调心补肾方改善阿尔茨海默病小鼠前额皮质突触缺失和tau蛋白过度磷酸化的作用研究

目的研究调心补肾方(TXBSF)对早老素1/2条件性双基因敲除(PS cDKO)的阿尔茨海默病(AD)小鼠模型前额皮质(PFC)突触缺失和tau蛋白过度磷酸化的影响。方法采用3~3.5月龄小鼠,雌雄各半,随机分为野生型组(WT)、PS cDKO模型组(cDKO)、PS cDKO+TXBSF组(cDKO+TXBSF),每组6只。WT和cDKO两组小鼠给予普通饲料,cDKO+TXBSF小鼠给予含TXBSF(给药剂量为2.55 g/kg)的饲料喂养,共治疗90 d。采用Western blot法检测小鼠PFC中N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)亚基(NR1、NR2A、NR2B)、微管相关蛋白2(MAP2)和tau蛋白表达;qRT-PCR法检测小鼠PFC中NR1、NR2A、NR2B和MAP2 mRNA表达。结果Western blot检测结果显示,与cDKO小鼠相比,cDKO+TXBSF小鼠PFC中NR1、NR2A、NR2B和MAP2蛋白表达增加(P<0.05);磷酸化tau(ser 396/404)蛋白表达减少(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与cDKO小鼠相比,cDKO+TXBSF小鼠PFC中NR1、NR2A、NR2B和MAP2 mRNA表达增加(P<0.05)。结论TXBSF对PS cDKO小鼠记忆缺陷的改善作用可能通过逆转PFC的tau蛋白过度磷酸化和下调突触相关蛋白的表达来实现。

反式桂皮醛通过抑制前额皮质IL-1β改善阿尔茨海默病小鼠记忆障碍的作用研究

目的探讨反式桂皮醛(Trans-cinnamaldehyde,TCA)对早老素1/2条件性双基因敲除(Presenilin1/2 conditional double knockout,PS cDKO)阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)样小鼠的神经保护作用及其机制。方法通过基因鉴定确定小鼠的基因型,将9月龄的PS cDKO小鼠和其同窝野生型对照小鼠随机分为4组:野生型组(wildtype,WT)、野生型+TCA组(WT+TCA)、模型组(PS cDKO,cDKO)和模型+TCA组(cDKO+TCA),每组15只。WT+TCA和cDKO+TCA组的小鼠给予含有TCA(240 ppm)的饲料治疗,WT和cDKO组的小鼠给予普通饲料,共治疗90天,后30天进行行为学测试,测试结束后取材进行分子生物学检测。其中,旷场实验观察TCA对PS cDKO小鼠运动能力的影响;新异物体识别实验观察TCA对PS cDKO小鼠辨识记忆的影响;Y迷宫实验观察TCA对PS cDKO小鼠空间记忆的影响;Western Blot检测TCA对PS cDKO小鼠前额皮质中突触蛋白表达的影响;qRT-PCR检测TCA对PS cDKO小鼠前额皮质中促炎症因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA水平的影响;ELISA检测TCA对PS cDKO小鼠前额皮层中IL-1β含量的影响。结果TCA对PS cDKO小鼠的运动能力没有影响,可以改善其受损的短时辨识记忆(P<0.05)和空间记忆(P<0.001)。另外,TCA上调PS cDKO小鼠前额皮质中N-甲基-D-天冬氨酸受体(Nmethyl-D-aspartate receptor,NMDAR)的亚基NR1(P<0.05)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ alpha(Ca/calmodulin-dependent protein kinases Ⅱ alpha,αCaMKII)的磷酸化水平(P<0.01)的表达,下调IL-1β的mRNA水平(P<0.001)和减少IL-1β的产生(P<0.05)。结论TCA可能通过抑制前额皮质促炎症因子IL-1β和上调突触蛋白的表达发挥对PS cDKO小鼠的神经保护作用。

桂皮醛通过阻止海马神经炎症反应改善阿尔茨海默病老年小鼠记忆障碍的作用研究

目的探讨桂皮醛(trans-cinnamaldehyde,TCA)对老年具有阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样表型的早老素1/2条件性双基因敲除(Presenilin1/2 conditional double knockout,PS cDKO)小鼠海马神经炎症反应和突触破坏导致的记忆障碍的改善作用及其机制研究。方法选用9月龄PS cDKO小鼠和其同窝野生型对照小鼠随机分为四组:野生型组(wildtype,WT)、野生型+TCA(WT+TCA)、PS cDKO组(cDKO)和PS cDKO+TCA组(cDKO+TCA),每组10只。WT+TCA和cDKO+TCA组的小鼠给予含有TCA(240ppm)的饲料治疗,WT和cDKO组的小鼠给予普通饲料,共治疗90 d,治疗60 d后进行行为学测试,测试期间继续进行治疗,测试结束后取小鼠海马进行分子生物学实验。其中,Morris水迷宫实验观察TCA治疗后对PS cDKO小鼠空间参考记忆的影响,恐惧实验检测TCA对PS cDKO小鼠联合记忆能力的影响;Western Blot检测TCA对PS cDKO小鼠海马突触蛋白表达的影响;RT-PCR检测TCA对PS cDKO小鼠海马促炎症因子mRNA水平的影响。结果TCA明显改善PS cDKO小鼠的空间参考记忆障碍(P<0.05)和联合记忆损伤(P<0.05)。另外,TCA上调PS cDKO小鼠海马中N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)的亚基NR1和NR2A、突触小泡蛋白(Synaptophysin,SYP)的蛋白表达,下调Tau蛋白的过度磷酸化;同时,TCA降低海马促炎症因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、诱导性一氧化碳酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的m RNA水平(P<0.05)。结论TCA改善老年PS cDKO小鼠记忆障碍可能是通过抑制海马的神经炎症反应并提高突触蛋白的表达来发挥神经保护作用。

调心补肾方对阿尔茨海默病小鼠前额皮质中小胶质细胞激活和神经炎症反应的影响

目的探讨调心补肾方(TXBSF)对早老素1/2条件性双基因敲除(PS cDKO)的阿尔茨海默病(AD)小鼠前额皮质中小胶质细胞激活和神经炎症反应的影响。方法选取60只3~3.5月龄的PS cDKO小鼠及其同窝野生型对照小鼠,分为野生型(WT)组、模型(PS cDKO)组和模型+TXBSF(PS cDKO+TXBSF)组,每组20只。野生型组和模型组小鼠均食用普通饲料,模型+TXBSF组小鼠给予含有TXBSF(17.918 g/kg)饲料喂养90 d,药物治疗结束后取材进行分子生物学检测。采用免疫组化染色法观察TXBSF对各组小鼠前额皮质中小胶质细胞的激活情况;qRT-PCR法检测TXBSF对各组小鼠前额皮质中促炎症因子环氧化酶-2(COX-2)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)mRNA水平的影响;Western blot法检测TXBSF对各组小鼠前额皮质中COX-2和iNOS蛋白表达的影响;ELISA法检测TXBSF对各组小鼠前额皮质中TNF-α、IL-6和IL-1β含量的影响。结果免疫组化染色结果显示,与模型小鼠相比,模型+TXBSF组小鼠表现出下降的阿米巴样小胶质细胞比例(P<0.05)、较多的分支数(P<0.05)、较长的平均长度(P<0.05)以及较长的最长分支长度(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与模型组小鼠相比,模型+TXBSF组小鼠COX-2、iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达下降(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组小鼠相比,模型+TXBSF组小鼠前额皮质中COX-2和iNOS的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。ELISA结果显示,与模型组小鼠相比,模型+TXBSF组小鼠前额皮质中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著下降(P<0.05)。结论TXBSF可能通过抑制前额皮质中小胶质细胞的激活和神经炎症反应来改善AD小鼠的记忆障碍。

开心散加减方通过抑制神经炎症调控αCaMKⅡ-PSD95蛋白结合改善阿尔茨海默病模型小鼠记忆障碍的机制研究

该文探究开心散加减方(MKXS)通过调节神经炎症反应改善早老素1/2条件性双基因敲除(PS cDKO)阿尔茨海默病(AD)模型小鼠记忆障碍和突触损伤的作用机制。将60只3~3.5月龄PS cDKO小鼠及同窝野生型(WT)对照小鼠,随机分为3组:野生型(WT)组、模型(PS cDKO)组、模型+开心散加减方(PS cDKO+MKXS)组,每组20只。野生型组和模型组小鼠给予普通饲料喂养,模型+开心散加减方组小鼠给予含MKXS(给药剂量为2.55 g·kg^(-1))的饲料喂养60 d。新异物体测试检测小鼠识别记忆;蛋白印迹法(Western blot)检测小鼠海马(HPC)中磷酸化Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱα(p-αCaMKⅡ)、N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDAR)各亚单位(NR1、NR2A、NR2B)、tau蛋白(tau)的蛋白表达情况;免疫组织化学染色观察HPC CA1区小胶质细胞形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠HPC中环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、NR1、NR2A、NR2B、突触后致密蛋白95(PSD95)和微管相关蛋白2(MAP2)的mRNA水平;ELISA检测小鼠HPC中IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白含量;免疫共沉淀(Co-IP)检测Ca^(2+)/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱα(αCaMKⅡ)及p-αCaMKⅡ与PSD95蛋白相互作用。结果显示,与模型组小鼠相比,MKXS明显增加小鼠对新物体的偏好指数、识别指数,降低小鼠HPC中p-tau(ser 396/404)的蛋白表达水平和COX-2、iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达量,增加小鼠HPC中NR1、NR2A、NR2B、p-αCaMKⅡ蛋白和PSD95、NR1、NR2A、NR2B、MAP2 mRNA的表达量,并且MKXS增强了小鼠HPC中PSD95与αCaMKⅡ、PSD95与p-αCaMKⅡ蛋白相互作用。免疫组织化学染色结果显示,MKXS抑制小胶质细胞激活。综上所述,MKXS对阿尔茨海默病模型小鼠记忆障碍改善作用可能通过抑制神经炎症反应调节αCaMKⅡ与PSD95蛋白结合,进而恢复突触功能受损而实现。