多种物理方法分离脂肪源基质血管组分细胞的比较

背景:脂肪源基质血管组分和脂肪源性干细胞在组织工程中的应用受到越来越多科研工作者的关注。当前,分离脂肪源基质血管组分的方法主要有酶解法和推注法,但这两种方法都存在着不容忽视的缺点。目的:寻找一种更加高活性、安全、简便的制备脂肪源基质血管组分的方法。方法:以无任何处理的脂肪组织为阴性对照,酶解法为阳性对照,通过细胞量、存活率、细胞碎片、细胞活性、增殖率等指标来比较酶解法、普通推注法、改良推注法、玻璃珠破碎法(简称玻璃珠法)及内置式超声波破碎法(简称内置超声波法)的差异。酶解法及普通推注法为目前分离脂肪源基质血管组分细胞普遍使用的方法;改良推注法是在普通推注法的基础上进行改良后得到的方法;玻璃珠法是利用玻璃珠震荡产生的剪切力,在脂肪颗粒中加入玻璃珠后在2500 r/min的条件下震荡9 min以制备基质血管组分细胞;内置超声波法则是利用空化效应,在25 W的功率下对脂肪组织处理36 s以获得基质血管组分细胞。结果与结论:①5种方法获得的基质血管组分细胞的大小差异无显著性意义(P>0.05);②阴性对照组细胞活性最低,酶解法细胞活性最高,酶解法、玻璃珠法及内置超声波法的细胞活性高于改良推注法和普通推注法(P<0.05);③酶解法、玻璃珠法及内置超声波法的细胞存活率、细胞增殖率高于改良推注法和普通推注法(P<0.05);④酶解法、玻璃珠法及内置超声波法细胞碎片比例、细胞凋亡率要远远低于普通推注法和改良推注法(P<0.05);⑤结果表明,玻璃珠法和内置超声波法富集基质血管组分细胞的效果优良,但玻璃珠法加入了外源物质进行处理,增加了污染的风险,而内置超声波法尽管将超声探头插入脂肪组织中,但只要将超声探头彻底灭菌,即可将污染风险降到最小。总的来说,内置超声波法和玻璃珠法优于普通推注法及改良推注法。

不同非接触式超声波处理获得脂肪源基质血管组分细胞方法的比较

背景:探索能够高效、稳定获取基质血管组分细胞的方法对于临床应用有非常重要的价值。目前分离基质血管组分的方法主要包括酶解法、推注破碎法、接触式超声波破碎法等,存在安全性和细胞存活率低、材料污染等不足,而非接触式超声波破碎法则能很好的解决这个问题。目的:寻找一种最优的非接触式超声波处理获得脂肪源基质血管组分细胞的方法。方法:实验所用人体脂肪组织(皮下脂肪)由广州中家医家庭医生整形美容医院提供,体检无其他基础疾病,取材前均获知情同意并签署知情同意书。以3种不同的超声波仪器(超声波清洗仪功率约为800 W、超声波细胞破碎仪功率约为1 000 W、非接触式超声波细胞破碎仪功率约为1 200 W)对脂肪材料进行非接触式超声处理15,20,25 min,以接触式超声波细胞破碎法为对照,功率为100 W,超声处理16 s,分别检测基质血管组分细胞大小、存活数量、细胞活力、细胞碎片率和微生物感染度。该研究实施符合广州中家医家庭医生整形美容医院的相关伦理要求。结果与结论:(1)3种方法所获得的基质血管组分细胞活性均高于接触式超声波破碎法(P<0.05);(2)3种方法所获得的基质血管组分细胞污染度均低于接触式超声波破碎法;(3)3种方法获得的基质血管组分细胞大小差异无显著性意义(P>0.05);(4)3种方法所获得的基质血管组分细胞碎片均少于接触式超声波破碎法(P<0.05),其中非接触式超声波细胞破碎仪处理20 min后采用酶解方法获取基质血管组分细胞的效果最好。

改良推注方法制备脂肪移植SVF胶的实验研究

目的探讨改良推注法与常规推注法制备基质血管成分(stromal vascular fraction, SVF)胶的效果。方法分别采用改良推注法和常规推注法从抽吸获取的脂肪组织中分离制备SVF胶,并对所获取的SVF胶进行细胞计数、增殖率、细胞成活率、细胞碎片率等生物学特性进行检测。结果改良推注法获取的SVF胶的细胞成活率较高(P<0.05),细胞凋亡、细胞碎片率显著低于常规推注法(P<0.05)。结论采用改良推注法制备脂肪移植SVF胶更加快捷、方便,并且可提高移植细胞的成活率、降低细胞碎片率,在疾病治疗及创伤修复中有较好的应用前景。