庚型肝炎分子生物学和流行病学研究进展

庚型肝炎分子生物学和流行病学研究进展５１０５１５广州第一军医大学南方医院卢桥生，梁炽森关键词流行病学；庚型肝炎；分子生物学中国图书资料分类号Ｒ５１２．６由于丙型肝炎病毒和戊型肝炎病毒检测的免疫学和分子生物学方法的建立，使大部分非甲非乙型肝炎得以诊断，...

重型肝炎病人的乙肝病毒前C基因变异研究

对１１例重型肝炎病人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ直接序列进行分析以阐述变异特点。一次或套式ＰＣＲ扩增到的ＨＢＶＤＮＡ，以不对称ＰＣＲ法制备成单链模板后直接作序列分析。结果１１个病例中，９例有１～２个氨基酸替代变异：Ｇ１８９６→Ａ的替代，产生一个终止密码，见于１例抗－ＨＢｅ阳性的病人，第１７位（ＡＡ１７）缬氨酸被苯丙氨酸替代，见于１例ＨＢｅＡｇ阴性的病人，ＡＡ１５和ＡＡ２９的丝氨酸替代变异见于２例ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶ含量甚低的病例，１８５８Ｃ→Ｔ替代见于４例病人，与ＨＢｅＡｇ表型无关，无一伴有终２８变异，呈相互排斥现象。说明重型肝炎病人的ＨＢＶ前Ｃ基因存在多种变异类型。这些变异点只见于１～２例病人，似乎不是引发重型肝炎的重要原因。

重型肝炎病人中乙型肝炎病毒C基因变异研究

通过对 1 1例重型肝炎病人中扩增的 HBV DNA直接序列分析 ,研究重型肝炎病人中 HBV C基因的变异及其特点。每个病例的 HBV C基因均有数量不等的变异 ,产生 1～ 1 2个氨基酸替代。慢性重型肝炎病人的 HBV C基因变异明显多于亚急性重型肝炎病人。C基因的变异呈聚集性 ,相对集中于 T淋巴细胞和 B淋巴细胞的抗原识别位点。重型肝炎病人的 HBV C基因有较高的变异率 ,在慢性重型肝炎的病人明显高于亚急性重型肝炎病人 ,变异相对集中于 T淋巴细胞和 B淋巴细胞抗原识别位点 。

丙型肝炎病毒定量检测及其临床意义

本文就几种有代表性的HCV RNA定量方法(滴度定量法,竞争性定量PCR法,非竞争性定量PCR法和支链DNA法)作了介绍,并讨论了这些方法的临床意义和局限性。

反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒基因表达的影响

将乙肝病毒（ＨＢＶ）的反义或正义寡核苷酸，加入能复制ＨＢＶ的肝癌细胞模型ＨｅｐＧ２．２．１５中，通过检测其上清中ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的含量，初步分析了反义寡核苷酸潜在的抗ＨＢＶ能力。针对Ｃ基因区１９７４─１９５５的反义链（ＣＳＰ）在１５μｍｏｌ／Ｌ浓度下可抑制８４．８％的ＨＢｓＡｇ表达和４０．０％的ＨＢｅＡｇ表达，停药２日时抑制率仍分别为９３．５％和３９．０％。实验期间未发现反义链对上述细胞形态或细胞生长状况有明显影响。结果提示反义寡核苷酸ＣＳＰ在实验条件下具有一定的抑制细胞ＨＢＶ表达的能力。

庚型肝炎病毒感染对慢性丙型肝炎的影响

研究慢性丙型肝炎患者中庚型肝炎病毒(UGV)的感染及其对丙型肝炎临床表现、肝功能和对干扰素应答的影响。以HGV的5′非编码区引物建立了检测HGV RNA的RT-PCR法,检测51例慢性丙型肝炎病人中的HGV感染。结果51例病人中,11例为HGV RNA阳性。慢性丙型肝炎病人的临床表现与是否感染HGV不相关,肝功能试验结果也无统计学差异。29例接受干扰素治疗的病人中,有6例病人(20.7％)合并HGV感染。HGV阳性组6人中1例完全应答,HGV阴性组23人中,有3例完全应答,在这有限的病例中,两组应答率没有统计学差异。提示在我国丙型肝炎病人中,混合HGV较为常见,HGV感染对丙型肝炎的临床表现无明显影响,也不影响其对干扰素的应答。

干扰素治疗过程中发生重型肝炎一例

患者男性,38岁。1985年体检时发现HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性,但肝功能正常,未治疗。1998年6月出现乏力、纳差、眼黄。7月13日收入我科,TBIL50μmol/L,ALT120u/L,HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性。肝组织病理示慢性肝炎中度（G3S2）。经护肝治疗,8天后血清总胆红素降至30μmol/L。

1023例病毒性肝炎临床与病理诊断分析

探讨病毒性肝炎临床与病理诊断的符合率。将 10 2 3例病毒性肝炎临床与病理资料输入计算机 ,用SPSS8 0统计软件进行相关分析。各型肝炎临床与病理诊断总符合率 76 9% ,诊断符合率依次为慢性肝炎重度组(CHs) 81 9% ,慢性肝炎轻中度组 (CHL～m) 81 4% ,活动性肝硬变 (ALC) 5 2 % ,静止性肝硬变 (LC) 5 0 % ,急性重型肝炎 (ASH) 5 0 % ,急性肝炎 (AH) 38 6 % ,慢性重症肝炎 (CSH) 35 7% ,亚急性重症肝炎 (SSH) 0 %。临床与病理结合 ,有助于提高病毒性肝炎的诊断准确率。

Th1/Th2细胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的了解慢性ＨＢＶ感染者外周血单核细胞（ＰＤＭＣ）中ＣＤ４~＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ的表达情况，以测定Ｔｈ０／Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞的百分数，探明Ｔｈ１、Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法常规分离ＰＢＭＣ，在ＰＭＡ、ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、莫能菌素的刺激下，采用流式细胞检测（ＦＡＣＳ）对慢性ＨＢＶ感染者ＰＢＭＣ中ＣＤ４~＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ表达进行分析。结果正常对照组，２．３％－１８.６％的ＣＤ４~＋Ｔ细胞为Ｔｈ１细胞，０.９％－９．２％为Ｔｈ２细胞；在慢性ＨＢＶ感染者外周血单个ＣＤ４~＋Ｔ细胞中，以Ｔｈ０细胞居多：而Ｔｈ１细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多，在炎症活动明显的慢性乙型肝炎患者中，Ｔｈ１细胞百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎；Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染的不同阶段则较为恒定，但明显高于对照组。结论Ｔｈ１细胞与炎症活动呈正相关，Ｔｈ２细胞可能与ＨＢＶ感染的慢性化相关联。

乙型肝炎病毒标志检验诊断的进展和评价

20余年来乙型肝炎病毒(HBV)的血清标志物的检测方法已陆续建立,逐渐用于临床诊断、病情和预后判断,然而,对于HBV感染的复杂的血清学表现的认识远未臻完善。近年来病毒分子生物学的进展,有助于阐明感染和慢性化的血清学现象。本文简述当前的研究结果。

经输血传播病毒的前瞻性调查

目的了解我国供血员、受血者中经输血传播病毒（ＴＴＶ）感染率，及经输血传播ＴＴＶ的发生率。方法对１３０例输血者进行ＴＴＶ以及ＨＢＶ和ＨＣＶ血清标志物检测，其相应的供血者也检查ＴＴＶ。结果３４０例供血员中有３６例（１０．６％）可检测到ＴＴＶ－ＤＮＡ。１３０例受血者输血前有１１例（８．５％）ＴＴＶ阳性，其余１１９例输血后有１８例ＴＴＶ转为阳性，在他们的供血中至少可查到一份ＴＴＶ阳性。４６例输血后肝炎病毒感染者中，其中有４５例为ＨＣＶ感染（包括７例与ＴＴＶ混合感染），２例为ＨＢＶ感染（包括与ＨＣＶ、ＴＴＶ混合感染各１例）。ＴＴＶ与ＨＢＶ混合感染以及７例ＴＴＶ与ＨＣＶ混合感染中有３例的受血者ＡＬＴ＞９０Ｕ／Ｌ，但是１０例单纯ＴＴＶ感染者，仅有２例伴有轻微的ＡＬＴ增高。结论供血员及住院病人中有较高的ＴＴＶ感染率，单纯ＴＴＶ感染与ＡＬＴ显著升高似乎并无关联。

重组干扰素的α-2b治疗慢性活动性乙型病毒性肝炎的疗效观察

应用重组干扰素α-2b对20例慢性活动性乙型病毒性肝炎患者进行了临床对照研究。治疗组10例采用IntronA5mu,每周3次,皮下注射,疗程12周、其中8例治疗前应用短程皮质激素撤除疗法。对照组10例采用常规护肝药物。在随访1年时,治疗组8例症状消失,ALT持续正常水平,2例各有一次复发,症状再现,ALT升高,85.7％(6/7)HBeAg血清转换为抗HBe,30％(3/10)HBV-DNA阴转。对照组仅5例临床症状消失,ALT持续正常水平或基本正常,5例出现9次复发,症状再现,ALT升高,28.6％(2/7)HBeAg自发阴转,但无1例抗-HBe阳转,10％(1/10)HBV-DNA阴转。重组干扰素治疗期间副反应均可耐受,且呈可逆性改变。结果提示应用短程皮质激意撤除疗法与重组干扰素联合治疗方案是目前治疗我国慢性活动性乙型病毒性肝炎的最有效方法。

慢性HBV感染者外周血CD4^+T细胞内IL-4和IFN-γ的表达

小鼠Ｔ细胞克隆性分析将Ｔｈ细胞分为Ｔｈ１、Ｔｈ２。Ｔｈ１细胞以分泌ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－β为特征，主要参与细胞介导的免疫反应，并在抵御细胞内致病因子包括许多病毒方面起重要作用，而Ｔｈ２细胞以分泌ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０为特征，...

乙型肝炎病毒C基因启动子变异的意义

目的了解Ｃ基因启动子区Ｔ１７６２Ａ１７６４变异对其启动子的影响。方法ＰＣＲ产物直接测序，检测重症乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ和Ｃ基因调节序列的Ｔ１７６２Ａ１７６４变异；并将该调节序列插入到氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）表达质粒中，转染ＨｅｐＧ２细胞并瞬时表达，比较Ｔ１７６２Ａ１７６４野株及变异株的Ｃ基因启动小区序列及ＣＡＴ表达水平。结果Ｔ１７６２Ａ１７６４变异在使ＣＡＴ表达下调中起主要作用。结论Ｔ１７６２Ａ１７６４变异使Ｃ基因启动子活性下调中起重要作用。

新型病毒TTV与乙型肝炎病毒混合感染的初步探讨

目的了解新型肝炎病毒TFV与乙型肝炎病毒（HBV）混合感染对肝脏病变及HBV复制状态的影响。方法套式聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清TTVDNA并对检测结果和临床资料进行统计学分析。结果177例慢性HBV感染者中32例TTVDNA阳性，阳性率18．1％：其中无症状携带者5/52（9．6％），慢性肝炎7/46（15.2％），重型肝炎9/39（23．1％），活动性肝硬化9／40（22．5％），各组间无统计学差异；在慢性肝炎、重型肝炎及活动性肝硬化病人中，TTV阳性者与TTV阴性者的各项肝功能指标及血清HBeAg阳性率无统计学差异；但HBV、TTV混合感染的重型肝炎死亡率较高，具有统计学意义。，结论TTV混合感染似乎不影响HBV所致的肝脏病变及其复制状态，但可能影响重型肝炎的预后。

血清可溶性Fas-和FasL-mRNA检测方法的建立

目的建立可用于研究工作的血清学检测方法。方法按ＧｅｎＢａｎｋ的Ｆａｓ和ＦａｓＬ序列设计引物，以相应质粒作阳性材料，建立各自的ＲＴ－ＰＣＲ。结果２７例慢性乙型肝炎血清检出ｓＦａｓＬ－ｍＲＮＡ１３例（４８．２％），ｓＦａｓ－ｍＲＮＡ２１例（７７．８％）。结论目前尚无检测血清抗原的试剂、相关研究工作中可应用这一技术。

慢性乙型肝炎患者HBcAg特异性Th细胞克隆的建立及初步分析

目的 了解Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎（CHB）外周血及肝组织中的分布情况。方法 采用有限稀释法，建立CHB患者外周血及肝组织HBcAg特异性Th细胞克隆，并对所获得细胞克隆进行分析。结果 发现自肝组织分离的HBcAg特异性T细胞克隆，92.5%为CD4+表型，以Th1为主；而来源于外周血的T细胞克隆主要以Th0 为主，并与HBeAg是否阳性无关。仅15% （6/40）的T细胞克隆呈现明显的HBcAg特异性淋巴细胞增殖反应。结论 在肝组织及外周血占主导地位的Th细胞极化群的不同，较高比例的Th1细胞在肝组织炎症局部的聚集，提示在HBV的免疫发病机制中，Th1细胞可能起重要作用。