮上分离得到的45株酵母菌为出发菌株,采用平板对峙法,筛选对桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)具有较高拮抗作用的生防酵母菌。结果表明,共筛选出具有较好抑制效果的酵母菌6株,其中菌株MLL-9-1拮抗活性最强,对桃褐腐病菌的抑菌率达77.91%;活体筛选试验结果表明,该菌株对桃褐腐病的抑制率达50.30%。生防相关性状检测结果显示,该菌株能够产生蛋白酶,透明圈直径达30.5 mm,说明该菌主要通过分泌蛋白酶达到抑制病原菌的效果。经形态学、生理生化试验及26S r DNA序列分析,鉴定该菌为葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)。