甘氨酸甜菜碱和分子伴侣dnaK在嗜盐四联球菌耐盐机制中的作用

能耐高盐的嗜盐四联球菌CICC 10469是从传统的酱料中分离得到。为研究耐盐特性与相容性溶质积累和分子伴侣dnaK特性的关系,使用核磁共振来检测其主要的相容性溶质。不同盐浓度对耐盐的嗜盐四联球菌和不耐盐的乳酸乳球菌MG1363的生长的影响通过测量OD600来获得。盐浓度对分子伴侣dnaK表达的影响通过实时荧光定量RT-PCR来检测。相容性溶质和可溶性蛋白随盐浓度的变化通过HPLC和酶标仪来检测。结果显示嗜盐四联球菌以甘氨酸甜菜碱作为主要的相容性溶质。适合的盐浓度能够促进菌体的生长,在一定盐浓度范围内,甘氨酸甜菜碱,可溶性蛋白和分子伴侣dnaK随盐浓度的增加而升高,然而超过一定盐浓度范围后,表达量将会减少。这表明细菌能够根据外部环境做出适当的调整以维持细胞的正常生理功能。而乳酸乳球菌MG1363很少有相容性溶质和分子伴侣dnaK以耐受外部盐浓度。这表明相容性溶质和分子伴侣dnak在嗜盐四联球菌生长中起重要的作用。总之,中度嗜盐菌的主要耐盐机制是通过快速合成和释放甘氨酸甜菜碱及分子伴侣dnaK高活性表达来完成。

样品中未知物质分离鉴定方法的研究

文中主要以鉴定嗜盐四联球菌主要的渗透保护物为例来说明研究样品中未知物质分离、鉴定的方法。首先通过查阅文献预测出待检测样品中可能含有的物质,经过薄层层析(TLC)进行初步的分离鉴定,排除部分物质;对可能存在的物质用高效液相色谱(HPLC)进行再次验证,同时检验样品的纯度,看是否可以用于进一步的分析;据此,可以初步判断出样品中可能含有物质的种类;再采用核磁共振(或质谱分析)等方法最终确定样品中的主要成分。试验通过这3步鉴定,最终确定了嗜盐四联球菌主要的渗透保护物质为甘氨酸甜菜碱,由此可以看出"查阅文献,找出可能存在的物质——TLC——HPLC——核磁共振(或质谱检测等)"这个流程对于确定样品中未知物质的种类是有效的。