EZH2基因3'非翻译区慢病毒载体构建及重组体筛选

目的构建携带人EZH2基因3'非翻译区(3'UTR)的慢病毒筛选载体并实现该重组体在人乳腺癌MCF-7中稳定整合,为下一步MicroRNAs(miRNAs)筛选奠定基础。方法从组织中提取并用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出EZH2基因3'UTR,构建携带EZH2基因3'UTR的重组慢病毒载体CTX-Lentivirus-EZH2 3'UTR,脂质体法将重组的慢病毒载体和包装载体混合物共转染工具细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒。用裂解液裂解病毒颗粒,根据慢病毒载体上的CMV启动子表达量检测病毒滴度。用慢病毒颗粒感染乳腺癌MCF-7细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定整合的乳腺癌细胞MCF-7,用Real-Time PCR和Western blotting方法检测EZH2基因3'UTR是否整合入细胞MCF-7中。结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序结果证实,EZH2基因3'UTR成功定向克隆到慢病毒载体上。Real-Time PCR检测病毒滴度为4.3×109拷贝/mL。筛选稳定整合MCF-7细胞的最佳浓度为0.2μg/mL。重组慢病毒转导MCF-7后,Real-Time PCR和Western blotting方法分别检测EZH2基因3'UTR整合到乳腺癌细胞MCF-7基因组中。慢病毒感染实验组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建携带EZH2基因3'UTR慢病毒筛选载体,实现重组体在乳腺癌MCF-7细胞中稳定整合。

社会工作介入离异家庭青少年成长困境及解决路径

随着社会经济的发展,家庭和社会结构出现多元化的趋势,城市中离异家庭越来越多,在此基础上衍生出各种各样的问题,与正常家庭环境下成长的青少年相比,离异家庭中的青少年在情感、心理、认知、行为上更容易出现偏差认知和行为,因此对他们的学习和发展有不利影响。本文采用社会工作个案研究对离异家庭青少年的成长问题进行介入干预,旨在为相关问题的解读提供有效途径或有益借鉴。

上海市奉贤区儿童钙和微量元素检测结果分析

目的：了解上海市奉贤区儿童钙、铜、锌、铁、镁5种元素的缺乏状况及变化趋势，为防治儿童钙和微量元素的缺乏和指导合理膳食提供参考依据。方法选取2219例于本院儿科门诊就诊的儿童，使用原子吸收光谱法测定全血铜、锌、钙、镁、铁5种元素的水平。将儿童分为5个年龄组：婴儿组（1～＜12个月），幼儿组（1～＜3岁），学龄前组（3～＜7岁），学龄期组（7～＜12岁），青春发育期组（12～18岁）。分析不同年龄段和不同性别儿童钙和微量元素的水平及变化趋势。结果5种元素中锌、铁和钙的缺乏在不同年龄段都较为常见，钙、铁和锌水平的异常率分别为21．94％、22．08％和26．81％。男、女性别间的差异无统计学意义（P ＞0．05），各组间比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。2011～2013年锌的平均水平在不同组儿童中有不同程度的上升趋势，其他元素没有明显的变化趋势。结论上海市奉贤区儿童锌、铁和钙存在不同程度的缺乏，应定期检测钙和微量元素并及早制定补充措施。

上海市奉贤区人乳头瘤病毒感染状况及型别分布特征

目的了解上海市奉贤区女性宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染状况和基因亚型分布情况,为预防HPV感染和宫颈癌防治提供可靠的科学依据。方法采用PCR联合反向斑点杂交技术,对2011年2月至2013年10月来本院初次进行HPV检查的18 194例妇女HPV检测结果进行分析。结果 18 194例样本中阳性例数为2 986例,总感染率为16.41%,其中21种基因型全部检出,单一HPV病毒感染2 714例,2种HPV病毒感染148例,占总感染例数的4.96%,3种及以上HPV病毒感染124例。住院患者阳性率为12.76%,门诊患者阳性率为16.88%。HPV感染高危型多于低危型,检出数约为低危型的7.5倍。高危型HPV感染中,以16、52、58型感染最多;低危型HPV感染中以81型感染最多,其次为6、11型。结论奉贤区HPV流行整体符合亚洲人群分布规律,又有独特的地域特征。感染年龄高峰在51~65岁,高危型感染高于低危型感染,主要为单基因型感染。

简介积分制管理在J代建企业一线员工绩效考评中的应用

我国中小代建企业普遍存在一线员工管理难题,传统的企业管理办法难以解决。中小代建企业要想发展,创新管理体制才有出路。经查阅相关文件,积分制管理理论应用于代建企业对员工管理的研究较少。本文以J代建企业为研究对象,通过应用积分制管理理论构建一个一线员工绩效考评体系,希望能在中小代建企业激励一线员工,提升管理方面提供参考。

面向危急值的检验流程的优化

危急值是一种极度异常的检验结果 ,如果不给予及时、有效的治疗,患者将处于危险的状态。缩短危急值标本的回报时间（TAT）对保证患者的安全显得尤为重要。

某集团公司代建项目管理系统的研究与应用

代建项目作为一种可以提高政府投资项目管理水平和投资效益的管理模式在我国各地得到了快速发展。分析了某集团公司所承接代建项目的特点,运用工程项目管理理论、信息化管理手段,开发应用代建项目管理系统,提升项目管理水平,帮助代建项目管理提速增效。为同类代建项目管理系统的开发和应用提供了借鉴。

冠心病患者B型脑钠肽水平与肾功能损伤的关系

目的探讨冠心病患者B型脑钠肽（BNP）水平与其肾功能损伤的关系。方法 2013年1~8月该院收治的冠心病患者435例,按照《2008中西方BNP专家共识》诊断心力衰竭的标准分为A、B、C 3组,A组118例排除心力衰竭,B组141例存在心力衰竭,C组176例介于灰区。检测所有患者BNP、尿素氮（Urea）、肌酐（Cr）水平,比较3组患者Urea、Cr水平及3组患者肾功能损伤的发生率,并对3组患者的BNP水平与Urea、Cr水平做相关分析。结果血清Urea、Cr水平及肾功能损伤的发生率随着BNP水平升高逐渐升高,3组患者Urea、Cr水平及肾功能损伤的发生率比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论冠心病患者BNP水平的变化与肾功能损伤关切密切。

人EZH2基因编码区及3'非翻译区融合蛋白重组慢病毒表达载体构建及其在293T细胞中的表达

目的构建携带人EZH2基因编码区(coding region,CDS)及3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)融合红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)重组慢病毒表达载体,使mCherry-EZH2融合蛋白在293T细胞中稳定表达。方法运用In-Fusion定向克隆技术构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体,测序无误后抽提质粒,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。Western blot检测mCherry-EZH2的表达。结果测序证实重组慢病毒表达载体基因序列完全正确;病毒颗粒包装成功,滴度为1.59×109IU/ml;Western blot检测293T细胞中可以表达mCherry-EZH2融合蛋白。结论成功构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体及病毒,其mCherry-EZH2可以在293T细胞中稳定表达。为进一步分析可能调控EZH2基因CDS区及3'UTR表达的miRNA奠定前期实验基础。