铁路地震灾害预警与应急系统现状及展望

在对国内外铁路地震灾害预警与应急系统现状调研的基础上,分析地震灾害预警与应急技术及其发展趋势,结合我国铁路建设实际情况,提出我国铁路地震灾害预警与应急系统的发展方向。

参环毛蚓肠上皮细胞重金属镉离子的耐受性研究

【目的】观察参环毛蚓肠上皮细胞(IEC)对重金属镉离子(Cd2+)的耐受能力,探讨其耐受特性与广地龙药材重金属超标的相关性。【方法】采用不同浓度Cd2+对参环毛蚓IEC进行胁迫处理,分别利用台盼蓝染色法和噻唑蓝法测定细胞死亡率和细胞活力,并借助显微镜观察与比较参环毛蚓IEC胁迫处理前后的形态变化。【结果】IEC对Cd2+的耐受特性主要表现为:①未经孵育时IEC可耐受Cd2+的最高浓度为8μmol/mL;②胁迫处理24 h后IEC可耐受Cd2+的最高浓度为6.25×10-2μmol/mL;③胁迫处理48 h时,IEC可耐受Cd2+的最高浓度为3.125×10-2μmol/mL,上述3个浓度分别是《中华人民共和国药典》(2010年版)中地龙项下镉限量指标的2 997.33、23.33和11.66倍;④IEC对Cd2+的耐受性在一定的时间范围内与剂量呈负相关。【结论】参环毛蚓IEC对重金属Cd2+具有较高的耐受性。Cd2+对IEC的毒性作用不是接触性的损伤,而有可能是产生于细胞代谢过程中。

基于COI和16SrRNA基因的地龙药材及其混淆品的DNA条形码鉴定

目的利用线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(COI)和16S核糖体RNA(16SrRNA)对地龙药材及常见混伪品进行分子鉴定,探讨快速、准确鉴定地龙药材及其混伪品基原物种的方法。方法收集地龙药材的药典收载品种及其易混品种10种,提取DNA,得到其COI和16SrRNA序列。所得序列经DNAStar校正后,用MEGA6.0自带的Clustal W多重比对,除去冗余位点,比对结果经MEGA6.0分析,构建地龙药材及其混淆品的邻接(N-J)树。结果地龙药材的正品来源参环毛蚓(Pheretima aspergillum)、通俗环毛蚓(P.vulgaris)、威廉环毛蚓(P.guillelmi)及栉盲环毛蚓(P.pectinifera)与其混淆品种间COI和16SrRNA基因序列均存在较多变异位点。由所构建的N-J系统聚类树图显示所测物种的单系性,即16SrRNA、COI可以很好的将地龙药材区别于其他混伪品。结论所获得的COI和16SrRNA序列可作为不同状态的地龙类药材物种鉴定的分子依据,并为进一步建立地龙等动物类中药物种真实性鉴定体系奠定了重要的实验基础。

广地龙药材DNA提取方法的优选

目的建立一种适合于广地龙干燥药材DNA的提取方法。方法参考陈旧皮张标本的DNA提取方法,并对样品预处理、酶解条件、沉淀时间等对影响DNA质量的重要因素,进行了筛选和优化。结果按优选的方法提取的总DNA的含量和纯度完全符合引物扩增分析的要求。结论该提取方法不仅解决了地龙类动物干燥药材DNA提取的难题,而且操作简便实用、DNA提取效率高,所得DNA的质量也满足后期DNA分子鉴定。

参环毛蚓体内核苷磷酸化酶的活性测定及动力学分析

目的建立参环毛蚓体内嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）的检测方法,以肌苷为底物,评价该酶的活性。方法采用HPLC法,色谱条件：Ecosil C18-AQ柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为10 mmol·L^-1磷酸二氢铵缓冲液（p H4.5）和甲醇,梯度洗脱,流速为0.8 m L·min^-1,柱温为室温,检测波长254 nm,用底物肌苷与组织粗蛋白提取液在室温孵育30 min,沸水煮5 min终止反应,12000 r·min^-1离心10 min,取上清过滤后进行HPLC分析,以Origin Pro 8.5软件作图,计算酶动力学参数。结果酶反应中产物次黄嘌呤在0.5-40μmol·L^-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9996）;精密度小于3.5%,回收率大于80%。PNP酶动力学参数：Vmax为0.015nmol·min^-1·mg^-1,Km为19.8μmol·L^-1。结论成功构建了参环毛蚓体内次黄嘌呤代谢酶活性测定相关的实验体系,该法所得数据稳定可靠,可准确反映关键酶活性的动态变化。

参环毛蚓肠上皮细胞体外培养及其生物学特性

该研究采用混合酶消化法获得参环毛蚓(Pheretima aspergillum)肠上皮细胞(intestine epithelial cell,IEC),并进行体外培养,成功传代培养至第8代,命名为IEC-P.A.。通过光学显微镜和透射电镜技术对IEC-P.A.细胞形态、超微结构进行了鉴定,采用MTT法绘制了细胞生长曲线,应用流式细胞术检测了DNA含量并分析其细胞周期和增殖活性。体外培养的参环毛蚓肠上皮细胞汇合后呈典型的"铺路石样"形态,细胞直径为8±2μm,表面具有大量的微绒毛,胞质内含丰富的线粒体及粗面内质网。细胞周期检测结果显示,G0/G1期细胞约占总细胞数的93%。染色体核型分析结果表明,参环毛蚓肠上皮细胞为二倍体,2n=22,核型为n(♂)=x=6m+3sm+2st。该研究成功获得了离体培养的参环毛蚓肠上皮细胞及其生物学特性的相关资料。