金龟子绿僵菌固体培养条件的筛选

测定了不同温度和pH及碳氮源、微量元素对金龟子绿僵菌菌丝生长及产孢的影响.结果表明:pH 7、温度25℃最适合绿僵菌生长,固体培养中蔗糖为碳源、酵母为氮源、加入微量元素Mn,金龟子绿僵菌生长最好、产孢量最高.用正交方法探索了金龟子绿僵菌的最适固体培养条件.

FOXO1在胰岛β细胞中的表达及对增殖凋亡功能的影响

胰岛功能受损的分子机制研究是揭示2型糖尿病(T2DM)发病机制的核心问题.FOXO1是胰岛素信号下游的重要靶转录因子,参与胰岛的发育,但在分化成熟的胰岛β细胞中的功能尚未阐明.本研究采用免疫组化方法结合激光共聚焦技术观察FOXO1在胰岛的表达及细胞定位;通过基因介导的转移技术和siRNA干预技术,在培养的大鼠胰腺癌β细胞系(INS-1E)中特异高表达组成性活性的FOXO1(FOXO1-AAA)或抑制其表达水平,观察FOXO1表达水平的改变对β细胞增殖、凋亡的影响.免疫组化结果显示,FOXO1在正常胰腺组织中仅特异地表达在胰岛内.采用胰岛素与FOXO1的免疫荧光双标结合共聚焦观察进一步揭示,FOXO1主要表达在胰岛的β细胞中.Western印迹显示,腺病毒介导的基因转移技术在体外培养的INS-1E细胞中过表达FOXO1-AAA或其特异的siRNA均能有效地上调或抑制其表达水平.3H-TdR掺入实验结果显示,降低FOXO1的表达显著促进细胞增殖;反之,高表达FOXO1显著抑制细胞增殖.与之相应,MTT检测结果显示,降低FOXO1的表达对细胞存活有显著促进作用,高表达FOXO1对细胞存活有显著抑制作用.进一步采用流式细胞仪检测细胞凋亡,结果显示降低FOXO1的表达使β细胞凋亡率降低,反之高表达FOXO1使β细胞凋亡率增加.研究结果证实,胰岛β细胞中的FOXO1参与β细胞的存活、增殖、凋亡的调节.病理性高表达FOXO1可能通过阻止β细胞增殖、促进β细胞凋亡从而减少β细胞的数量,在T2DM发生中可能起重要作用.

抑制FoxO1基因表达的siRNA重组腺病毒载体的构建及功能鉴定

目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染293细胞,包装得到含si-FoxO1的重组腺病毒,体外转染人肝癌细胞系HepG2,Westernblot检测FoxO1蛋白表达水平的变化。结果成功构建针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,该重组腺病毒能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达(P<0.01)。结论成功构建了针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,能有效抑制HepG2细胞中FoxO1的表达。

长程高脂肪膳食对大鼠空腹血糖及糖耐量的影响

研究了单纯高脂膳食喂养对大鼠空腹血糖（Fasting plasma glucose，FPG）及葡萄糖耐量（Glucose tolerance test，GTT）的影响，旨在模拟与现代人生活饮食结构及发病情况更为接近的糖调节异常动物模型．取正常SD大鼠100只喂以普通饲料或高脂饲料14mo，动态监测动物体重及空腹血糖的变化，并分别在第5、8、10、14mo时用糖耐量试验观察葡萄糖耐量减退（IGT）的情况．结果显示，高脂喂养第1～14个月过程中，雄性太鼠的体重较普食组均未出现显著增加，而雌性大鼠体重仅在喂养第5～8个月期间较普食组增加了10％～15％；与普食组相比，在喂养高脂膳食第1～5个月中雌雄两性大鼠空腹血糖均显著升高，在喂养第5～10个月中雄性葡萄糖耐量显著减退，但雌性动物则未出现明显的IGT，至第14个月时雄性IGT与普食组的差异消失．研究表明，单纯高脂膳食虽不能诱发糖尿病，但可出现较典型的IFG空腹血糖受损和IGT现象，且以雄性动物造模更为适宜，喂养时间以10mo以内为宜．由于单纯高脂喂养更接近自然人群发病过程，因此，此种模型将为糖调节受损发生机制及其早期干预的研究提供新的动物模型．

高糖饲料饲养对家蚕的血糖浓度和脂肪体中的甘油三酯含量影响

以高糖饲料饲养家蚕后,测定与分析蚕体血糖浓度、脂肪体中甘油三酯含量以及蚕的体质量变化,探究以家蚕为模型阐明高糖饮食导致的人体糖代谢和脂质代谢变化的可行性。5龄起蚕摄食高糖饲料3 d后,血淋巴中葡萄糖和海藻糖的浓度上升;脂肪体组织中的甘油三酯积累,脂肪球明显增大、增多;蚕体质量明显降低,生长受到影响。此外,高糖饲料饲养家蚕按1 IU/头剂量注射人胰岛素后,血淋巴中的葡萄糖和海藻糖浓度有一定程度降低。试验结果表明,高糖饲料喂养家蚕后可导致其糖代谢和脂质代谢失调,体质量下降,与Ⅱ型糖尿病患者的病理生理变化相似。

家蚕伴性赤蚁sch胚胎期致死特异蛋白差异的研究

利用双向电泳技术分析了家蚕生态致死突变伴性赤蚁sch和正常黑蚁夏芳在常温常湿、高温干燥催青条件下的蚕卵差异表达蛋白质,发现高温敏感伴性致死赤蚁的蚕卵在高温催青处理后,一个分子量50kD左右的蛋白点P34与正常相比有明显差异,高温干燥处理后该蛋白点浓度较弱,表达量较低;对照黑蚁夏芳的P34蛋白没有明显差异。对P34进行胰蛋白酶消化并测定了其肽质量指纹图谱,通过同源性比较分析发现P34蛋白是一种新的蛋白质。

温度和湿度对伴性赤蚁sch系统致死性的影响

为进一步探讨家蚕伴性赤蚁(sch)致死的机理,比较了不同温度、湿度催青条件下,sch系统及其杂交F_1代和对照种黑蚁系统的孵化率、失水率、含水率、失水临界温度等。结果表明:伴性赤蚁sch系统在已_3至已_4期对温湿度敏感,受到高温和干燥的冲击,将获得“孵化不能”性状;温度、湿度因子对赤蚁sch孵化抑制均有较大的独立作用,sch表现出一定的“温度敏感性”和“湿度敏感性”;温度、湿度都能通过影响胚胎体内水分平衡失调而引起这种孵化不能;在不引起水分变化的情况下,温度还存在一条独立的抑制赤蚁孵化的途径。

mRNA差异显示技术及其在家蚕研究上的应用

mRNA差异显示技术是近年发展起来的研究基因表达差异的有效方法。本文简述了mRNA差异显示技术的基本原理、技术改进以及此技术在家蚕研究中的应用。

蚕学专业生物化学理论教学的体会

生物化学是蚕学专业非常重要的专业基础课,针对生物化学内容抽象枯燥、知识更新快的特点,采取灵活多样的课堂教学、加强与学生的交流,将有助于激发学生的学习兴趣,培养学生进行科学思维的能力,从而使生物化学的教学质量得到提高。

肿瘤坏死因子-α拮抗瘦素抑制胰岛素合成及分泌作用的实验观察

目的探讨在炎症情况下,瘦素(leptin)对胰岛β细胞胰岛素合成与葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)功能的影响。方法在含5.5 mmol/L葡萄糖培养基中培养传代的大鼠胰腺癌细胞系(INS-1E)和大鼠原代分离的胰岛,经生理浓度leptin(0.5 nmol/L)或TNF-α(2 ng/ml)及高浓度leptin(10 nmol/L)与TNF-α(20 ng/ml)单独及联合处理48 h后,在基础葡萄糖(3.3 mmol/L)或高糖(16.7 mmol/L)中分别刺激1 h,放免法检测葡萄糖刺激的GSIS功能;用RT-PCR方法检测胰岛素原(proinsulin)mRNA表达水平,同时细胞经超声破胞后检测胞内胰岛素含量。结果高浓度leptin(10 nmol/L)或TNF-α(20 ng/ml)单独刺激组与对照组以及低浓度leptin或TNF-α组相比,均可显著性抑制INS-1E细胞和原代胰岛的GSIS功能(P<0.05),与之相应的是细胞内proinsulin mRNA水平以及胞内胰岛素含量亦显著降低(P<0.01);但TNF-α+leptin联合刺激组中,胰岛素原mRNA水平及胰岛素蛋白含量均较leptin单独刺激并未进一步降低,反而有显著升高(P<0.05),提示TNF-α具有拮抗leptin抑制胰岛素基因表达和分泌的作用。结论 TNF-α可以干扰leptin对胰岛β细胞胰岛素合成和分泌的抑制作用。提示肥胖者体内升高的TNF-α可能通过拮抗leptin对胰岛素分泌的抑制作用,在肥胖伴随的高胰岛素血症的发生及葡萄糖代谢紊乱中具有重要作用。

神经退行性疾病关联基因的家蚕同源基因预测分析

神经退行性疾病是困扰老年人的重要疾病,由神经元的渐进性结构改变和功能丧失所致,病情恶化会导致患者的认知和运动功能障碍。通过OMIM数据库关键词检索和对最新人类遗传学文献的搜索,搜集整理了271个神经退行性疾病关联基因。利用家蚕基因组数据库,通过蛋白质序列比对鉴定神经退行性疾病关联基因在家蚕中的同源基因,结果显示接近70%的人类神经退行性疾病关联基因可以在家蚕中找到同源基因。对家蚕的169个同源基因进行GO分类,发现较多基因发挥结合、催化、转运或者转录调控的功能,有约10%的基因归类为生物学过程中色素的生成与沉积或者定位的建立。通过KEGG通路分析显示它们较多参与胞内转运、分解代谢以及细胞信号转导。研究结果显示人类与家蚕的神经退行性疾病关联基因存在较高的保守性,从而为利用家蚕建立神经退行性疾病模型和鉴定这些基因的功能打下一定的基础。

改革生物化学实验教学 提高学生综合素质

生物化学是医学院校学生的专业基础课,实验教学环节非常重要。它不仅是培养、训练学生的实验操作能力,分析问题、解决问题能力的重要环节,更是培养学生创新能力的重要途径。结合生物化学教学实际,通过改革实验内容和实验教学方法,同时开设设计性实验等加强学生操作技能和综合素质的培养,从而提高学生综合实验能力。

探讨护理干预在子痫患者中的应用效果

通过探讨护理干预在子痫患者中的应用效果,提高护理人员对子痫患者的整体护理水平,加强围生期保健及预防措施,对于保证母婴健康有着重要意义。

医学本科生物化学实验教学中对学生创新能力培养的探索

实验教学是医学生物化学教学中重要的组成部分，其不仅可以使学生验证理论知识，培养学生的动手能力，而且可以借助实验教学来培养学生的创新意识和创新能力，为学生今后的科研工作奠定基础。

家蚕生长调控因子的初步筛选和RNA表达分析

昆虫生长调控机制是一个基础的生物学问题.不同器官和组织间的信号转导对协调昆虫身体生长速率和确定不同器官大小十分重要.在家蚕中,胰岛素类似多肽家蚕素的分泌受营养信号调控,并对成虫盘的生长和细胞增殖有促进作用,然而更多的生长调控因子尚待研究.为了鉴定家蚕中的生长调控因子,基于GO注释方法的预测,筛选和克隆了具有调控功能的13个选择信号基因组区域基因,并通过ClustalW2分析了其与果蝇同源基因蛋白水平上的一致性.对其中6个基因通过Real Time PCR做了RNA水平上的时期表达分析,实验结果显示其中部分基因在蛹期和成虫期的RNA表达水平较高,而BmBtk29A在5龄第1d有较高表达,提示了该基因可能在5龄生长初期有重要作用.

长程高脂饲料对雌雄大鼠胰岛功能损害差异的探讨

目的动态观察长程高脂饲料对雌雄大鼠糖耐量和胰岛素作用的影响,并探讨其可能的机制。方法取正常SD大鼠100只,抽签式随机分组,其中雄性和雌性大鼠普通饲料组各20只,雄性和雌性大鼠高脂饲料组各30只。每个月动态监测大鼠体质量及空腹血糖的变化,在第14个月时进行腹腔注射糖耐量试验(IPGTT),检测葡萄糖耐量减退(IGT)的情况,测定第14个月时的空腹胰岛素分泌量及大鼠胰腺组织匀浆液中线粒体和微粒体的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和过氧化氢酶(catalase,CAT)水平。结果第14个月时无论普食组或高脂组雄性大鼠腹腔注射糖耐量都受损,而雌性大鼠都未达到糖耐量受损,腹腔糖耐量测试表明雌雄大鼠在120min时血糖有显著性差异(P<0.05);14个月时高脂组雄性大鼠空腹胰岛素分泌量显著高于雌性大鼠(P<0.05);胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显示高脂组雄性大鼠胰岛素抵抗程度较雌性大鼠显著升高(P<0.05);早相胰岛素分泌功能显示经过长程高脂喂养,雄性大鼠早相胰岛素分泌功能显著低于雌性大鼠(P<0.05);胰腺组织匀浆液中线粒体的MDA、细胞质的GSH和CAT的水平雌雄大鼠间虽然无显著性差异(P>0.05),但总体趋势是无论是普食组还是高脂组,雄性大鼠氧化应激水平都高于雌性大鼠,抗氧化应激水平都低于雌性大鼠。结论雌性大鼠具有抵抗高脂诱导的糖耐量受损作用,其胰腺组织氧化应激水平较低可能是机制之一。

单核细胞趋化蛋白-1在糖尿病肾病中的作用

糖尿病肾病是多因素引起的复杂性疾病,近年研究发现炎症反应参与了该病的发生与发展。单核细胞趋化蛋白-1是趋化因子CC亚家族的一员,在募集巨噬细胞等炎性细胞参与炎症反应中扮演着重要的角色。其趋化单核巨噬细胞于糖尿病肾组织中,可介导溶酶体释放,产生氧自由基,促进单核巨噬细胞表达β1-转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGF-β1),而广泛浸润巨噬细胞加剧了肾小球基底膜增厚、细胞外基质堆积,进而发展为肾小球硬化和间质纤维化。深入研究单核细胞趋化蛋白-1在糖尿病肾病中的作用,可望为糖尿病肾病的预防和治疗提供新的思路和途径。

一种适用于蚕卵mRNA差异显示的方法

采用自行配制的试剂取代GenHunterCorporationRNAimageTM Kit,并改用银染法代替放射自显影 ,建立了一种适用于蚕卵mRNA差异显示的方法。该方法具有成本低、安全、高效、量多质优等特点。运用该方法对不同温湿度催青处理后的夏sch蚕卵进行mRNA差异显示 ,展示不同处理差异表达产生的RNA分子 ,回收了 1条差异带 。

家蚕类胰岛素信号通路及其功能的研究进展

胰岛素(insulin)及其信号传导途径在细胞中发挥调节糖、脂肪和蛋白质代谢,影响生物的生长、代谢、生殖、衰老等功能[1]。自首个昆虫类胰岛素—家蚕素(Bombyxin)在家蚕体内被发现以来,其结构、分布、调控基因、分泌控制及其在生理学上的功能已部分被阐明。家蚕素一级结构与人胰岛素大约有40%的同源性,主要在家蚕脑组织中表达,其代谢调控作用等相关研究已取得较大进展。本文将在相关文献基础上对家蚕素信号通路及其在调控家蚕代谢、生长及发育的研究进展上做一综述。

生物化学理论和实验教学改进初探

生物化学理论教学与实验教学是培养大学生理论联系实际的有效教学方式。本文对生物化学教学目前存在的问题进行了分析,并对理论教学、实验教学和考核方法进行了相应的探讨,以期增强学生在教学过程中的主体地位,大力培养学生的自主学习、发现问题和解决问题的能力,提高课程的教学质量和学生的综合素质。