楮实子水提物对APP转染的SH-SY5Y细胞的影响

目的研究楮实子水提物对转染了APP基因的SH-SY5Y细胞的保护作用,并分析其神经保护作用的机制。方法在体外培养SH-SY5Y细胞,进行APP基因转染构建阿尔茨海默病细胞模型。给予不同浓度楮实子水提物后,采用CCK-8法检测细胞的活力;试剂盒法检测细胞上清液中LDH的释放率;qRT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达;免疫荧光化学法、Western blot法检测β淀粉样蛋白沉积;免疫荧光细胞化学法检测磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与模型组比较,楮实子水提物能够提高细胞活力,减少LDH的释放,下调Bax/Bcl-2比值,抑制Aβ的生成,促进CREB蛋白磷酸化并增加其下游蛋白BDNF的表达(P<0.05,P<0.01)。结论楮实子水提物可以改善APP转染的SH-SY5Y细胞神经作用,其机制可能与激活CREB/BDNF信号通路,减少Aβ生成和抗凋亡有关。

二苯乙烯苷调控CREB/BDNF信号通路对Aβ25-35损伤的小鼠神经元突触的保护作用

目的:研究中药何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)损伤的小鼠海马神经元的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:小鼠海马神经元细胞分离自新生48 h内胎鼠大脑海马,培养9 d待神经元成熟后,采用免疫荧光法对其进行鉴定。将培养成熟的神经元细胞分为正常组、模型组(Aβ25-35孵育造模)和TSG组(Aβ25-35孵育造模后,分别加入TSG 6.25,12.5,25,50,100μmol·L-1)。细胞增殖毒性检测(CCK-8)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞活性,免疫荧光法检测突触素-1(SYN-1)蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测突触后膜致密蛋白-95(PSD-95)和突触体素(SYP)的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA的表达,免疫荧光法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CREB,磷酸化CREB(p-CREB)和BDNF蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低,LDH释放量显著增高(P<0.01),SYN-1,PSD-95和SYP的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达明显下调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,不同浓度TSG均可提高细胞存活率,降低LDH释放量(P<0.05,P<0.01),TSG对Aβ25-35造模的小鼠海马神经元细胞的最适治疗浓度为25μmol·L-1;25μmol·L-1TSG能够显著增强SYN-1的表达量(P<0.01),明显提高PSD-95和SYP的含量(P<0.05);上调p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),但对CREB mRNA及蛋白的表达无显著影响。结论:TSG对Aβ25-35损伤的小鼠海马神经元突触具有保护作用,其机制可能与促进CREB的磷酸化使p-CREB表达增多,并促进神经营养因子BDNF的释放有关。