1997年台湾省口蹄疫流行概况

１９９７年台湾省口蹄疫流行概况卢永干（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）１９９７年，我国台湾省发生了８０年不遇的口蹄疫（ＦＭＤ）流行，现将从国际互联网上获得的最新信息报告如下。１流行情况３月１４日，台湾省新竹县的一个牧场（ＨＣ１）首先报告了第...

核酸探针技术研究进展

为有效地控制和治疗疾 病,当前极需研究快速、可 靠、高度特异的诊断技术。因 通常使用的免疫学试验方法往往满足不了这些要求,不能可靠地区分两个紧密相关的种(或株);不能真实地说明动物当时的健康状况。随着科学技术和工业生产的发展,在今后的日子里,核酸探针、限制酶分析(REA),聚合酶链反该(PCR),单克隆抗体和ELISA等分子生物学诊断技术将会很快地走出科学家的实验室,成为广大的野外兽医和实验室工作人员诊断疾病的有力武器。

牛口蹄疫咽-食道部带毒的研究进展

口蹄疫的消灭取决于两个因素,一是有效地控制本病从外部传入,二是彻底根除本国存在的疫源。为此,各国对于易感动物咽—食道部带毒问题都予以高度的重视,并对咽—食部病毒的生物学特性进行了一系列的研究。其中包括带毒动物的种类,带毒部位,病毒分离技术,单个易感动物和群体动物带毒的持续时间,咽一食部病毒对健康易感动物的感染性,以及与疫苗毒、流行毒株之间的亲缘关系。本文就有关问题综述如下。

应用反转录-聚合酶链反应检测口蹄疫病毒

建立了一种适用于检测动物（猪、牛、羊）组织（肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮）和牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫（ＦＭＤ）病毒核酸（ＲＮＡ）的反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术。引物对是人工合成的两条２０ｍｅｒ寡核苷酸片段，它们的序列相应于ＦＭＤ病毒结构蛋白ＶＰ１基因后２／３区段，在４个血清型之间基本一致（保守）。ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳检测。试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ具有良好的特异性，属该４个血清型的各个毒株都获得了预计长度的ＤＮＡ片段；而相关的小ＲＮＡ病毒科的猪水泡病（ＳＶＤ）和柯赛奇Ｂ５（Ｃｏｘ．Ｂ５）病毒（特异性对照），及未感染的细胞培养物和动物组织（空白对照）都是阴性。与常规检测方法相比，该ＲＴ－ＰＣＲ的检测灵敏度提高６－１２倍，最高可检测２０ＴＣＩＤ５０（细胞毒）或０．１６～０．３２ＬＤ５０（组织毒）的病毒量，二次扩增还可提高检测灵敏度１００倍。因为直接利用组织样品，检测试验快速简便，可在２４小时内获得结果。应用该方法已检测了２３２份组织样品和５８份Ｏ－Ｐ液样品。

NSP-ELISA鉴别FMDV感染与免疫

利用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒 (FMDV)非结构蛋白 (NSP) 3ABC多肽作为抗原 ,建立了一种可区分FMDV感染与接种灭活疫苗免疫牛的间接酶联免疫吸附试验 (I ELISA)。通过对 336份正常牛血清、50 8份注射疫苗牛血清、60份人工感染牛血清和 58份豚鼠免疫血清的检测 ,确定了血清抗体阴性与阳性效价的临界值。试验证明 ,该方法简易、快速 ,灵敏度比VIAA

口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达

设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。

区分动物疫苗免疫与病毒感染的口蹄疫非结构蛋白3AB鉴别诊断试剂盒的研制

以口蹄疫非结构蛋白3AB作为抗原的ELISA,适用于鉴别诊断感染和注苗动物。以3ABC基因片段为模板,经RT-PCR扩增得到3AB基因片段,与pET32a连接后,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,表达的重组3AB蛋白,分子量约为50Ku,ELISA结果显示,重组3AB蛋白可用于猪、牛口蹄疫病毒感染与疫苗免疫抗体的鉴别诊断。

如何诊断口蹄疫?

一、绪言活畜的移动和畜产品的无序流通是口蹄疫(FMD)暴发和流行的重要原因之一。因此,做好活畜移动前和畜产品进入流通领域的检疫是防止FMD前发生的有效手段之一。一旦某地突然暴发了FMD,采集样品送往实验室进行病原鉴定是实现早、快、严、小扑灭FMD有效的措施之一。

如何扑灭口蹄疫?

1997年台湾岛流行了猪的口蹄疫,给其畜牧业经济造成重大的损失。为此,本文向广大读者介绍该病的临床表现,病原特性和如何采取措施早、快、严、小的扑灭已暴发的疫病。一。

用3AB-ELISA鉴别猪口蹄疫病毒感染与疫苗免疫猪的研究

采用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB(FMDV 3AB)多肽为抗原,A G蛋白 辣根过氧化物酶为酶结合物,过氧化氢 四甲基联苯胺为底物溶液,建立了一种可鉴别FMD感染与灭活疫苗免疫猪血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(I ELISA),即3AB ELISA。通过对1779份健康猪、免疫猪及人工感染猪血清的检测,确定了该I ELISA的阳性 阴性判定临界值。该检测方法比VIAA AGID法检出率高,尤其是采用A G蛋白酶结合物后操作更简便。

口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α。提取重组载体pT-3ABC,经BamH I/Hind III双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP-3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应。ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断。

抗口蹄疫蛋白疫苗与DNA疫苗混合物的免疫原性研究

目的 研究抗口蹄疫蛋白及DNA疫苗混合物免疫原性。方法 以O型口蹄疫病毒 (FMDV)VP1免疫活性肽基因串连片段取代猪IgGH链基因可变区的CDR3区构成融合基因。然后分别与原核表达载体pET2 8b及真核表达载体pCDM- 8构建抗口蹄疫蛋白疫苗pET2 8b -FH及DNA疫苗PCDM -FH。用蛋白疫苗 pET2 8b -FH和DNA疫苗 pCDM -FH及其混合物免疫猪后 ,用攻毒实验检测其效果。结果 攻毒后 ,抗口蹄疫蛋白疫苗 pET2 8b -FH及DNA疫苗pCDM -FH单独免疫能分别使猪发病推迟 10天和 1天 ,症状减轻 ;而混合疫苗免疫效果比阴性对照好而不及这两个疫苗单独免疫效果。结论 抗口蹄疫蛋白疫苗 pET2 8b -FH及DNA疫苗pCDM -FH单独免疫能使猪发病推迟 ,症状减轻 ;而混合疫苗免疫效果较差 ,免疫方法仍需改进。

反转录－聚合酶链反应检测牛食道－咽部分泌物中的口蹄疫病毒

应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。第１组６份Ｏ－Ｐ液，采自人工感染发病牛，ＰＣＲ检测结果都是阳性；查毒试验结果５／６阳性。其中１份样品的１０－１，１０－２，１０－３和１０－３．７稀释液的ＰＣＲ检测结果也都是阳性；同样稀释的样品接种细胞，每稀释度２瓶，１０－１～１０－３都是２／２出现ＦＭＤＶ所致的细胞病变（ＣＰＥ），１０－３．７１／２出现ＣＰＥ。第２组样品是从野外采集的水牛Ｏ－Ｐ液，共５２份。ＰＣＲ检测结果９份为阳性，另７份为可疑（弱阳性）；取接种了这７份Ｏ－Ｐ液的细胞培养液（无ＣＰＥ）再作ＰＣＲ检测，结果全部是阳性。５２份Ｏ－Ｐ液样品分别接种ＩＢ－ＲＳ－２细胞培养物，并盲传３代，均未观察到典型的ＣＰＥ。研究结果表明，建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法不仅可用于检测细胞培养物和动物组织，也适用于检测牛Ｏ－Ｐ液中的ＦＭＤＶ。

应用反转录-聚合酶链反应检测动物组织中的口蹄疫病毒

应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了猪和牛的扁桃体、淋巴结、脊髓、肌肉和蹄冠皮肤中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。与接种乳鼠测毒法比较，该方法的灵敏度达０．１６ＬＤ５０～０．３２ＬＤ５０病毒量。检测人工感染后７～３５ｄ的猪组织样品７７份，２５份为阳性；接种乳鼠并盲传３代，乳鼠－间接血凝试验（ＩＨＡ）鉴定６份为阳性。检测人工感染后４～７ｄ的牛组织样品５２份，２０份为阳性；接种乳鼠－ＩＨＡ鉴定１２份为阳性。检测野外鲜肉样品４７份，１２份为阳性；任选其中８份样品接种细胞单层，盲传至第６～７代，先后有５份样品产生ＣＰＥ；其中６份样品同时接种乳鼠，盲传至第６～７代，３组乳鼠出现ＦＭＤＶ致病症状，ＩＨＡ鉴定为阳性。检测冻猪肉样品３７份，３份为阳性；冻牛肉样品９份、冻羊肉样品１０份。

应用RT-PCR检测注射灭活疫苗猪组织样品中的口蹄疫病毒

应用ＲＴＰＣＲ检测注射灭活疫苗猪组织样品中的口蹄疫病毒朱彩珠卢永干邱孝高赵启祖谢庆阁张维德张强员美蓉（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）我们应用的反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术，已检测各种动物的各类组织样品１３００多份，本文报告应...

鸡传染性法氏囊病病原的分离

鸡传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种高度接触性传染病。由于IBDV含有呈节片状的双股RNA,这种排列方式允许进行可能的遗传重组和抗原结构的改变,从而导致了新的血清亚型(变型毒株)的产生。

鸡传染性法氏囊病的诊断和病原的初步分离

鸡传染性法氏囊病(IBD)是鸡的一种急性接触性传染病。该病传染性强,发病率高,临床上主要以下痢为特征。1992年元月,天水市某鸡场饲养的25日龄依沙雏鸡,爆发了一起鸡传染性法氏囊病,引起大批鸡只死亡,造成严重的经济损失。

犊牛甲状腺细胞的培养和应用

犊牛甲腺(CTh)初代细胞是一种对多种病毒敏感的细胞。W.A.Snowdon(1966)指出,对于口蹄疫病毒(FMDV)来说,CTh细胞对其的敏感性比犊牛肾细胞、仔猪肾细胞、幼仓鼠肾传代细胞(BHK_(21))、乳鼠高100～1000倍。所以自1963年以后,几乎所有的牛咽部一食道刮取物的病毒分离试验(FMD查毒试验)都采用CTh细胞。另外据W.Plowright和D.Ferris(1961)报道,作者用CTh细胞成功地分离到了用牛肾细胞、羊肾和睾丸细胞难以获得的牛恶性卡他热病毒。国内,对CTh细胞的培养和研究甚少,王则兴等(1983)曾报道过有关这方面的工作。为满足活畜进口检疫工作的需要,我们参考国外有关资料,成功地培养了CTh细胞,并试用于进口动物的检疫。