宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法的建立及意义

目的:建立宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法,分析宫颈癌发生各时期的HPV16早期基因E6相关转录的情况。方法:留取HPV16阳性的宫颈肿瘤组织63例,包括8例低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)、38例高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)和17例宫颈癌,提取RNA,利用含保守序列的RT引物将标本中的mRNA反转录成5’端含保守序列的cDNA,并利用HPV16 E6特异性引物(P1)和保守序列(P0)进行PCR扩增,建立特异性扩增HPV16 E6相关转录本的方法,检测标本中HPV16 E6相关的转录本,通过E6特异性探针进行Southern杂交加以验证。结果:成功建立了HPV16 E6相关转录模式分析的方法。经分析HPV16阳性的LSIL、HSIL及宫颈癌组织中E6转录模式结果发现,不同级别HPV16阳性的宫颈肿瘤组织的转录模式差异显著。随着LSIL向宫颈癌发展,肿瘤组织中HPV16 E6转录本种类增多,且优势转录模式逐渐清晰。结论:成功建立HPV16 E6相关转录模式分析的方法,并发现HPV16早期基因E6相关的转录模式与宫颈肿瘤癌变程度密切相关,其可能参与宫颈癌的发生和发展。

M13噬菌体多克隆抗体的制备与鉴定

目的 :制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法:将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对兔免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测兔多克隆抗体与M13K07辅助噬菌体的特异性结合能力。结果:M13K07辅助噬菌体免疫兔可产生高效价的多克隆抗体,效价达1:3 200,并能特异性识别M13K07辅助噬菌体。结论:成功制备了高效价的M13K07辅助噬菌体多克隆抗体,为噬菌体展示技术研究提供了检测抗体。

Dicer干预对HPV18 E6/E7基因表达的影响

目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dicer被干预后对HPV18 E6、E7及miR-16基因表达的影响。结果:本研究建立的定量PCR能特异地检测Dicer、HPV18 E6、E7及miR-16基因的表达。设计的三种siRNA均明显下调Dicer基因表达,40 nmol/L的siRNA干预24 h即可获得明显效果。在此基础上分析对miR-16及高危型HPV18 E6、E7表达的影响,结果显示,40 nmol/L的Dicer siRNA干预可明显下调HPV18 E6、E7及miR-16基因表达(P<0.05)。生物信息学分析提示,HPV18 E6、E7基因编码区存在miR-16的结合位点。结论:Dicer siRNA干预能明显下调高危型HPV18E6、E7基因表达,miR-16可能参与HPV18E6、E7基因表达调控。

肺腺癌新分类各亚型与EGFR突变的相关性

目的:探讨肺腺癌新分类[2011年国际肺癌研究会(IASLC)/美国胸科协会(ATS)/欧洲呼吸协会(ERS)肺癌多学科协作组更新的非小细胞肺腺癌的分型标准]各亚型与表皮生长因子受体(EGFR)突变之间的关系。方法:共纳入240例手术切除的非小细胞肺腺癌患者。采用ARMS法对所有手术标本行EGFR突变检测。卡方分析比较不同病理亚型与患者EGFR突变发生率的关系。结果:纳入EGFR突变检测的240例患者中,大部分属于腺泡状(占89%)和乳头状(占56%)肺腺癌类型。EGFR在腺泡状、贴壁状、乳头状以及微乳头为主腺癌亚型的发生率高于非该亚型的肺腺癌(P<0.05);实性为主腺癌亚型EGFR突变发生率低于非实性为主腺癌亚型(P<0.05)。结论:不同的腺癌病理亚型EGFR突变发生率存在差异,其中腺泡状为主亚型、微乳头为主亚型、乳头状为主亚型和贴壁状为主亚型的突变发生率较高,实性为主腺癌亚型突变发生率较低。

甲状腺乳头状癌中BRAF^(V600E)蛋白表达与基因突变的一致性及其临床意义

目的探讨甲状腺乳头状癌中BRAF^(V600E)蛋白表达与基因突变的一致性及其临床病理相关性。方法分别采用免疫组化SP法与实时荧光定量PCR法检测BRAF^(V600E)蛋白表达与基因突变情况,分析两种检测方法间的一致性;采用χ~2检验分析BRAF^(V600E)与甲状腺乳头状癌的临床病理相关性。结果 BRAF^(V600E)基因突变率为89.3%,蛋白阳性率为88.3%,差异无统计学意义;两种检测结果的符合率为97.0%,Kappa值为0.847,一致性较强。患者年龄<45岁与≥45岁组的BRAF^(V600E)基因突变率分别为96.8%、85.9%,差异有统计学意义;两种检测方法在有被膜侵犯组的阳性率均高于无被膜侵犯组,差异有统计学意义。结论两种检测方法存在较强的一致性,免疫组化法可以作为检测基因突变的初筛工具。BRAF^(V600E)基因突变与患者年龄、被膜侵犯相关,与其他临床病理特征无相关性。