非霍奇金淋巴瘤病人外周血T细胞TCR Vβ谱系的选择性利用和克隆性增殖分析

为了解B细胞性非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)和T细胞性非霍奇金淋巴瘤 (T NHL)病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性的情况 ,利用RT PCR分别扩增 4例B NHL和 2例T NHL病人外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,以了解T细胞克隆性。结果显示 ,6例NHL病人外周血T细胞仅选择性表达 6 - 12个Vβ亚家族 ,全部病人均选择了表达Vβ1,Vβ8,Vβ13和Vβ19,5例病人表达Vβ2和Vβ16 ,而全部病人均未能检测到Vβ4 - 6 ,Vβ10 - 12 ,Vβ15 ,Vβ17- 18,Vβ2 0 ,Vβ2 2 - 2 3。基因扫描发现 2例B NHL和 1例T NHL病人的 1- 3个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖。结论提示 ,B NHL和T NHL病人外周血T细胞具有相似的Vβ亚家族选择性利用的特点 。

巢式PCR法检测髓系白血病患者外周血人类疱疹病毒-6的DNA

人类疱疹病毒 6型 (humanherpesvirus 6,HHV 6)是一种常见的病毒 ,与多种人类疾病有关。由于研究过程所采取方法不同 ,对于白血病病人感染HHV 6情况的报道也不一致。本研究首次运用巢式PCR检测了 38例髓系白血病病人外周血单个核细胞中的HHV 6DNA ,其中急性髓性白血病 (AML) 30例和慢性粒细胞白血病 (CML) 8例。结果显示 :与正常对照HHV 6的DNA检出率相比 ,AML患者的阳性率明显降低 ,而CML中则无明显异常 。

淋系白血病中人类疱疹病毒6型的感染情况

目的 :了解淋巴系统白血病患者人类疱疹病毒 - 6型 (HHV - 6)的感染情况。方法 :患者 38例 ,包括急性淋巴细胞白血病 (ALL) 31例、慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 4例、淋巴瘤白血病 (LL) 3例 ,正常对照 38例。取抗凝外周血 ,分离单个核细胞 ,提取DNA ,用巢式PCR方法检测目标DNA。结果 :HHV - 6DNA阳性检出率在全部患者中为 63% ,其中在ALL患者中为 68% ,均明显低于正常对照的阳性检出率 92 % (P <0 .0 5 ) ,另外 ,4例CLL患者有 1例阳性 ,3例LL患者中 2例阳性。结论 :在淋巴系统恶性疾病中HHV - 6的感染率低于正常人群 ,其临床意义有待进一步研究。

PCR检测白血病患者外周血中EB病毒的DNA

目的 :了解白血病患者EB病毒感染情况。方法 :收集 2 1例急性淋巴细胞白血病、1例慢性淋巴细胞白血病、15例急性粒细胞白血病、8例慢性粒细胞白血病患者及 32例正常对照组的外周血 ,分离单个核细胞 ,提取DNA ,应用PCR方法检测EB病毒DNA。结果 :在 1例初诊慢性粒细胞白血病病人样本中发现EB病毒阳性 ,余均为阴性。结论 :白血病患者存在EB病毒感染情况 ,但并不普遍。

造血干细胞移植后检出人类多瘤病毒尿的临床分析

目的研究造血干细胞移植后潜伏于体内的人类多瘤病毒(HuPV)-BK病毒(BKV)和JC病毒(JCV)的激活情况。方法连续采集41例患者造血干细胞移植前后及10例正常对照的尿样本,用实时定量PCR检测病毒,半巢式PCR鉴定BKV和JCV病毒株。结果造血干细胞移植后病毒尿阳性的患者共33例(80%),其中出现BKV尿者15人(45%)、JCV尿者3人(9%),在相同或不同时段尿样本中检出两株病毒者11人(33%),另外4人(12%)未能鉴定出病毒株;比较24例病人移植前、后病毒尿发生率,分别为19%、77%,存在显著性差异(P<0.0001);正常对照组没有检测到病毒(P<0.0001)。结论造血干细胞移植后HuPV病毒尿的发生率明显升高,但影响因素仍不明确,可能是多因素综合作用的结果,其临床意义还有待进一步探讨。

造血干细胞移植后出血性膀胱炎患者尿中检出人类多瘤病毒

目的检测造血干细胞移植后并发迟发性出血性膀胱炎患者尿中的人类多瘤病毒-BK病毒和JC病毒。方法收集造血干细胞移植后并发出血性膀胱炎患者的中段尿,运用实时定量PCR及半巢式PCR分别定量检测及定性鉴别人类多瘤病毒。结果3例造血干细胞移植后的患者,分别于第21,34,41天发生了迟发性出血性膀胱炎并各维持41,8,18 d,尿中均能检测到较高浓度的BK病毒,未发现JC病毒,病毒尿维持时间大于50 d。结论在造血干细胞移植的患者中,被激活的人类多瘤病毒可能参与迟发性出血性膀胱炎的发病过程。

造血干细胞移植后并发病毒性出血性膀胱炎的诊治

造血干细胞移植后并发出血性膀胱炎的原因,除了药物和移植物对宿主的排斥反应之外,病毒感染所起的作用也越来越引起人们的注意。由于不同的病因决定了不同的治疗方案和效果以及预后,因此有必要对病毒性出血性膀胱炎加深认识。本文将综述目前这一方面的有关进展。

再障患者外周血T细胞亚群CD_25^+及CD_4^+、CD_8^+双阳细胞的

再障患者外周血Ｔ细胞亚群ＣＤ２５＋及ＣＤ４＋、ＣＤ８＋双阳细胞的变化广州暨南大学血液病研究室卢育洪，汪明春由于存在不同的病理生理机制，再障的治疗方案和治疗效果不同。部分病人用抗胸腺球蛋白（ＡＴＧ）或环孢素Ａ（ＧｙＡ）后取得较好疗效。为了探讨...

ITP病人外周血中T细胞免疫抑制性受体Tim-3、LAG-3和BTLA的表达特点

免疫性血小板减少症（Immune thrombocyt-openia,ITP）是一种自身免疫性出血性疾病,T细胞免疫调控在ITP的发生发展中起重要作用。我们前期研究发现了ITP中存在异常的TCR亚家族克隆增殖和TCR信号通路。近几年系列研究发现ITP的T细胞免疫异常与一些介导免疫耐受的分子表达异常相关。

CML相关TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点

目的了解慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法采用RT-PCR扩增10例CML患者外周血的单个核细胞的TCR Vα29个亚家族基因，分析其TCR Vα亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果不同病人外周血中所能检测出的Vα亚家族数量不等（1～21个），以Vα3、Vα4、Vα8、Vα10和Vα14为常见，并在Vα1、Vα2、Vα3、Vα4、Vα5、Vα8、Vα10、Vα12、Vα14、Vα15、Vα16、Vα19、Vα21和Vα23中发现克隆性生长T细胞。结论CML病人外周血T细胞的TCR Vα亚家族选用呈现明显的选择性并出现克隆性T细胞，这可能与机体对白血病相关抗原产生特异性免疫有关，且克隆性增殖Vα亚家族分布以个体特异性为主。

正常人外周血和脐血中TCRVβ亚家族sjTRECs的检测情况

目的:检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法:采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1×103个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增。结果:在细胞数相同的情况下,各Vβ-Dβ1sjTRECs的检出率胸腺细胞最高,其次是脐血,正常人最低。当细胞数为2×105、5×104和1×104时,正常人Vβ2、Vβ4、Vβ7、Vβ11和Vβ19亚家族sjTRECs的检出率以及检出sjTRECs的亚家族数量均显著低于脐血。当细胞数为2×105和5×104时,正常人可检测到绝大多数Vβ亚家族的sjTRECs,随着细胞数的降低,部分Vβ亚家族的sjTRECs则检测不到,而少部分Vβ亚家族的sjTRECs则在1000个细胞时仍能检测到。结论:成功建立了半定量检测23个Vβ亚家族sjTRECs的检测方法;在2×105细胞中约可以检测到80%左右的Vβ亚家族初始T细胞,而在5×104细胞中约有半数的Vβ亚家族初始T细胞可检测到,提示不同Vβ亚家族初始T细胞的出现频率有所差异。

CML细胞抗原相关TCR Vα13/Vβ21和Vα18/Vβ21寡克隆T细胞及其CDR3序列特点

目的:分析慢性粒细胞白血病(CML)病人的克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点。方法:利用RT-PCR和基因扫描分析1例CML患者外周血单个核细胞中的TCR Vα和Vβ基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα和Vβ亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增殖特点,寡克隆的PCR产物再进行序列分析。结果:该病人外周血T细胞表达18个TCR Vα和12个TCR Vβ亚家族,其中Vα13、Vα18、Vβ1和Vβ21亚家族呈寡克隆性。CDR3序列分析获得3个TCR克隆基因序列,分别为Vα13NJα49、Vα18NJα50和Vβ21NDβNJβ2.7。结论:获得1例CML病人外周血克隆性增殖αβ+T细胞的3个TCR基因CDR3序列,提示病人可能存在与CML细胞抗原相关的Vα13/Vβ21或Vα18/Vβ21T细胞克隆。

PPP2R5C转录本在正常人和血液肿瘤病人中的分布情况

目的:建立分析不同PPP2R5C转录本检测方法,分析正常人和血液肿瘤病人中5种PPP2R5C基因转录本的表达特点。方法:根据PPP2R5C基因的结构特点,设计4对引物,利用RT-PCR方法分析9例正常人、7例T细胞-非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)、11例B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和8例急性髓细胞白血病(AML)病人外周血单个核细胞(PBMC)中PPP2R5C基因的表达情况。结果:所设计的4对引物,均可在样本中扩增到预期PCR产物,其中第1对引物可扩增两个不同大小PCR产物(包含12+13+14外显子的大片段及仅含12+14外显子的小片段),而另3对对引物所扩增的产物分别为10+11+12+12 a外显子,Ⅲ+2外显子和Ⅳ+2外显子的基因片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实。结果显示所有样本均表达全部PPP2R5C转录本。结论:初步建立区分不同PPP2R5C转录本的方法,各转录本在正常人和不同血液肿瘤病人中的分布情况基本一致。

CML病人外周血T细胞CD3基因表达模式变化

在我们前期研究发现慢性髓系白血病(CML)病人中T细胞受体信号传导分子CD3ζ基因表达下调的基础上,本研究进一步分析病人外周血中全部4种CD3γδεζ基因的表达模式特点,以深入了解病人的T细胞免疫中信号转导的变化。利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测17例初诊慢性期CML病人外周血单个核细胞中CD3γ、δ、ε和ζ链的表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算CD3分子各亚单位的相对mRNA表达量,以17例健康成人外周血作为对照。结果表明:CML中CD3γ、δ、ε基因表达水平分别为2.344%,0.515%和3.516%(中位数),与健康对照组比较(3.093%,0.853%和2.302%)并没有显著性差异(p=0.072,p=0.190,p=0.615),而CML中CD3ζ链基因的表达水平(0.395%)则明显低于健康对照组(1.538%)(p<0.001)。在CML中4种CD3分子表达水平模式依次为CD3ε>CD3γ>CD3δ>CD3ζ,而对照组中则为CD3γ>CD3ε>CD3ζ>CD3δ。结论:本研究首先提供了CML病人中CD3各基因表达模式情况,显示以CD3ζ为主的TCR信号分子的表达缺陷,4种CD3链分子的表达水平模式也发生变化。

T-ALL中两种新的TCRδ基因重排δRec_(151051)-Jδ1和δRec_(151298)-Jδ1

目的分析 T细胞急性淋巴细胞白血病 ( T- AL L )细胞中 TCRδ基因新的重排形式及其在正常人外周血和胸腺细胞中的分布情况。方法利用半巢式 PCR扩增 2例 T- AL L、10例正常人外周血和 7例正常人胸腺细胞 DNA的 TCRδ基因组片段 ,了解其重排情况 ,克隆性 PCR产物进一步进行核苷酸序列分析确定重排位置 ,并进一步经 RT- PCR检测其重排基因的表达情况。结果在 2例 T- AL L 病人白血病细胞发现两种新的 TCRδRec- Jδ1基因重排方式 ,称为 δRec1 51 0 51 - Jδ1和δRec1 51 2 98- Jδ1,该新的 TCRδRec基因重排同时见于大多数正常人外周血和胸腺。 RT- PCR显示该两种 TCRδRec- Jδ1基因重排的产物可见于 2例 T- AL L中 ,而正常人为阴性。结论本研究发现两种新的 TCRδRec1 51 0 51 - Jδ1和δRec1 51 2 98- Jδ1基因重排。该重排基因表达于 T- AL L中 ,而正常人不表达该重排基因 ,提示该重排形式可能与

MALT1-A20-NF-κB信号分子在MM中的表达特点

目的:了解多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中黏膜相关组织淋巴瘤异位基因1(MALT1)、A20与核转录因子κB(NF-κB)基因的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR和相对定量分析法检测20例MM患者(Ⅰ期7例,Ⅱ期3例,Ⅲ期10例)及21例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1、A20和NF-κB基因的表达情况。以β2微球蛋白基因(β2m)作为内参;采用相对定量公式:α^(-△Ct)×100%,分别计算MALT1、A20和NF-κB基因的表达水平。结果:MM患者PBMC中的MALT1和A20基因的表达水平较健康人都有明显的降低(P=0.000),而MM中NF-κB基因的表达水平较正常人有所升高,但无统计学差异(P>0.05)。在健康人组,MALT1和NF-κB的表达水平呈现正相关(P=0.001,r=0.666),而在MM组,MALT1、A20与NF-κB 3种基因均不存在明显相关性。同时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者MALT1基因的表达量较健康人明显降低(P<0.05),A20基因的表达量较健康人明显降低(P<0.01),而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者MALT1、A20和NF-κB之间的表达情况均无统计学差异。结论:当MALT1-A20介导的细胞免疫和炎症的信号通路发生异常改变时,可能与MM的发生发展有着密切关系。

正常脐血TCR Vα亚家族的分布和克隆性表达

目的:了解正常脐血中T细胞受体(TCR)Vα亚家族T细胞的分布和克隆性情况。方法:利用RT-PCR分别扩增10例正常脐血单个核细胞的TCR Vα29个亚家族基因,了解各Vα亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞的克隆性。9例健康成人外周血和T细胞株Jurkat作为对照。结果:正常脐血T细胞平均表达17.30±5.48个Vα亚家族,占全部家族的59.65%±18.89%,以Vα3,4,5,6,8,10,12,13,15,17,21和Vα25为多见,健康成人外周血T细胞则大部分表达Vα亚家族,Vα1,6和Vα13在脐血中的表达率高于健康成人对照组,而Vα14和Vα16的表达率则低于对照组。T细胞株Jur-kat则仅表达Vα1亚家族。基因扫描显示10例脐血中有2例在Vα24和Vα28 T细胞出现寡克隆性,其余均为多克隆性。结论:脐血中TCR Vα亚家族T细胞分布存在倾斜性,绝大部分TCR Vα亚家族T细胞均呈多克隆性,极个别可出现寡克隆性。

急性单核细胞白血病患者外周血和骨髓TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布特点

采用RT PCR扩增急性单核细胞白血病 (AML M5)患者外周血和骨髓单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因 ,分析其TCRVβ亚家族的利用情况。结果发现 ,不同标本中可检测到 1- 19Vβ亚家族的T细胞 ,不同患者外周血和骨髓中TCRVβ亚家族T细胞分布不尽相同。研究结果提供了AML