毛细管电泳法检测蜂蜜中残留的抗生素

用毛细管电泳法对 5种常用的抗生素四环素 (TC) ,土霉素 (OTC) ,多西环素 (DOC) ,金霉素 (CTC)和氯霉素 (CP)进行了分离。研究了电泳缓冲液的 pH、不同有机试剂添加剂、温度等因素对抗生素分离的影响。实验结果表明 ,体积分数为 4%的N 甲基吗啡啉的加入可大大改善分离效果。在各自相应的浓度范围内 ,峰面积和样品浓度之间呈现良好的线性关系 ,重现性好。氯霉素的检测极限为 10 μg/L ,四环素、土霉素、多西环素为 2 0 μg/L ,金霉素为 40 μg/L(信噪比 >5 )。该方法成功地应用于蜂蜜中残留抗生素的测定 ,具有操作简单、快速方便、灵敏度及自动化程度高、重现性好等优点 ,是对含抗生素类物质进行痕量分析的好方法。

蕲蛇蛇毒中一个新的类凝血酶的分离纯化与表征

使用DEAE SephadexA 5 0、POROS 5 0HS及POROS 2 0PI等色谱分离技术 ,从蕲蛇粗毒中分离提纯得到 1个具有凝血活力的组分 ,经SDS PAGE和PAGE检测均为一条带 ,非还原条件下相对分子质量 2 4 .3kDa,还原条件下相对分子质量 33.0kDa ;其凝血活力为 91 .0NIHu mg.该组分不具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,肝素不影响该组分的凝血活性 ,EDTA部分抑制其活性 ,苯甲基磺酰氟 (PMSF)则会产生不可逆抑制作用 .该酶N 末端氨基酸序列为VIGGNGXDINEHRFLVAFF 。

鸡氨肽酶H在大肠杆菌中的表达、纯化与部分酶学性质分析

氨肽酶H(Aminopeptidase H,APH))是生物组织内一种常见的氨基内肽酶,但因为天然材料中含量很低,基本无法深入研究其催化机理、功能与结构的关系及其在生物体内的确切功能。从鸡肝组织克隆了APH的全基因序列,并把该序列亚克隆到载体pET22b(+)上,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),构建了APH的表达菌株。该菌株经IPTG诱导,在SDS-PAGE上明显出现一条与天然APH理论分子量一致的新增蛋白带,该条带的浓度随着表达时间的延长逐渐加深;6h基本达到平衡,此时重组蛋白占总蛋白的16.7%,表达水平高达94.7mg/L。对表达产物进行了活性检测、纯化和酶学性质分析,发现重组蛋白在亚基构成,热稳定性,最适pH等方面与天然APH基本相同,据此可以确认表达产物确实是APH,发酵液总活力达到1636u/L。这些结果为APH的催化机理及其在生物体内的功能的阐明奠定了重要的物质基础。

抗生素的毛细管电泳分离

通过对电极缓冲体系、pH值、乙腈添加浓度、N -甲基吗啡啉添加浓度及温度、电压的优化选择 ,用毛细管电泳方法分离土霉素、金霉素、多西环素、四环素、氯霉素 5种抗生素 .应用胺类修饰剂N -甲基吗啡啉作为添加剂 ,提高了抗生素的分离效果 .实验结果表明 ,此方法操作简单快速、成本低、定量准确 (R <0 .9917)、灵敏度高 ,检测极限分别为 0 .0 118,0 .0 2 36 ,0 .0 118,0 .0 118,0 .0 0 0 4ng .

hCuZn-SOD基因的克隆、表达及其产物的初步纯化和表征

为获得hCuZn-SOD基因,根据GenBank中人铜锌超氧化物歧化酶(hCuZn-SOD)基因碱基序列,设计扩增引物,用RT-PCR方法从人的肝细胞中克隆出hCuZn-SODcDNA序列,并将它插入pUCm-T载体中,经过DNA序列测定证实,该片段序列的一个碱基发生突变(与报道基因相比),引起其编码第116个氨基酸由G变为D.采用定向克隆的方法将hCu Zn-SOD的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-2T上,构建表达质粒pGEX-SOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3).SDS-PAGE分析证实,经IPTG诱导,融合蛋白GST-SOD获得高效表达.破碎菌体、上清经谷胱甘肽亲和层析初步纯化后,得到纯度达90%的目的蛋白.活性实验表明,GST-SOD具有生物活性.

大黄鱼生长激素基因的克隆与表达

采用RT-PCR方法从大黄鱼脑垂体总RNA中克隆编码生长激素基因序列,并与数据库中鱼类生长激素基因进行比较.扩增获得的生长激素基因定向克隆到表达质粒pET-22b(+),并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达.表达的蛋白为可溶性蛋白,表达量占细胞总蛋白的5%.

小鼠酪氨酸酶的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用逆转录-聚合酶链式反应(RT -PCR)方法,从小鼠黑色素瘤总RNA中扩增得到小鼠酪氨酸酶的cDNA .该基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET - 2 2b(+)中,构建表达质粒pET -TYR并转化大肠杆菌Rosetta (DE3) .SDS -PAGE及蛋白质序列测定表明,经0 .8mmol/L异丙基硫代- β-D -半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达重组的小鼠酪氨酸酶,表达量约占菌体总蛋白质的2 5 % 。