高氧调节早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞CCAAT增强子结合蛋白α和肺泡表面活性蛋白的表达

目的探讨高氧状态下早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC2)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)和肺泡表面活性蛋白A(SP-A)、SP-B、SP-C、SP-D的表达及两者相关性。方法原代培养早产大鼠AEC2,利用950 mL/LO_2建立高氧细胞损伤模型,随机分为空气对照组和高氧实验组。分别于空气及高氧暴露后24、48、72 h,收获各组细胞。采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化,实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测C/EBPα和SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA及蛋白水平;CCK-8法检测细胞增殖。结果随培养时间延长,空气组细胞C/EBPαmRNA及蛋白表达逐渐降低,SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖逐渐升高。高氧组细胞C/EBPα、SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖呈先递增后递减趋势。与空气组相比,高氧组细胞C/EBPα、SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖在高氧48 h明显增加。高氧组细胞C/EBPα蛋白水平与SP-A、SP-B、SP-C、SP-D蛋白水平及AEC2增殖呈正相关(r=0.96、0.98、0.92、0.97、0.90)。结论高氧暴露早期,C/EBPα可促进肺泡表面活性蛋白分泌,参与机体保护性调节作用,但随高氧暴露时间延长,丧失代偿保护作用。

CCAAT增强子结合蛋白A在大鼠肺发育过程中的动态表达及意义

目的通过分析CCAAT增强子结合蛋白A(C/EBPα)在大鼠肺发育中的动态表达及其与肺组织细胞分化成熟的关系,探讨C/EBPα在肺发育过程中的作用。方法根据大鼠肺发育分期,选取孕15.5 d(腺体末期)、17.5 d(小管期)和19.5 d(囊泡早期)肺组织和出生12 h(囊泡中期,肺发育膨胀期)、4 d(囊泡末期,肺发育膨胀期)、7 d(肺泡期,肺泡化阶段)和14 d(肺泡期,平衡生长阶段)肺组织。采用HE染色观察肺形态结构,Western blot法检测C/EBPα和表面活性物质蛋白(SP)-A、SP-B、SP-C、SP-D表达,磷脂酰胆碱(PC)检测试剂盒检测PC分泌情况,过碘酸-雪夫氏染色法(PAS)检测肺组织糖原含量。结果1.C/EBPα及SP-A于孕15.5 d开始表达(0.36±0.02、0.01±0.01),SP-B、SP-C和SP-D于孕17.5 d开始表达(0.33±0.06、0.01±0.01、0.11±0.08),以后随肺发育均逐渐升高,C/EBPα、SP-A、SP-C于出生12 h达高峰(3.48±0.05、3.24±0.19、1.26±0.21),SP-D于出生4 d达高峰(1.48±0.10),以后逐渐下降,SP-B出生后仍持续升高,C/EBPα及SPs于出生14 d表达均趋于平稳。C/EBPα表达在胎肺期(孕15.5 d、17.5 d、19.5 d)及出生12 h与SP表达呈正相关(r=0.999、0.991、0.982、0.951,均P<0.05)。2.腺体末期PC含量少[(60.50±1.30) μg/g],之后随肺发育,PC分泌逐渐增高,其含量与C/EBPα表达无明显相关性(均P>0.05)。3.糖原在孕15.5 d表达较高(585.50±2.20),随肺发育糖原含量逐渐下降,孕17.5 d及19.5 d降低幅度尤为显著,出生7 d维持在相对稳定水平,C/EBPα与糖原含量在胎肺期呈显著负相关(r=-1.000,P<0.01)。结论C/EBPα在大鼠肺发育关键期起重要作用,C/EBPα可能通过SPs和PC合成分泌,促进肺分化成熟。