氧化型低密度脂蛋白对培养的内皮细胞一氧化氮合成和释放的影响

为观察氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞一氧化氮生成的影响，采用体外细胞培养方法将含不同浓度氧化型低密度脂蛋白的ＤＭＥＭ 培养液（ 氧化型低密度脂蛋白终浓度分别为０ ｍｇＬ、５０ ｍｇＬ 、１００ ｍｇＬ 、２００ ｍｇＬ），与内皮细胞共同孵育（３７ ℃、５％ ＣＯ２）２４ ｈ 后，分别测上清液中乳酸脱氢酶活性和一氧化氮含量及细胞中一氧化氮合酶活性，并用细胞化学染色法记数各组细胞一氧化氮合酶阳性染色细胞数。结果发现，随着培养液中氧化型低密度脂蛋白浓度升高，上清液中乳酸脱氢酶活性增加和一氧化氮含量下降，细胞中一氧化氮合酶活性和一氧化氮合酶阳性染色细胞数下降，可见，氧化型低密度脂蛋白可损伤血管内皮细胞，降低细胞中一氧化氮合酶活性，抑制一氧化氮产生，这可能是氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化的原因之一。

自由基清除剂依达拉奉对H_2O_2损伤的PC12细胞释放谷氨酸的影响

目的:探讨H_2O_2对PC12细胞谷氨酸(GLU)释放的影响及依达拉奉的阻断作用。方法:用H_2O_2处理体外培养的PC12细胞建立细胞损伤模型,并加入不同剂量的依达拉奉(10^(-3),10^(-4),10^(-5),10^(-6), 10^(-7)mol·L^(-1)),显微镜下观察PC12细胞形态,MTT法检测活细胞存活率,GLU试剂盒测定细胞培养液中GLU的含量。结果:H_2O_2处理24 h后,细胞形态发生明显改变,胞体变小、突起缩回。MTT吸光值减小,活细胞数减少。GLU释放含量明显增加。依达拉奉组细胞形态明显改善,MTT吸光值显著增加, GLU释放含量明显降低。结论:在H_2O_2的作用下,PC12细胞GLU释放增加,加入依达拉奉后PC12细胞的GLU释放量减少。

国产注射用枸橼酸阿奇霉素体内外抗菌作用研究

目的:评价国产注射用枸橼酸阿奇霉素的体内、外抗菌活性并与进口阿奇霉素进行比较。方法:体外实验采用琼脂二倍稀释法测定两种阿奇霉素对临床分离的220株致病菌的最低抑菌浓度(MIC);体内实验采用金葡菌、肺炎链球菌及大肠杆菌感染小鼠建立动物模型,阿奇霉素皮下注射给药对感染动物进行治疗,评价对感染小鼠的保护作用。结果:体外实验结果表明国产品与进口品对需氧革兰氏阳性球菌,革兰氏阴性杆菌以及厌氧菌的体外抗菌谱,MIC_(50),MIC_(90)基本一致;体内实验结果显示国产阿奇霉素对细菌感染的小鼠ED_(50)分别为1.9、0.71、14.6mg/kg,进口阿奇霉素分别为2.4.0.55、15.3mg/kg,国产注射用枸橼酸阿奇霉素的体内疗效与进口样品基本相同。结论:国产注射用枸橼酸阿奇霉素和进口阿奇霉素具有相同的抗菌谱和抗菌活性。

TR基因重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的 :构建含人硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因的重组腺病毒载体 ,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性。方法 :从重组质粒pGEM TR上用内切酶切下编码 5 0 0个氨基酸的全长TRcDNA片段 ,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle TR。将带有CMV启动子的目的片段 ,插入E1、E3缺失的Adeno X病毒DNA中 ,以Adeno TRDNA通过脂质体转染HEK2 93细胞 ,获得重组腺病毒Adeno TR进行PCR鉴定及病毒滴度测定。用重组腺病毒感染CV1细胞 ,通过免疫荧光染色与Westernblot分别检测重组腺病毒感染的细胞上和裂解液中TR蛋白的表达。结果 :重组腺病毒Adeno TR的病毒滴度为 4 .4× 10 11pfu/L。PCR、荧光显微镜证实 ,以及Westernbolt分析 ,在相对分子质量 (Mr)约 5 5 0 0 0处均出现特异性条带。结论 :成功地构建了重组腺病毒载体 ,并能介导外源基因TR表达 ,为进一步研究TR的功能及其与疾病的相关性奠定了基础。

石英对肺泡Ⅱ型细胞的直接损伤及功能影响

由健康大鼠分离得到的肺泡Ⅱ型细胞悬液中加入石英，以50mg／L、100mg／L、200mg／L为石英终浓度培养4h，随石英剂量增加，细胞存活率下降，培养液中乳酸脱氨酶活性增加，光镜和电镜观察均发现细胞的损伤和崩解，提示：石英可直接损伤肺泡Ⅱ型细胞。以25mg／L、50mg／L、100mg／L为石英终浓度培养24h后，培养体系中总磷脂含量升高，培养液中PGE2增加，提示：石英可影响Ⅱ型细胞的分泌功能。石英对肺泡Ⅱ型细胞的上述影响进一步提示，石英对矽肺早期肺泡结构的破坏和肺组织的非特异性炎症具有促进作用，在矽肺病变形成中具有重要意义。

IM-94增强小鼠免疫功能的实验研究

研究了ＩＭ９４ 对免疫低下小鼠免疫功能的影响．结果显示：ＩＭ９４ 能逆转环磷酰胺所致的免疫低下反应，并进一步提高小鼠的免疫活性，使其巨噬细胞吞噬能力、ＮＫ 细胞自然杀伤活性、淋巴细胞增殖水平、半数溶血值和抗体生成细胞水平均有明显提高，说明ＩＭ９４ 对实验小鼠有正向免疫调节作用．

兔心肌缺血——再灌注损伤图象分析及心内压变化

目的:探讨兔心肌缺血—再灌注损伤(MIRI)发生机理。方法:兔随机分成三组:缺血组、再灌注组和正常对照组。结扎兔左冠状动脉前降支20min复制兔心肌缺血模型,剪断结扎线恢复血流30min复制再灌注损伤模型。左室前壁取材后进行6项参数的计算机图象定量分析。结果:用计算机处理系统对结扎前、缺血即刻及20min、再灌注即刻及30min 5项参数进行测量,缺血组和再灌注组的胞质面积A_2值下降(P<0.05),胞质灰度G_2和间质灰度G_3质明显下降(P<0.01)。最高心室压力(PVP)、收缩开始至最高心室压力(T—PVP)和收缩压力最大上升速度(T—dp—max)3项参数在结扎即刻及20min、再灌注即刻及30min明显降低(P<0.05或0.01)。结论:MIRI造成心肌细胞损伤、心肌能量代谢障碍和心肌组织损伤因子增多。在MIRI救治过程中,除恢复血流改善缺氧保护心肌外,还应及时供给能量,消除和降低损伤因子以获得理想效果。

兔心肌缺血——再灌注损伤冠脉血气变化研究

目的:观察免心肌缺血——再灌注损伤冠脉血气变化规律。方法:用丹麦产BLA-Ⅲ型血气分析仪测定兔心肌缺血——再灌注损伤结扎前、缺血后20 min和再灌注30 min三个不同时期冠状动脉血中氧分压(PcaO_2)、二氧化碳分压(PcaCO_2)、pH值、血氧饱和度(SaO_2)、氧含量(CaO_2)、实际碳酸氢盐(AB)、标准碳酸氢盐(SB)和剩余碱(BE)八项参数的变化,结果:除PcaO_2和BE在灌注30 min与结扎前无显著变化外,其余参数在缺血后20 min和灌注30 min均明显低于结扎前(P<0.01),且灌注后30 min冠状动脉血中的pH、PcaO_2、SaO_2、CaO_2四项参数也较缺血后20 min显著降低(P<0.01或P<0.05))。结论:认为低氧血症既是冠状动脉缺血造成的直接恶果,又是引起代谢性酸中毒的直接原因。低氧血症和代谢性酸中毒是加重心肌进一步损伤的两大主要因素。

兔心肌缺血-再灌注损伤冠脉血气变化研究

观察兔心肌缺血-再灌注损伤结扎前、缺血后20min和再灌注30min 3个不同时期冠状动脉血中氧分压(PcaO_2)、二氧化碳分压(PcaCO_2)、pH值、血氧饱和度(SaO_2)、氧含量(CaO_2)、实际碳酸氢盐(AB)、标准碳酸氢盐(SB)和剩余碱(BE)8项参数的变化规律,结果显示,除PcaCO_2和BE在灌注30min与结扎前无明显变化外,其余参数在缺血后20min和灌注30min均明显低于结扎前(P<0.01),且灌注后30min冠状动脉血中的pH、PcaO_2、SaO_2、CaO_24项参数也较缺血后20min显著降低(<0.01或P<0.05)。作者认为,低氧血症既是冠状动脉缺血造成的直接恶果,又是引起代谢性酸中毒的直接原因。低氧血症和代谢性酸中毒是加重心肌进一步损伤的两大主要因素。

榄仁树叶提取物(LR-98)对实验性肝损伤的防护作用

采用生化检测并结合形态学观察 ,研究了榄仁叶提取物 (LR - 98)对小鼠实验性化学肝损伤的防护作用 .发现在急性肝损伤实验中 ,LR - 98能对抗四氯化碳 (CCl4 )引起的肝细胞核膜皱缩、周边异染色质增加、核固缩及髓鞘样变化等亚微结构的病理学改变 .LR - 98不仅显著剂量依赖性抑制CCl4 所致小鼠血清谷丙转氨酶 (sGPT)活性的升高 ,完全阻抑CCl4 所致小鼠肝组织中超氧化物歧化酶 (SOD)活性的下降 ,且可完全逆转D -氨基半乳糖 (D -GalN)诱发的sGPT活性的升高 .在慢性肝损伤 (肝硬化 )实验中 ,高剂量LR 98可完全逆转由CCl4 所致sGPT活性、肝羟脯氨酸含量的显著增高 ,以及SOD活性的下降 .结果表明 ,LR - 98对急慢性肝损伤有良好的防护作用 ,其机理可能与抗脂质过氧化有关 .

联合用药对海水型肺水肿呼吸混沌动力学影响

观察联合用药对实验性家兔海水型肺水肿的呼吸混沌动力学特性影响,用2 mg/kg海水通过肺支气管灌注复制海水肺水肿模型。用东莨菪碱(0.06 mg/kg)、氨茶碱(50 mg/kg)、纳络酮(0.08 mg/kg)耳缘静脉注射治疗肺水肿。0.9％NaCl静脉注射(4.2 ml/kg)作为药物对照组。用生理信号计算机采集系统对数据进行实时采集。正常家兔呼吸Lyapunov指数L1=0.060 10±0.099 43((?)±s),海水型肺水肿L1=3.76 41±2.94 89((?)±s)。呼吸时间序列数据二维、三维混沌空间散点图显示海水型肺水肿的混沌吸引子空间结构较正常发生改变,用药后L1值和混沌图部分接近正常,混沌动力学分析方法可以应用于肺水肿早期诊断及药物治疗效果的评价。

叠氮钠损伤的神经元内硫氧还蛋白mRNA水平的变化

氧化应激与许多神经退变病有关,而线粒体损伤是氧化应激加剧的重要原因。本文通过细胞活性检测(MTT法)、形态学观察,分析NaN_3对原代培养神经元的损伤作用,并通过RT-PCR半定量检测NaN_3损伤后神经元内疏氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)mRNA水平的改变,以阐明这一重要的氧还调节蛋白在神经元损伤过程中的作用。实验表明NaN_3以浓度和时间依赖方式损伤神经元,降低Trx表达水平。提示:神经元内呼吸链受损引起Trx表达减少,从而减弱神经元内氧还调节功能,最终引起神经元损伤、死亡。

人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99％;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36％,其分子质量为55 ku。TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。

新型重组人肿瘤坏死因子引起小鼠肝损伤

目的 :研究新型重组人肿瘤坏死因子 (rhTNF NC)引起小鼠肝损伤的作用。方法 :给小鼠尾静脉注射rhTNF NC ,检测血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)活性、肝脏指数 ,并用硫代巴比妥酸(TBA)测定肝组织中丙二醛 (MDA)含量 ,同时测定超氧化物歧化酶 (SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活性。结果 :给小鼠尾静脉注射rhTNF NC 8h后 ,血清ALT、AST活性显著升高 (P <0 0 1) ,肝脏指数和MDA含量也明显增加(P <0 0 5 ) ,而SOD活性下降 (P <0 0 5 ) ,但GSH Px活性未见明显改变 (P >0 0 5 )。结论 :rhTNF NC可引起小鼠脂质过氧化性肝损伤。

H_2O_2诱导的线粒体损伤神经元内硫氧还蛋白mRNA水平的变化

线粒体缺陷和氧化应激参与了神经退行性疾病的发病机制。叠氮钠(NaN_3)是线粒体细胞色素C氧化酶(COX)的特异性抑制剂,能诱导线粒体缺陷。本实验通过细胞活性检测(MTT法),形态学观察,分析H_2O_2对原代培养的正常神经元及NaN_3诱导的线粒体缺陷神经元的损伤作用的差异。并通过RT-PCR半定量法检测H_2O_2损伤后两类神经元内硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)mRNA水平的变化,以阐明细胞内这一重要氧化还原调节蛋白在神经元损伤时的作用机制。实验表明,在正常神经元内,H_2O_2的损伤对Trx表达量的改变似乎不明显;而线粒体缺陷神经元内Trx的表达量下降,且对于H_2O_2的损伤具有浓度、时间依赖性。提示:在线粒体功能缺陷神经元中,Trx似乎发挥更重要的作用。