全反式维甲酸和1α,25二羟维生素D_3对肝癌细胞HepG2生长的协同抑制作用

背景与目的:全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)和1α,25二羟维生素D3[1alpha,25-dihydroxyvitaminD3,1,25(OH)2D3]已被证实能诱导肿瘤细胞分化,并用于造血系统肿瘤的治疗,但其对实体瘤的影响研究较少。本研究旨在通过单独和联合使用ATRA和1,25(OH)2D3,观察其对肝癌HepG2细胞生长和细胞周期的影响,并探讨其相关机制。方法:HepG2细胞经过不同浓度的ATRA和1,25(OH)2D3单独或联合用药处理后,用MTT法检测细胞抑制率、显微镜观察细胞形态的改变、流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化,同时分别用逆转录多聚酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)及流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测细胞周期负调节基因p21WAF1/CIP1和p27KIP1的mRNA及蛋白的表达情况。结果:单独使用ATRA或1,25(OH)2D3和联合用药的HepG2细胞生长均受到抑制,并呈浓度和时间依赖关系,其中联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05)。经10nmol/L1,25(OH)2D3及联合用药诱导72h的HepG2细胞G1期细胞占(54.27±3.69)%和(65.64±5.65)%,与对照组[(40.40±1.91)%]相比明显增高(P<0.05),而1μmol/LATRA组的细胞周期与对照组相比无明显差异(P>0.05);同时各实验组均有细胞凋亡产生(P<0.05),并以联合用药组最为显著。RT-PCR显示10nmol/L1,25(OH)2D3和联合用药处理HepG2细胞24h,p21WAF1/CIP1mRNA表达与对照组相比分别增高35%和56%;FCM显示两组细胞的P21WAF1/CIP1和P27KIP1的蛋白表达与对照组相比明显增高(P<0.05),联合用药组更为显著,但经1μmol/LATRA诱导的细胞P21WAF1/CIP1和P27KIP1的蛋白表达未见明显改变。结论:ATRA和1,25(OH)2D3均能够抑制HepG2细胞生长,诱导细胞凋亡,1,25(OH)2D3对细胞周期的影响作用是使细胞阻滞在G1期,其作用机制可能与其上调P21WAF1/CIP1和P27KIP1蛋白的表达有关,当与ATRA联合用药时,能够对HepG2细胞生长产生协同抑制作用。

埃兹蛋白:生物学特征及其在肿瘤转移中的作用

埃兹蛋白(ezrin)是埃兹蛋白、根蛋白和膜突蛋白(ezrin-radixin-moesin,ERM)家族成员之一,主要参与上皮细胞中细胞骨架与胞膜之间的连接,具有维持细胞形态和运动、连接黏附分子及调节信号转导等功能。近年来的研究发现,埃兹蛋白在肿瘤细胞中的表达异常,提示其在肿瘤的浸润、转移机制中发挥重要作用。

急性心肌梗死患者血清心肌酶测定结果与分析

急性心肌梗死（ＡＭＩ）是一种危及人类生命的严重心肌病，心脏酶学标志物的测定是诊断ＡＭＩ、监测ＡＭＩ进程和评价预后的重要手段之一。血清肌酸激酶（ＣＫ）及其同工酶（ＣＫ－ＭＢ）作为诊断ＡＭＩ和判定心梗面积的方法，已被临床公认，特别是ＣＫ－ＭＢ被称为诊断Ａ...

右美托咪定对食管癌患者围术期免疫功能的影响

目的探讨右美托咪定对食管癌根治手术患者围术期免疫功能的影响。方法择期行食管癌根治手术的患者40例,年龄40～65岁,体重50～80 kg,ASAⅠ～Ⅱ,采用随机数字表法,将其随机分为两组:对照组(C组)和右美托咪定组(D组),各20例。右美组麻醉诱导前右美托咪定0.5μg/kg 10 min静脉泵注,随后0.4μg/(kg/h)维持至关胸;对照组输入等量生理盐水静脉泵注。两组患者麻醉诱导均使用芬太尼3μg/kg、维库溴铵1 mg/kg、异丙酚2 mg/kg后气管插管,机械通气。术中持续吸入七氟烷维持AAI<40,间断追加芬太尼及肌松药。记录术中基本生命体征、手术前后血糖及CPR值。分别于麻醉前(T0)、手术结束(T1)、术后24 h(T2)、术后48 h(T3)抽取静脉血,测定血CD3、CD4、CD8、NK含量,计算CD4/CD8比值及血浆IL-2、IL-10浓度。结果两组患者术后血糖及CPR值均较术前明显升高(P<0.05),但右美组升高幅度明显低于对照组(P<0.05)。两组患者手术结束时CD3、CD4、CD4/CD8值均较术前明显下降(P<0.05),但右美组下降的幅度较对照组小(P<0.05);对照组在T2、T3时刻CD3、CD4、CD4/CD8仍较术前降低明显,与右美组同时点比较降低明显(P<0.05)。两组NK浓度在手术结束时均升高,右美组升高较对照组明显(P<0.05);右美组各时点IL-2、IL-10浓度无明显变化,对照组在T1、T2时点IL-2浓度降低,在T2、T3时点IL-10浓度升高,与右美组比较差异有显著意义(P<0.05)。结论全麻下行食管癌手术时,使用右美托咪定可以减轻手术创伤的应激反应,减轻术后免疫功能抑制。

单核细胞人类白细胞抗原DR表达的变化对卒中相关性感染的预测价值

目的探讨外周血单核细胞人类白细胞抗原DR(HLA-DR)表达的变化及其对神经重症监护病房(NICU)中,卒中相关性感染(SAI)的预测价值。方法连续入选发病24h内收入NICU的急性卒中患者53例,记录其入院第1、2和3天的NIHSS评分;以同期神经内科普通病房住院的头晕患者39例作为对照组。根据病后1周内是否发生感染,将卒中患者分为感染组24例和非感染组29例。采用流式细胞仪检测患者入院第1、2、4、6和14天单核细胞HLA-DR的表达;使用受试者工作特征(ROC)曲线,判断HLA-DR表达对SAI的预测价值。结果卒中组入院第1天HLA-DR表达即下降,之后逐渐上升,至第14天仍低于对照组(P<0.001)。卒中组中的感染组患者病后第4天HLA-DR降至最低,为(49±16)%,之后逐渐上升,第14天上升至(60±21)%,仍低于卒中组中的非感染组的(77±9)%(P=0.004);非感染组病后第2天HLA-DR亦降至最低(58±17)%,之后逐渐上升,第14天上升至(77±9)%。以第2天单核细胞HLA-DR表达低于57%为临界点,其对卒中SAI的发生有预测价值(敏感性83%,特异性83%,ROC曲线下面积为0.907,P<0.001)。卒中组入院第1天和第2天NIHSS评分与相同时间点HLA-DR表达均呈负相关(第1天:r=-0.442,P=0.001;第2天:r=-0.424,P=0.002)。结论卒中患者急性期单核细胞HLA-DR表达下降,HLA-DR表达的下降对SAI的发生有预测价值。

脑血管病患者血小板膜糖蛋白测定的临床意义

目的 探讨脑血管病患者血小板膜糖蛋白测定的临床意义。方法 采用流式细胞仪测定 5 4例脑血管病患者及 2 0名正常对照者外周血血小板活化分子标记物颗粒蛋白 (GMP) CD6 2 p,CD6 3;整合数 α b链 (CD4 1b) ;血小板膜糖蛋白 Gp Ib(CD4 2 b)。结果 脑梗死患者 CD6 2 p、CD6 3的阳性率明显高于健康对照组及脑出血组 (P<0 .0 1)。而脑梗死组发病 3天以内的 CD6 2 p、CD6 3阳性率较发病 2 0天以上者显著增高 (P<0 .0 1)。但后者仍高于健康对照组 (P<0 .0 1) ,CD4 1b、CD4 2 b在各组间无显著差异。结论 脑梗死患者的血小板活化程度明显增高 ,尤其是 CD6 2 p、CD6 3。

硒-甲基硒代半胱氨酸对肝癌HepG_2细胞的抑制作用

目的:研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methyl-selenocysteine,MSC)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,探讨其分子机制。方法:用不同浓度的MSC处理培养的HepG2细胞,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法和流式细胞仪分别检测其对细胞生长和细胞周期的影响,软琼脂生长试验观察瘤细胞恶性表型的变化,并检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA的表达和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性。结果:25μmol.L-1的MSC处理HepG2细胞24 h后,细胞生长受到明显抑制,出现S期阻滞和细胞凋亡,呈现浓度和时间依赖关系。软琼脂生长试验显示MSC抑制HepG2细胞在软琼脂上的生长能力。RT-PCR和Caspase-3的活性检测显示,25μmol.L-1MSC处理HepG2细胞244、8 h后,Cyclin D1 mRNA表达下降了38%和47%,而Caspase-3活性分别升高(39.61±6.65)%和(118.73±6.48)%;50μmol.L-1MSC处理HepG2细胞244、8 h后,Cyclin D1 mRNA表达下降了53%和82%,而Caspase-3活性分别升高(80.66±9.31)%和(152.67±7.95)%。结论:MSC抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡,瘤细胞的恶性程度减弱,这种表型变化与Cyclin D1的表达减弱和Caspase-3的活性增强有关。

去白细胞悬浮红细胞中残留白细胞定量检测新方法的建立

目的建立一种定量检测去白细胞悬浮红细胞中残留白细胞的新方法。方法使用ADAM-r白细胞计数系统对100份去白细胞悬浮红细胞中白细胞残留量进行检测,同时用流式细胞仪对上述100份标本进行平行检测;并选用3个浓度白细胞残留量的去白细胞悬浮红细胞对ADAM-r白细胞计数系统白细胞残留量检测进行重复性试验。结果 ADAM-r白细胞计数系统和流式细胞仪2种方法检测去白细胞悬浮红细胞中残留白细胞数的相关系数r=0.921,P<0.001,2种方法检测结果具有统计学关联;重复性试验中3个浓度白细胞残留量的去白细胞悬浮红细胞白细胞残留量检测CV值分别为19.1、4.1、3.8。结论可以使用ADAM-r白细胞计数系统定量检测去白细胞悬浮红细胞中的残留白细胞。

急性脑梗死患者外周血CD54、CD42b的变化与临床意义

目的:探讨急性脑梗死患者外周血CD54、CD42b表达的变化、临床意义以及两指标间是否存在相关性。方法:用流式细胞仪测定29例(正常)对照者与30例急性脑梗死患者发病72h内、7天及14天时外周血CD54、CD42b的表达。结果:与对照组相比,除CD42b的表达在急性脑梗死发病14天时接近对照组外,其余各值均有显著改变,CD54表达上调而CD42b表达下调。结论:CD54、CD42b之间无相关性,是相对独立的指标;它们可能参与了急性脑梗死的病理过程,对临床治疗有参考价值。

维生素C与宫颈癌HeLa细胞凋亡关系的研究

目的:探讨维生素C是否能诱导实体肿瘤宫颈癌HeLa细胞凋亡,及其作用机制。方法:采用不同浓度的维生素C处理HeLa细胞不同时段,显微镜下观察细胞的形态学变化;噻唑蓝(MTT)法和流式细胞分析法测定细胞生长抑制情况;检测不同浓度的维生素C[(0.25-4)mmol/L]处理细胞15min、30min、1h、2h、5h、8h、12h、24h不同时段后细胞内过氧化氢(H2O2)水平变化情况。结果:0.25mmol/L维生素C对HeLa细胞生长无明显影响,而0.5mmol/L维生素C处理HeLa细胞24h后细胞的生长受到抑制,表现出细胞凋亡的特征,MTT检测此时细胞的存活率只有59.94%,随着维生素C浓度的增加和作用时间的延长效果更加明显,与流式细胞分析的结果一致。用DCFH-DA标记细胞,检测细胞内H2O2水平,发现不同浓度维生素C处理HeLa细胞15min后,除0.25mmol/L组外,其他组的细胞内H2O2水平比对照组升高(4mmol/L组为对照组的162.46%),且呈现明显的剂量依赖性,持续到30min达到高峰(4mmol/L组为为对照组的174.55%),1h后检测细胞内H2O2水平已下降,以后各时间段检测到的细胞内H2O2水平均比对照组低。结论:低浓度维生素C(≤0.25mmol/L)单独处理实体肿瘤宫颈癌HeLa细胞不能抑制其生长,而较高浓度(0.5mmol/L)维生素C能诱导HeLa细胞凋亡,且与细胞内H2O2水平改变有密切关系。H2O2积累是维生素C诱导肿瘤细胞凋亡途径中的早期事件。

缺血性脑卒中与血浆纤维蛋白原及活化血小板的相关性研究

目的探讨缺血性脑卒中与血浆纤维蛋白原及活化血小板之间的关系。方法检测168例缺血性脑卒中患者(急性期和恢复期)及40名正常对照者血浆中纤维蛋白原浓度及活化血小板的分子标志物P-选择素(CD_(62)P)、溶酶体蛋白(CD_(63))的表达,并与神经功能缺损程度进行相关分析。结果(1)缺血性脑卒中患者急性期与恢复期纤维蛋白原浓度及CD_(62)P、CD_(63)表达显著高于对照组(P＜0．01);(2)缺血性脑卒中组急性期患者按牛津郡社区卒中计划(OCSP)分为4个亚型,纤维蛋白原浓度及CD_(62)P、CD_(63)表达在完全前循环梗死(TACI)组明显高于部分前循环梗死(PACI)组、后循环梗死(POCI)组及腔隙性梗死(LACl)组(P均＜0．01),PACI组及POCI组明显高于LACI组(P均＜0．01),而PACI组与POCI组间差别无显著性意义(P＞0．05);(3)纤维蛋白原浓度及CD_(62) P、CD_(63)表达与神经功能缺损程度评分呈显著正相关(r分别为0．781、0．843、0．817,P均＜0．01)。结论缺血性脑卒中患者急性期纤维蛋白原浓度及CD_(62) P、CD_(63)表达显著升高,纤维蛋白原、CD_(62) P、CD_(63)可能参与了缺血性脑损伤的病理过程,并间接反映病情程度;恢复期纤维蛋白原浓度及CD_(62) P、CD_(63)表达仍高于对照组,提示恢复期患者仍需积极治疗。

黄芩甙对心肌梗死后大鼠免疫功能的调节作用

目的 :通过测定心肌梗死后大鼠的T淋巴细胞亚群 ,观察心肌梗死后大鼠免疫功能的变化 ,同时观察黄芩甙对其免疫功能的调节作用。方法 :结扎大鼠左冠脉前降支 ,饲养 4个月后取血作淋巴细胞数及其亚群分析。结果 :结扎冠脉 4个月后 ,大鼠血液中CD3 升高 ,但CD4 /CD8值显著降低 ,表明心肌梗死后大鼠的免疫功能紊乱 ,细胞免疫功能明显降低。给予黄芩甙后 (灌胃 ,40mg·kg-1·d-1) ,其血液中CD3、CD4 /CD8均接近正常。结论

血清锌铜含量测定对妇科肿瘤诊断价值探讨

目的探讨血清锌（Ｚｎ）、铜（Ｃｕ）含量变化在妇科肿瘤诊断上的价值。方法采用空气－乙炔火焰原子吸收分光光度法测定经组织学确诊的６３例妇科良、恶性肿瘤患者及４５例健康人血清锌、铜含量。结果卵巢癌患者血清锌含量明显降低，血清铜含量升高，与对照组比较均有显著性差异（Ｐ分别＜０．０１和０．００１）。良性肿瘤组血清锌、铜含量与对照组比较，差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。结论血清锌、铜含量测定及Ｃｕ／Ｚｎ比值可作为妇科良、恶性肿瘤鉴别诊断或化疗疗效观察及预后判断的一项参考指标。

胃癌患者外周血骨桥蛋白检测的临床意义

目的:探讨外周血骨桥蛋白(osteopontin,OPN)作为胃癌肿瘤标志物检测的临床意义。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫分析技术(RIA)检测63例胃癌患者手术前后外周血OPN和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的质量浓度,对照组为40例正常健康志愿者。结果:胃癌患者外周血OPN和CEA检测的敏感性分别为69.8%和57.1%,特异性分别为92.5%和87.5%,联合检测的敏感性为77.8%。OPN和CEA的质量浓度与胃癌的临床分期、淋巴结和器官转移有关,与胃癌的组织学分型及大小无关。治疗前后两种标志物的质量浓度具有显著差异。结论:OPN是一种较为理想的胃癌肿瘤标志物,与CEA联合检测能提高胃癌诊断的敏感性。

大肠癌患者外周血骨桥蛋白检测意义

[目的]探讨外周血骨桥蛋白(OPN)作为大肠癌肿瘤标志物检测的临床意义。[方法]应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫分析技术(RIA)检测40例健康正常志愿者和52例大肠癌患者手术前后外周血OPN和CEA的浓度。[结果]大肠癌患者外周血OPN和CEA检测的敏感性为73.08%和55.77%,特异性为92.50%和87.50%,联合检测的敏感性为76.92%。治疗后两种标志物的浓度均显著性低于治疗前的浓度(P<0.01)。OPN和CEA水平与大肠癌的临床分期、淋巴结转移和远处转移有关,与组织学分型无关。OPN与肿瘤大小有相关性。[结论]OPN是大肠癌的一种较为理想的肿瘤标志物,与CEA联合检测能提高大肠癌诊断的敏感性。

流式细胞测量仪在临床和科研中应用

流式细胞测量仪在临床和科研中应用孙载阳尹琰卢航青南京铁道医学院现代医学实验中心分析细胞室２１０００９我院近期购置美国Ｂｅｃｔｉｏｎ－Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司在１９９５年推出的ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ新型流式细胞仪，并已正式应用。流式细胞测量仪（Ｆｌｏｗｃ...

乙型病毒性肝炎T淋巴细胞亚群的测定及其意义

目的 :研究乙型病毒性肝炎患者在病毒复制状态下及重型肝炎患者的免疫功能紊乱情况。方法 :应用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群 ,ELISA法检测HBV m。结果 :乙型病毒性肝炎患者CD4+/CD8+值较正常对照组下降。在乙型肝炎病毒复制组为 0 .97± 0 .42 ,在重型肝炎组为 1 .0 9± 0 .2 8。结论 :乙型病毒性肝炎为免疫损伤所致 ,在重型肝炎及乙型肝炎病毒复制状态下存在严重免疫功能紊乱。

正电荷载基因纳米微泡的超声成像及靶向杀伤肝癌细胞的研究

目的:制备载基因纳米微泡并探讨其体内外超声成像和靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法:采用薄膜水化-机械震荡法制备磷脂为壳膜、六氟化硫(suphurhexafluoride,SF6)气体为核心的正电荷纳米微泡,再偶联甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)启动子的单纯疱疹病毒胸苷激酶(simplex herpes virus thymidine kinase,HSV-TK)质粒DNA制备载基因纳泡。对其形态、平均粒径、zeta电位、DNA结合力、基因转染进行检测;然后对其体内外超声成像特性进行考察;最后采用CCK-8和流式细胞(FCM)分析检测载基因纳泡联合超声靶向微泡击破(ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD)技术对BEL-7402和SMCC-7721细胞的杀伤作用。结果:电镜显示纳泡呈圆球形壳核结构;平均水合粒径约为667 nm,带正电;琼脂糖凝胶电泳显示质量比≥5时,纳泡可有效结合质粒DNA;体内外超声显示载基因纳泡具有良好的超声对比增强特性;RT-PCR检测显示纳泡联合UTMD能使HSV-TK在AFP阳性肝癌细胞内表达。CCK-8和FCM分析显示载基因纳泡+UTMD组能显著抑制BEL-7402细胞的增殖和诱导其凋亡,与其他组相比差异具有显著性(P <0.05)。结论:具有良好超声成像功能的载基因纳泡能够高效靶向杀伤AFP阳性的肝癌细胞。

急性重症脑卒中患者单核细胞HLA-DR的表达变化与病情及感染的关系

目的探讨急性重症脑卒中患者,外周血单核细胞人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)的表达变化,及其与病情和感染并发症之间的关系。方法前瞻性研究连续入选的发病后<24h入住神经重症监护病房(NICU)的急性脑卒中患者,观察<2周的感染并发症及病情情况,采用流式细胞仪检测不同时间点外周血单核细胞HLA-DR表达;并记录不同时间点NIHSS、APACHEⅡ和GCS评分;设立同期住神经内科普通病房中的头晕患者(均经头颅MRI排除急性脑卒中)作为对照组。结果入选急性脑卒中患者53例,对照组患者39例,在观察的第1、2、4、6、14天,单核细胞HLA-DR表达,卒中组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),缺血性卒中组和出血性卒中组之间差异无统计学意义,感染组和非感染组在第1、2天差异无统计学意义,但第4、6、14天差异有统计学意义(P<0.01);7例死亡患者HLA-DR表达进行性下降,第2、4天HLA-DR表达值与相应时间的NIHSS评分呈显著负相关,差异有统计学意义(P<0.01);而HLA-DR表达值与相应时间的GCS、APACHEⅡ评分无明确相关性。结论急性重症脑卒中患者发病后,早期即存在单核细胞免疫功能抑制,其程度与病情严重程度相关,单核细胞免疫抑制对卒中后感染的发生有促发作用,单核细胞免疫功能持续下降的患者预后不佳。

急性重症脑卒中患者单核细胞免疫抑制与炎性标志物的相关性

目的探讨急性重症脑卒中患者单核细胞免疫抑制与C-反应蛋白（CRP）和纤维蛋白原（Fg）的关系，了解卒中患者免疫抑制的可能机制。方法研究连续入选的24h内入住神经重症监护病房（NICU）的急性脑卒中患者（53例），以同期神经内科普通病房住院的头晕患者（均经头颅MRI排除急性脑卒中）作为对照组（39例）。检测脑卒中患者入院后第1、2、4、6和14天的单核细胞人类白细胞抗原-DR（HLA-DR）表达水平和卒中组、对照组人院后第2天CRP和Fg的浓度。采用GraphPad PRISM4．0 demo软件进行因素之间的关联分析。结果与对照组比较，卒中组CRP、融的水平增高，差异有统计学意义（P〈0．05）。卒中组CRP和Fg与不同时间点的单核细胞HLA—DR表达水平有不同程度的负相关性。CRP与入院后第2天HLA-DR表达负相关性最明显（r=-0．419，P=0．001）。Fg与入院后第4天HLA-DR表达负相关性最明显（r=-0．434，P=0．001）。结论急性重症脑卒中患者单核细胞免疫抑制机制与卒中后炎症反应有关。