miR-200c-3p靶向FOSL1增加乳腺癌细胞化疗敏感性

化疗耐受是乳腺癌复发转移率居高不下、综合治疗效果难以提高的主要瓶颈。前期研究证实,miR-200c-3p在乳腺癌敏感细胞MCF-7中的表达量显著高于耐药细胞MCF-7/5Fu,提示miR-200c-3p可能参与乳腺癌化疗增敏,但是具体机制不详。生物信息学预测联合双荧光素酶报告基因实验证实,miR-200c-3p靶向调控FOSL1,且在多种肿瘤中miR-200c-3p与FOSL1表达负相关。实时荧光定量PCR技术和Western印迹技术证实,FOSL1在耐药细胞MCF-7/5Fu中的表达量显著高于亲本细胞MCF-7。在MCF-7细胞中,过表达FOSL1能够显著提高该细胞对5-Fu的化疗耐受;在MCF-7/5Fu中,使用siRNA技术沉默FOSL1,将提高该细胞对5-Fu的化疗敏感性。此外,MTT实验还发现,miR-200c-3p抑制剂能够显著上调MCF-7细胞对5-Fu的耐受,但是在此细胞中干扰FOSL1的表达,又可以增加其对5-Fu的化疗敏感性;miR-200c-3p mimics显著增加MCF-7/5Fu细胞的化疗敏感性,上调FOSL1表达后又可逆转miR-200c-3p mimics的化疗增敏作用。总之,miR-200c-3p能够通过靶向FOSL1增加乳腺癌细胞对5-fluorouridine化疗敏感性。

参芪扶正注射液对CAF方案化疗后乳腺癌患者免疫功能的影响

目的探讨参芪扶正注射液对CAF方案化疗后乳腺癌患者免疫功能的影响。方法 110例乳腺癌分为试验组(58例)和对照组(52例),试验组58例采用CAF方案化疗的同时辅以参芪扶正注射液治疗,对照组52例采用单纯化疗。比较两组患者的生活质量、毒副反应、外周血淋巴细胞绝对数值及单个核细胞杀伤活性在治疗前后的改变。结果治疗后试验组和对照组患者的生活质量提高率分别为34.5%和13.5%(P<0.05);与对照组相比,试验组患者治疗后白细胞、血红蛋白、血小板、淋巴细胞绝对数值以及外周血单个核细胞对不同乳腺癌细胞杀伤活性下降程度减轻。结论参芪扶正注射液联合CAF方案化疗治疗乳腺癌可以减轻化疗毒副反应,改善临床症状,提高生活质量,增强免疫功能。

E3泛素连接酶HECTD3真核表达质粒的构建

目的克隆E3泛素连接酶(homologous to the E6-associated protein carboxyl terminus domain containing 3,HECTD3)基因及构建真核表达质粒。方法提取人卵巢癌细胞SKOV-3细胞RNA,并逆转录为cDNA,以此作为模板PCR法扩增HECTD3基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证构建质粒中包含HECTD3基因。结论 HECTD3基因克隆及真核表达质粒构建成功,可以用于后续卵巢癌发生发展的分子生物学研究。

参芪扶正注射液对乳腺癌患者免疫功能的影响

目的从细胞及分子水平探讨参芪扶正注射液对乳腺癌患者免疫功能损害的修复作用及机制。方法77例经病理诊断为乳腺癌的患者分为3组,A组22例仅用手术治疗,B组26例术前化疗加手术,C组29例术前化疗加参芪扶正注射液加手术,另设D组22例为良性肿瘤对照。用流式细胞仪检测各组患者肿瘤组织、引流淋巴结中CD83、CD80、CD86蛋白表达水平。结果A、B、C组癌组织、腋窝淋巴结细胞CD83、CD80、CD86蛋白表达水平比D组明显降低(P<0.05);B组除腋窝淋巴结细胞CD83外均低于A组,C组除腋窝淋巴结细胞CD83外均高于B组(P<0.05,P<0.01),其腋窝淋巴结细胞CD80高于A组(P<0.05)。结论肿瘤及化疗对机体免疫功能产生不良影响,参芪扶正注射液可能参与激活树突状细胞功能,上调共刺激分子水平,帮助修复机体的免疫损伤。

IFN-γ逆转免疫编辑后人肺癌A549细胞对CIK杀伤敏感性的研究

目的:探讨IFN-γ对免疫编辑后人肺癌A549细胞对CIK杀伤敏感性的逆转作用。方法:应用RT-PCR和MTT方法分别检测IFN-γ对免疫编辑后A549细胞表面MICA表达的影响及A549细胞对CIK杀伤敏感性的变化。结果:免疫编辑后A549细胞表面低表达MICA,对CIK细胞杀伤敏感性低。IFN-γ可明显上调编辑后A549细胞MICA mRNA的表达率,提高CIK对编辑后A549细胞的细胞毒活性。结论:IFN-γ可以增强A549细胞表面MICA mRNA表达,逆转免疫编辑后A549细胞对CIK细胞杀伤敏感性。

扶正培本法配合化疗治疗乳腺癌的临床研究

目的:研究扶正培本法对乳腺癌患者化疗后细胞免疫状态的影响。方法:对58例乳腺癌术前患者采用CAF方案化疗的同时辅以扶正培本法治疗,比较患者的生活质量、毒副反应、外周血淋巴细胞绝对数值及单个核细胞杀伤活性在治疗前后的改变。结果:中药加化疗组和单纯化疗组患者的生活质量提高率分别为34.5%和13.5%;中药加化疗组患者白细胞、血小板、淋巴细胞绝对数值以及外周血单个核细胞对不同乳腺癌细胞杀伤活性下降程度减轻,恢复快。结论:扶正培本法联合化疗治疗乳腺癌可以减轻化疗不良反应,改善临床症状,提高生活质量,提高免疫功能。

脐血CD_3AK细胞的制备、生物活性测定及临床应用初探

目的 研究用脐血单个核细胞制备CD3 AK细胞的抗肿瘤作用 ,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标。方法 分离脐血单个核细胞 ,分别用IL 2和IL 2 +CD3 Ab诱导LAK和CD3AK细胞 ,并测其扩增数量和对K5 6 2细胞的杀伤活性 ;测定肿瘤患者用CD3 AK细胞治疗前后外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性。结果 脐血LAK细胞和脐血CD3 AK细胞均于培养后第 11天时扩增倍数最高 ,分别是培养前的 18倍、2 4倍 ,对K5 6 2的杀伤活性分别是培养前的 2 .6倍和 3.2倍 ;肿瘤患者输注CD3 AK细胞一疗程后 ,其PBMC的NK杀伤活性由 6 2 %升高到 82 % ,平均升高 32 %。结论 (1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3 AK细胞良好的前体细胞。 (2 )LAK和CD3 AK细胞的数量和杀伤能力在培养的第 11天时达高峰 ,而且CD3 AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞。 (3)CD3 AK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性。 (4 )

扶正培本法对乳腺癌患者树突状细胞的影响研究

目的:从细胞、分子水平上初步探讨中医扶正培本法对机体免疫功能的损害的修复作用及其机理。方法:用流式细胞术检测乳腺癌患者癌组织、引流淋巴结中CD83、CD80、CD86蛋白表达水平及在化疗前、后的改变。结果:乳腺癌患者癌组织、腋窝淋巴结细胞CD83、CD80、CD86蛋白与良性对照组比较明显降低(P<0.05或0.01),化疗前、后对比癌组织、腋窝淋巴结细胞CD83、CD80、CD86水平明显降低(P<0.05或0.01)。加中医扶正培本治疗后,化疗前、后对比癌组织、腋窝淋巴结细胞CD83、CD80、CD86水平没有显著性差异(P>0.05)。结论:肿瘤本身、化疗对机体免疫功能产生不良影响,扶正培本法可能参与激活树突状细胞功能,上调共刺激分子水平,帮助修复机体的免疫损伤。

脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的临床应用研究

目的:研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标。方法:分离脐血单个核细胞,分别用IL-2和IL-2+CD3Ab诱导LAK和CD3AK细胞,并测其扩增数量和对K562细胞的杀伤活性;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况和外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性。结果:脐血LAK细胞和脐血CD3AK细胞均于培养后11天时扩增倍数最高,分别是培养前的18倍、24倍,对K562的杀伤活性分别是培养前的2.6倍和3.2倍;肿瘤患者输注CD3AK细胞一疗程后,其外周血T淋巴细胞亚群绝对计数有明显升高:总T升高66.0%,Th升高68.0%,Ts升高58.0%;其PBMC的NK杀伤活性由63.0%升高到81.0%,平均升高28.0%。结论:1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3AK细胞良好的前体细胞。2)LAK和CD3AK细胞的数量和杀伤能力在培养的11天时达高峰,而且CD3AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞。3)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群绝对计数和PBMC的NK活性。4)肿瘤患者的外周血T淋巴细胞计数和PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数。

两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗对Lovo细胞的体外杀伤作用

目的比较重组痘苗病毒负载人癌胚抗原(CEA)基因转染方式与Lovo细胞裂解物诱导方式对产生DC疫苗的影响。方法分别采用重组痘苗病毒负载CEA基因转染方式及Lovo肿瘤细胞裂解物转染方式转染未成熟DC,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。体外培养CTL并检测其活性;MTT法检测两组CTL对Lovo细胞的杀伤作用。结果两种方式致敏DC均可诱导激活CTL并分泌INF-γ,而重组痘苗病毒转染DC组CTL诱导率高于细胞裂解物组;重组痘苗病毒转染组诱导的CTL对Lovo细胞的特异性杀伤活性显著高于细胞裂解物组。结论两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗均能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性,而使用重组痘苗病毒转染CEA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,为DC疫苗用于结肠癌的免疫治疗奠定基础。

高脂饮食诱发小鼠肥胖及其对肠道菌群结构影响的研究

目的探讨高脂饮食对小鼠体重、血脂以及肠道菌群结构的影响。方法将20只C57BL/6J雌性小鼠随机分为正常对照组(10只)和高脂饮食组(10只),分别给予普通饮食和高脂饮食。饲喂12周后,称量小鼠体重,测定小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量。采集小鼠粪便,提取细菌总DNA,PCR扩增获得16S r DNA基因V4标签片段,用于Hi Seq 2500高通量测序,基于QIIME平台比较小肠内容物菌群结构多样性。结果高脂饮食组小鼠体重及血清TC、TG、HDL-C、LDL-C均显著高于正常对照组。正常对照组小鼠粪便菌群多样性高于高脂饮食的小鼠。高脂饮食组小鼠的粪便中含有的厚壁菌较正常组显著升高,但是拟杆菌门数量显著低于正常对照组。结论高脂饮食能诱导小鼠肥胖,改变小鼠肠道菌群结构。

血清HSP27在原发性肝细胞癌早期诊断中的应用

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)在原发性肝细胞癌(HCC)早期诊断中的应用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测正常人、乙肝病毒携带者和HCC患者血清中HSP27的含量,并结合化学发光免疫分析法进行血清甲胎蛋白(AFP)的平行检测。结果 HCC患者平均HSP27水平明显高于正常对照组和HBV携带者。其中大/小肝癌组、或AFP阴性/AFP阳性HCC组与正常对照组、慢性HBV感染组及急性HBV感染组比较,差异均有统计学意义。所有肝癌组与AFP阳性的HBV感染组相比差异也有统计学意义。并且,当HSP27与经典标志物AFP相结合检测HCC时,诊断的敏感性、特异性、阳性预测值均大大提高。结论 HSP27可以作为HCC的早期血清学诊断的生物标志物。HSP27和AFP平行试验可提高敏感度,减少误诊率,有利于临床诊断工作。

免疫编辑前后细胞因子诱导的杀伤细胞分泌细胞因子水平及细胞毒活性的比较

目的探讨免疫编辑前后细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)分泌细胞因子水平及细胞杀伤活性的变化。方法采用Ficoll密度梯度法提取脐血单个核细胞,定向诱导成CIK细胞,即免疫编辑前CIK细胞。Transwell小室共培养CIK细胞与人肺癌A549细胞,分离纯化CIK细胞即免疫编辑后CIK细胞。通过ELISA和MTT法分别检测免疫编辑前后CIK细胞分泌细胞因子水平及细胞毒活性的变化。结果CIK细胞与A549细胞共培养后,其分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的含量较共培养前CIK细胞显著下降(P<0.05),IL-2则略有降低。共培养后CIK细胞杀伤活性明显减弱(P<0.05)。结论CIK细胞与人肺癌A549细胞间存在免疫编辑作用,编辑后的CIK细胞分泌细胞因子水平及杀伤活性均下降。

CEA-rV治疗CEA阳性肿瘤的实验和应用研究

目的:探讨CEA重组基因痘苗病毒(CEA-rV)对实验动物CEA阳性肿瘤的预防和治疗作用。方法:1)预防组:将实验鼠分为4组,先皮下接种痘苗病毒(1、2组野生型W-VV,3、4组CEA-rV)3次,再分别皮下注射同源鼠肝癌细胞(1、3组Hepa-CEA-,2、4组Hepa-CEA+)。2)治疗组:同样4组,先皮下注射肝癌细胞(1、3组Hepa-CEA-,2、4组Hepa-CEA+),7d后再分别皮下接种痘苗病毒(1、2组W-VV,3、4组CEA-rV)。以后每周测量一次肿瘤大小,并观察动物反应。结果:1)预防组:接种CEA-rV/Hepa-CEA+组各鼠在观察期限内无肿瘤形成,而3个对照组各鼠皮下均有肿瘤形成,并且以相近速度快速增长(肿瘤体积平均3.5cm3)。2)治疗组,接种Hepa-CEA+/CEA-rV组小鼠皮下肿瘤生长缓慢,瘤块较小(平均1cm3),而3个对照组肿瘤生长迅速,瘤块较大(平均5cm3)。无论预防组和对照组小鼠在整个实验过程中均未表现有毒副反应。结论:CEA-rV对实验性阳性肿瘤具有良好的预防和治疗作用,而且预防作用更佳。

细胞因子诱导的杀伤细胞上清液的细菌内毒素检测

目的:通过试验建立细胞因子诱导的杀伤细胞(cyto-kine induced killer cells,CIK细胞)上清液细菌内毒素的检查方法。方法:参照中国药典(2005年版二部附录ⅪE)细菌内毒素检查法进行干扰试验。结果:用灵敏度0.25EU.mL-1的鲎试剂,同时将样品稀释40倍,进行细菌内毒素检查,可消除干扰作用。结论:细菌内毒素检查法可以用于CIK细胞上清液的细菌内毒素检测,对CIK细胞制剂进行质量控制。

CEA-rV负荷树突状细胞与CIK细胞共培养后对裸鼠结肠癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨负荷了CEA-rV的树突状细胞与CIK细胞共培养后在裸鼠体内特异性的抑瘤作用。方法在Balb/c裸鼠颈背皮下接种Lovo结肠癌细胞,次日起连续6d给予不同的效应细胞(CIK、DC+CIK、CEA-rV+DC+CIK)治疗,观察其对结肠癌生长的抑制作用。结果裸鼠体内实验表明,CEA-rV+DC+CIK能够显著抑制CEA阳性的Lovo结肠癌细胞的生长,其抑瘤率可达51.2%,明高于CIK组的25.1%以及DC+CIK组的28.5%。结论负荷CEA-rV的DC与CIK细胞共培养后在裸鼠体内对CEA阳性的Lovo结肠癌有特异性抑瘤作用。

一种KRAS基因突变检测方法的建立及初步应用

目的建立一种KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并初步探讨其临床应用价值。方法以KRAS基因热点突变区域12、13密码子为研究位点设计特异性扩增、测序引物,利用已知野生型、突变型样品以TA克隆技术构建相应质粒作为标准品,建立KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并进行方法学和应用评估。结果成功构建了KRAS基因12、13密码子野生型、突变型质粒。建立了KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,该方法灵敏度高(9.39×101copies/uL),重复性好(实时荧光定量PCR部分批内、批间变异系数分别为1.60%、2.54%)。该法与传统Sanger测序法同时检测40例临床样品,结果符合率为100%。结论本研究成功建立了可用于临床样品检测的KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法。

人脐血来源树突状细胞的体外培养及鉴定

目的建立脐血来源树突状细胞（dendritic cells，DC）的体外培养方法，为进一步研究DC的功能、特性及临床应用提供了技术方法。方法取正常人脐血，分离获得单个核细胞，利用贴壁法去除悬浮细胞后，加入1000U／mL rhGM-CSF、500U／mL rhlL-4，至d7再加入500U／mLTNF-α进行培养，收集培养至d10的DC，分别从形态学、免疫表型和功能上加以鉴定。结果体外培养的d10，大量细胞出现典型的树突状形态；经流式细胞仪检测，高表达HLA-DR、CD80、CD83、CD1a、CD11c；混合淋巴细胞反应显示其在体外能有效刺激同种淋巴细胞增殖。结论在合适的细胞因子组合下，能够在体外利用脐血成功诱导出成熟DC。

脐血来源树突状细胞的体外扩增、鉴定及冻存

目的研究脐血来源树突状细胞（DCs）的体外扩增、鉴定和冻存。方法用Ficoll分离获得脐血单个核细胞，以重组hGM—CSF、hIL-4及hTNF-α体外诱导培养14d。在DCs发育过程中，在光镜和电镜下观察其生长情况，应用流式细胞仪检测DCs表型。采用台盼蓝拒染法测定DCs增殖水平，MTT法检测DCs活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤性。同时用二甲亚砜作为保护剂，DCs经过-20℃和-80℃降温，在-196℃液氮保存，然后40℃水浴复苏。结果第6天体外培养的DCs由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞，随着培养时间的延长，此类细胞数量增多，第14天为形态不规则的毛刺状，为典型树突状细胞形态。流式细胞仪检测表明，成熟DCs高水平地表达HLA—DR、CD80、CD83、CD1a、CD11c。被激活的T细胞对2种来源于不同组织的肿瘤细胞均产生了明显的杀伤性。冻存DCs和新鲜DCs的生物活性无明显差异。结论脐血单个核细胞细胞经hGM—CSF＋hIL-4＋hTNF—α体外培养，能诱导出DCs，为进一步开展DCs的实验研究与临床应用奠定了基础。

商务英语专业就业市场分析及教学改革构想——基于东莞外贸家具企业的人才库分析及某高校09级商务英语专业毕业生的就业追踪调查

在对外贸企业的商务英语人才库、人才需求条件及人才满意度调查基础之上,分析了商务英语专业就业的疲软现状及原因,提出了适应于高职高专院校商务英语发展的教学改革构想。