MicroRNA-429靶向抑制occludin及对糖尿病小鼠肠上皮屏障功能的影响

目的:探讨microRNA-429(miR-429)在体内对糖尿病(DM)小鼠肠上皮细胞(IECs)内闭合蛋白(occludin,Ocln)表达及肠上皮屏障功能的影响。方法:构建糖尿病小鼠模型(腹腔内注射链脲佐菌素);通过尾静脉注射antagomiRNA-429抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达;real-time PCR检测miR-429和Ocln mRNA的表达变化;Western blotting及免疫组化检测Ocln蛋白表达变化;气相色谱法检测小鼠尿液乳果糖/甘露醇比值;显色基质鲎试剂法检测小鼠血浆LPS浓度。结果:尾静脉注射antagomiRNA-429能显著抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达,注射后6 d恢复至正常小鼠IECs表达水平。抑制DM小鼠IECs内miR-429表达后,Ocln表达显著提高(P<0.05),小鼠尿液乳果糖/甘露醇比值及血浆LPS水平均明显下降(P<0.05)。结论:AntagomiRNA-429能有效抑制DM小鼠IECs内miR-429的表达,进而使小鼠IECs内Ocln的表达升高,从而使肠上皮屏障功能部分恢复。

合并2型糖尿病的结直肠癌患者的临床特点及其意义

目的探讨合并2型糖尿病的结直肠癌患者的临床特点及其潜在的临床意义。方法收集479例初次入院的结直肠癌患者的临床资料,根据有无合并2型糖尿病,将结直肠癌患者分为合并2型糖尿病的结直肠癌组(n=61)和无合并2型糖尿病的结直肠癌组(n=418),比较2组在年龄、性别、肿瘤浸润深度、癌胚抗原阳性率、凝血功能及5年生存率等方面的差异。结果合并2型糖尿病的结直肠癌组较无合并2型糖尿病的结直肠癌组年龄大,肿瘤T4比例更高,癌胚抗原阳性率更高,血浆凝血酶原时间及活化的部分凝血活酶时间更短,5年生存率更低(P﹤0.05)。结论合并2型糖尿病的结直肠癌患者发病年龄更年长,容易并发血栓性疾病,肿瘤浸润程度更深,预后更差。

Wip1基因沉默对结肠癌细胞化疗敏感性的影响

目的:观察靶向Wip1基因的特异性siRNA序列对结肠癌细胞Wip1基因的抑制效应,探讨Wip1基因沉默对结肠癌细胞化疗敏感性的影响。方法:将Wip1-811 siRNA转染入Wip1高表达的RKO结肠癌细胞株,采用real-time PCR法检测Wip1 mRNA的表达,采用Western blotting方法检测Wip1蛋白表达,采用MTS方法检测结肠癌细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果:Wip1-811 siRNA明显抑制Wip1的表达。抑制Wip1基因表达后,转染组RKO结肠癌细胞对抗肿瘤药物的敏感性增加,5-氟尿嘧啶处理组RKO结肠癌细胞活力由(89.4±6.6)%降至(74.7±3.9)%(P<0.05),奥沙利铂处理组细胞活力由(77.9±2.4)%降至(66.7±2.9)%(P<0.05)。转染Wip1-811 siRNA后,5-氟尿嘧啶处理组细胞凋亡比例由(7.7±0.5)%升至(12.3±3.2)%(P<0.05);奥沙利铂处理组细胞凋亡比例由(14.7±2.1)%升至(34.0±2.1)%(P<0.05)。结论:沉默Wip1基因表达能增强结肠癌细胞的化疗敏感性。

1型糖尿病小鼠肠道潘氏细胞的杀菌功能改变

目的探讨1型糖尿病小鼠肠道潘氏细胞杀菌功能的改变。方法采用腹腔注射链脲菌素的方法诱导1型糖尿病小鼠模型,8周龄小鼠分为正常对照组(Control组)、糖尿病组(UDM组)和糖尿病胰岛素治疗组(IDM组)。采用菌落培养法评估肠道细菌增殖情况及对外来大肠埃希菌的杀灭能力。利用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测潘氏细胞内溶菌酶的表达情况。结果与Control组比较,UDM组回肠末端有氧细菌总量增加(UDM组:5.66±0.80 lg CFUs/g,Control组:4.70±0.81 lg CFUs/g,P<0.05),厌氧细菌总量也增加(UDM组:6.71±1.37 lg CFUs/g,Control组:5.25±1.16 lg CFUs/g,P<0.05);UDM组肠上皮每个隐窝内潘氏细胞数目增多(UDM组:5.75±1.00个,Control组:4.46±0.96个,P<0.05),但溶菌酶的蛋白质表达下降。IDM组与Control组比较,潘氏细胞数目、溶菌酶的蛋白质表达、肠道的细菌总量比较差异无统计学意义。结论 1型糖尿病小鼠肠道防御能力下降,与潘氏细胞分泌溶菌酶不足有关,而胰岛素替代治疗可以恢复潘氏细胞溶菌酶的表达及肠道的防御能力。

胰岛素受体亚型改变及相关通路活化在糖尿病小鼠肠上皮细胞过度增殖中的作用

目的:探讨胰岛素受体亚型改变及其相关下游通路活化情况在糖尿病小鼠肠上皮细胞异常增殖中的作用。方法:用腹腔注射链脲霉素的方法制作糖尿病小鼠模型,采用增殖细胞核抗原标记法比较糖尿病小鼠及对照组小鼠肠上皮细胞的增殖情况。利用RT-PCR法测定胰岛素受体亚型表达比例在2组中的差异。采用realtime PCR及Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测2组之间胰岛素受体相关通路各分子MEK1/2、ERK1/2、PI3K以及Akt的表达情况。结果:糖尿病组小鼠的小肠上皮细胞增殖指数显著升高(P<0.05),且细胞中胰岛素受体亚型IR-A/IR-B的比值也明显升高(P<0.05)。糖尿病小鼠肠上皮细胞中MEK1、MEK2和ERK1/2的mRNA水平及磷酸化蛋白水平均高于对照组(P<0.05)。结论:糖尿病小鼠肠上皮细胞过度增殖可能与其中胰岛素受体亚型IR-A/IR-B的比值增高及其相关MEK/ERK通路的激活有关。