三叶因子家族研究进展

三叶因子家族(trefoil factor family,TFF)是一群主要由胃肠道黏液细胞分泌的小分子多肽.其共同特征为均含一特殊的 P 结构域,由38-39个氨基酸通过6个半胱氨酸残基经由3个二硫键相互联接,使整个肽链扭曲、折叠形成三叶状结构,由此命名.这种结构的稳定性使三叶因子家族具有明显的抗蛋白酶水解、酸消化及耐热特性,因而能在消化道复杂的环境中保持生物活性.目前在哺乳动物体内发现的有 pS2/TFF1、SP/TFF2和 ITF/TFF3三种,他们具有黏膜保护与修复、肿瘤抑制、信号传导、调节细胞凋亡等功能.

NSAIDs相关性胃肠病

长期以来,非甾体类抗炎药(nonsteroidalanti-inflam-matorydrugs,NSAIDs)被广泛应用于治疗各种风湿性疾病及心脑血管疾病,但由于其可引起多系统并发症,尤其是胃肠黏膜损伤作用,即NSAIDs相关性胃肠病,表现为消化吸收功能不良、腹胀、腹痛、溃疡、出血、穿孔、贫血、低蛋白血症等,而限制了其进一步广泛使用;NSAIDs相关性胃肠病发病机制主要有环氧化酶(COX)抑制理论、NSAIDs对黏膜的直接毒性作用、LOX活化理论等;我们就近年来NSAIDs相关性胃肠病发病机制及防治方面的情况作一简要综述.

三叶因子基因表达调控相关因子

三叶因子在黏膜修复与重建及肿瘤的发生、发展过程中发挥了重要的作用,对其结构与功能及基因表达调控的研究一直是近20余年来黏膜保护及肿瘤研究领域的热点．目前的研究发现,许多转录因子如C／EBPβ、GATA家族、NF-κB等,调节蛋白质如雌激素、EGF及TGFα等,及其他化学物质如NSAIDs、TPA、硫氨素等均参与了三叶因子基因的表达调控过程．通过调节这些相关因子,我们可以充分发挥三叶因子生物学作用中的有利方面,避免其不利方面,为临床应用创造条件．

人肠三叶因子真核载体的构建与表达

目的构建人肠三叶因子(hITF/hTFF3)的真核载体并在真核细胞中表达。方法从人结肠粘膜提取总RNA,逆转录多聚酶反应制备总cDNA,PCR扩增hTFF3基因,TA克隆至pGEMT载体中,测序鉴定后将hTFF3基因重组到真核表达载体pCMV5-myc中,转染真核细胞293-T,裂解细胞后分别采用鼠抗人c-myc抗体和鼠抗人TFF3抗体行Western-blot了解hTFF3表达情况。结果从人结肠粘膜成功克隆了hTFF3基因并经测序验证,构建了pCMV5-myc-hTFF3真核表达载体,转染细胞后行western-blot提示hTFF3可在293-T细胞中表达。结论成功构建pCMV5-myc-hTFF3重组真核载体并在293-T细胞中表达hTFF3蛋白,为进一步研究hTFF3的功能、作用机制及相互作用蛋白奠定了基础。

人肠三叶因子酵母双杂交载体的构建及其自激活作用鉴定

目的:构建人肠三叶因子(hITF/hTFF3)酵母双杂交诱饵载体并鉴定其自激活作用.方法:从人结肠黏膜提取总RNA.RT-PCR制备总cDNA,PCR扩增hTFF3基因.TA克隆至pGEMT载体并测序鉴定.经NcoⅠ/XhoⅠ双酶切,连接到pENTR11质粒构建入门克隆.LR反应获得酵母双杂交诱饵载体pDEST32一hTFF3,测序正确后与酵母双杂交空猎物载体pDEST22共同转化Mav203酵母细胞,SD/-Leu/- Trp固体培养基上生长.挑取单克隆划线接种到分别含有不同浓度氨基三唑(3AT)的SD/- Leu/-Trp/-His培养基上,观察重组诱饵载体的自激活情况.结果:从人正常结肠黏膜成功克隆了hTFF3基因,构建了pDEST32-hTFF3酵母表达质粒.转化pDEST32-hTFF3和pDEST22的Mav203酵母细胞可在3AT浓度为30 mmol/L以下的SD/- Leu/-Trp/-His培养基上生长,在3AT浓度为30 mmol/L以上的培养基上则未见酵母细胞生长结论:所构建的pDEST32-hTFF3可作为酵母双杂交的诱饵质粒.

TFF1在正常及损伤胃黏膜中的表达改变

目的:通过观察 TFF1在人消化性溃疡及阿司匹林诱导的兔胃溃疡中的表达,探讨 TFF1在胃黏膜保护中的作用.方法:采用免疫组化方法测定正常及消化性溃疡患者、正常及阿司匹林诱导的兔胃溃疡模型中胃黏膜 TFF1的表达,通过图像分析软件分析其阳性信号平均光密度值了解其表达情况.结果:(1)消化性溃疡患者胃黏膜中 TFF1的表达高于正常胃黏膜(P<0.01);其中,多发/复合性溃疡表达高于单发消化性溃疡(P<0.05).(2)阿司匹林诱导的兔胃溃疡周围黏膜TFF1表达高于正常兔胃黏膜(P<0.05).结论:TFF1于在人消化性溃疡及药物诱导的兔胃溃疡中的表达较正常升高,提示其在胃黏膜保护及上皮重建机制中具有重要的作用.

三叶因子1表达与胃粘膜损伤及胃癌的关系

目的测定三叶因子1在正常及病理条件下胃粘膜中的表达情况,探讨TFF1在胃粘膜损伤修复及胃癌抑制中的作用及意义。方法应用免疫组化方法测定正常及不同病理条件下胃粘膜中TFF1的表达情况,通过图像分析软件分析其阳性信号平均光密度值了解其表达情况。结果胃炎、胃溃疡及十二指肠球部溃疡患者TFF1表达明显高于正常胃粘膜;多发/复合性溃疡患者TFF1表达高于单发的消化性溃疡患者;胃溃疡患者与十二指肠球部溃疡患者、胃炎患者与单一消化性溃疡患者表达相比均无统计学差异;胃腺癌患者癌旁组织表达明显高于正常胃粘膜,而腺癌组织的表达强度则与癌组织的分化程度呈正比,分化程度愈低,表达愈弱,低分化腺癌无阳性表达,中、高分化腺癌表达略低于正常粘膜,但二者对比无统计学差异;食管鳞癌及癌旁组织均无阳性表达;各组男女对比均无统计学差异。结论TFF1在胃炎及消化性溃疡中表达升高,且在多发/复合性溃疡中的表达较单发溃疡表达升高,即粘膜损伤越严重其表达越强,提示其在胃粘膜保护及促进上皮重建机制中具有一定的作用。TFF1在癌旁组织中表达增强提示其可能与肿瘤抑制及分化机制有关,而在癌组织中表达减弱,且分化程度越低表达越弱可能与癌组织腺体及细胞破坏、TFF1的分泌减少有关。

三叶因子1在乙醇诱导的大鼠急性胃黏膜损伤中的表达

背景:三叶因子具有胃黏膜保护作用,但其在乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤中黏膜保护作用的研究较少。目的:观察短期灌注不同浓度乙醇大鼠胃黏膜三叶因子(TFF)1的表达情况,探讨TFF1与胃黏膜保护的相关性。方法:采用不同浓度乙醇直接灌胃制备急性胃黏膜损伤大鼠模型,以0.9%NaCl溶液灌胃作为对照,分别在肉眼和光学显微镜下观察胃黏膜形态学变化并评估黏膜损伤指数(LI),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠胃黏膜TFF1 mRNA的表达。结果:40%、70%、100%乙醇灌胃2h后大鼠胃黏膜LI分别为38.38±6.37、70.00±8.02和118.75±14.82,显著高于对照组(P均<0.01)。在40%乙醇和70%乙醇组大鼠胃黏膜中TFF1/β-actin光密度比值分别为1.27±0.10和1.07±0.13,显著高于对照组的0.93±0.10(P均<0.01),100%乙醇组TFF1/β-actin光密度比值为0.68±0.09,显著低于对照组(P<0.01)。结论:胃黏膜损伤程度与乙醇浓度呈正相关,乙醇浓度越高,胃黏膜损伤越严重;一定程度的胃黏膜损伤TFF1 mRNA表达升高,严重胃黏膜损伤TFF1 mRNA表达反而下降。一定程度的损伤刺激能使TFF1产生胃黏膜保护作用。

三叶因子在正常胃黏膜中存在的分子形式及其与癌变的关系

目的研究三叶因子1(TFF1)在正常胃黏膜中存在的分子形式及其在正常、胃癌、不典型增生及肠化胃黏膜中的表达,探讨TFF1在胃癌的发生、发展中的作用及其胃黏膜保护作用的分子生物学机制。方法采用Westernblotting方法观察TFF1在正常胃黏膜中存在的分子形式,并采用免疫组化方法测定正常、胃癌、不典型增生及肠化胃黏膜中TFF1的表达情况,通过图像分析软件分析其阳性信号平均光密度值了解其表达情况。结果TFF1在人正常胃黏膜中以3种形式存在,即单聚体、二聚体和Mr21000的TFF1与某种分子结合而成的复合物,其中TFF1复合物的含量最高。TFF1主要在人胃体及胃窦黏膜上皮表面细胞胞质中表达,核周聚集较明显,越靠近腔面的细胞表达越强。胃腺癌患者癌旁组织TFF1表达(0.51±0.07)明显高于正常胃黏膜(0.44±0.06,P<0.001),而腺癌组织的表达强度则与癌组织的分化程度呈正比,分化程度愈低,表达愈弱,低分化腺癌无阳性表达,中、高分化腺癌表达(0.41±0.07)略低于正常黏膜(P>0.05)。不典型增生胃黏膜TFF1表达(0.57±0.03)明显高于正常胃黏膜(P<0.001);肠化胃黏膜无TFF1阳性表达,但肠上皮化生周围的胃黏膜TFF1表达(0.45±0.07)与正常胃黏膜相比无统计学差异(P>0.05)。结论TFF1在胃黏膜保护及修护方面具有重要的作用,其在胃黏膜中主要以复合物的形式存在。TFF1可能与肿瘤抑制及分化机制有关。

胃黏膜保护的基础与临床研究进展

长期以来胃黏膜保护一直是基础和临床研究的重点与热点.近年来人们对胃黏膜保护的细胞和分子机制已有了全面深入的认识,发现具有胃黏膜细胞保护作用的物质有很多种,具有细胞保护作用的器官和组织也不仅仅限于胃黏膜,在胰腺、肝脏、肾脏、心脏和脑等都发现有类似现象.因此细胞保护概念的内涵和外延都有拓展.我们对三叶因子、氧自由基、幽门螺杆菌、酒精、非甾体类抗炎药及细胞因子等研究热点与胃黏膜保护相互作用的机制进行初步的探讨.

TFF1在功能性消化不良和慢性胃炎中的表达

目的 测定三叶因子1(trefoil factor,TFF1)在正常、功能性消化不良、慢性胃炎胃粘膜中的表达情况,探讨TFF1与功能性消化不良和慢性胃炎的关系。方法 应用免疫组化方法测定正常人和功能性消化不良、慢性胃炎患者胃窦黏膜中TFF1的表达,通过图像分析软件分析其阳性信号平均光密度值。结果 慢性胃炎组TFF1的表达明显高于正常组和功能性消化不良组,而正常组和功能性消化不良组中表达均较弱,二者统计学上无差异。结论 TFF1在正常组和功能性消化不良组中表达相似,认为TFF1与功能性消化不良的发病无关:而慢性胃炎组表达较高,认为与TFF1在胃黏膜屏障功能保护和促进上皮重建的机制有关。

三叶因子与胃黏膜保护的研究进展

三叶因子家族是一群主要由胃肠道黏液细胞分泌的小分子多肽.其共同特征为均含一特殊的P结构域及三叶状结构.这种稳定的结构使三叶因子家族具有明显的抗蛋白酶水解、酸消化及耐热特性,因而能在消化道复杂的环境中保持生物活性.目前在哺乳动物体内发现的有pS2/TFF1、SP/TFF2和ITF/TFF3三种,它们具有黏膜保护与修复、肿瘤抑制、信号传导、调节细胞凋亡等功能.本文阐述了三叶因子家族发现的历史,并初步探讨了其作用.同时也对三叶因子受体这一热点的研究现状进行总结.

酵母双杂交法对HBV表面抗原主蛋白候选结合蛋白的筛选

目的:自肝细胞cDNA文库中筛选与HBV主蛋白(SHBs)相互作用的蛋白基因,探讨主蛋白的生物学功能.方法:利用PCR扩增S主蛋白基因,定向克隆技术将靶基因克隆到pDEST32构建出S主蛋白的诱饵质粒;Westernblot方法验证转化诱饵质粒的酵母细胞表达SHBs;将诱饵质粒与人肝cDNA文库猎物质粒共同转化MaV203酵母细胞,在营养缺陷型培养基和X-gal上进行三重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的猎物质粒进行DNA测序;利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对于筛选结果进行分析.结果:构建S主蛋白及肝文库酵母细胞表达载体,进行酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,筛选出既能在缺陷培养基也能在X-gal的检测下变成蓝色的真阳性菌落3个,分别为核糖体蛋白L3、微管蛋白α-1a和α-2巨球蛋白.结论:用酵母双杂交技术筛选出3个与SHBs相互作用的肝细胞结合蛋白编码基因,提示SHBs可能参与到肝细胞内部的多种生物学反应.

胃黏膜保护的基础与临床研究——三叶因子与胃黏膜保护的研究进展

三叶因子家族是一群主要由胃肠道黏液细胞分泌的小分子多肽．其共同特征为均含一特殊的P结构域及三叶状结构．这种稳定的结构使三叶因子家族具有明显的抗蛋白酶水解、酸消化及耐热特性，因而能在消化道复杂的环境中保持生物活性．目前在哺乳动物体内发现的有pS2/TFF1、SP/TFF2和ITF/TFF3三种，它们具有黏膜保护与修复、肿瘤抑制、信号传导、调节细胞凋亡等功能．本文阐述了三叶因子家族发现的历史，并初步探讨了其作用．同时也对三叶因子受体这一热点的研究现状进行总结．

放大内镜在胃部疾病诊断中的应用

放大内镜在消化道疾病尤其胃癌及癌前病变的诊断方面有着独特优势,并能指导活检,避免不必要的活检创伤,有着普通内镜所不能比拟的优势.本文对近年来放大内镜在胃部疾患的应用进展作一综述,同时结合临床操作体会,总结放大内镜的操作要领.

乙型肝炎病毒蛋白表型定义初探

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分型方式,并根据病毒蛋白结构提出新的病毒蛋白分型方式. 方法:自GenBank中按基因型搜索符合要求的HBV基因组序列,并应用Vector NTI suite 8.0版软件进行基因组核苷酸及各基因编码蛋白质序列比较,并利用软件分析前前-S 基因、前-X基因和前-C基因的存在状态. 结果:在GenBank中根据HBV基因型分型搜索出119个病毒株全基因组,比较后发现选择病毒株基因组核苷酸序列总阳性率和总一致率分别为95.7%和47.7%;选择病毒株编码的全C蛋白、全S蛋白、全X蛋白和多聚酶的总阳性率分别为98.6%、87.3%、57.2%和95.2%,总一致率分别为37.4%、24.1%、27.7%和43.5%.在病毒群中,33.61%的病毒株编码前前-S多肽,14.3%的病毒株编码前-X多肽, 26.1%的病毒株不编码前-C多肽,94.1%编码前-X多肽的病毒株同时编码前前-S多肽.基因组1-700 nt一致率30.6%,1103-1653 nt一致率20.8%,为高变区;基因组1654-1950 nt的一致率为74.2%,为高保守区.4种病毒蛋白各有其相应的高变区和高保守区.根据病毒蛋白前导性序列的变异情况提出新的分型方法,命名为蛋白表型. 蛋白表型分7型,Ⅳ型为主要流行表型,占39.5%,Ⅴ型和Ⅶ型各占19.3%.亚洲HBV蛋白分型分布分散,Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅶ型所占比例均大于20%;欧洲Ⅳ型占58.3%,Ⅶ型占25.0%,Ⅴ型占13.9%. 结论:在综合分析HBV基因组的基础上,初步划分出HBV 基因组和病毒蛋白内部存在的高变区和高保守区.提出蛋白表型的新概念,并综合展示基因核苷酸突变所导致的病毒蛋白的结构差异.

三叶因子1在胃癌及癌前病变胃黏膜中的表达改变

目的:测定三叶因子1在正常、胃癌、不典型增生及肠化胃黏膜中的表达情况,探讨TFF1在胃癌的发生、发展中的作用及意义. 方法:应用免疫组化方法测定各种条件下胃黏膜中TFF1的表达情况,通过图像分析软件分析其阳性信号平均光密度值了解其表达情况. 结果:胃腺癌患者癌旁组织表达(0.51±0.07)明显高于正常胃黏膜(0.44±0.06,P<0.001),而腺癌组织的表达强度则与癌组织的分化程度呈正比,分化程度愈低,表达愈弱,低分化腺癌无阳性表达,中、高分化腺癌表达(0.41±0.07) 略低于正常黏膜(P>0.05);不典型增生胃黏膜TFF1表达(0.57±0.03)明显高于正常胃黏膜(P<0.001);肠化胃黏膜无TFF1阳性表达,但肠上皮化生周围的胃黏膜TFF1表达(0.45±0.07)与正常胃黏膜相比无统计学差异(P>0.05). 结论:TFF1在癌旁组织及不典型增生胃黏膜中表达增强提示其可能与肿瘤抑制及分化机制有关,而在癌组织中表达减弱,且分化程度越低表达越弱可能与癌组织腺体及细胞破坏、TFF1的分泌减少有关.

三叶因子1在胃黏膜中的表达及存在的分子形式

目的:研究三叶因子1在人胃黏膜中的表达及存在的分子形式,探讨其胃黏膜保护作用的分子生物学机制. 方法:采用western-blot方法观察三叶因子1在人胃黏膜中的存在形式,并采用免疫组化方法了解三叶因子1在胃黏膜中的定位,比较其在胃溃疡周边及距周边5cm外胃黏膜中的表达改变. 结果:(1)三叶因子1在人胃黏膜中以三种形式存在:单聚体、二聚体及一种分子量约为21kDa的TFF1与某种分子结合而成的复合物,其中,TFF1复合物的含量最高.(2) 三叶因子1主要在人胃体及胃窦黏膜上皮表面细胞胞质中表达,核周聚集较明显,越靠近腔面的细胞表达越强.(3) 三叶因子1在胃溃疡周边黏膜的表达明显高于距溃疡周边5cm外的黏膜(P<0.001). 结论:三叶因子1主要在人胃体及胃窦黏膜上皮表面细胞胞质中表达,其与某种分子结合形成的复合物是TFF1在胃黏膜中存在的主要形式,这种TFF1复合物可能比TFF1单聚体及二聚体有更强的生物活性.TFF1在胃溃疡周边黏膜表达高于距溃疡周边5cm外的黏膜,说明其在胃黏膜保护及修护方面具有重要的作用.

FHIT基因蛋白表达与结直肠癌及癌前期病变的临床关系

目的:探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine trail,FHIT) 蛋白在45例结直肠癌、36例结直肠腺瘤和23例正常对照组中的表达睛况. 方法:标本经40 g/L甲醛固定,常规石蜡包埋,采用免疫组化SP法检测FHIT在结直肠癌、结直肠腺瘤和正常对照组中的表达. 结果:在45例结直肠癌中28例FHIT蛋白表达显著减少或缺失,5例表达减弱,12例表达阳性;其中结直肠癌Dukes A,B和C期FHIT蛋白表达阴性比例分别为6/11,5/12 和17/22.在36例结直肠腺瘤中7例FHIT蛋白表达显著减少或缺失,4例表达减弱,25例表达阳性;其中结直肠腺瘤伴轻、中和重度不典型增生FHIT蛋白表达阴性比例分别为2/16,1/7和4/13.FHIT蛋白阴性表达在结直肠癌和正常对照组(62.2% vs 4.4%,X2=25.33,P<0.01)、结直肠癌和结直肠腺瘤(62.2% vs 19.4%,X2=14.19,P<0.01)、结直肠癌未伴淋巴转移的Dukes A+B期和已伴淋巴转移的C 期(47.8% vs 77.3%,X2=4.28,P<0.05)间均有显著性差异,而在结直肠腺瘤伴轻度不典型增生和中、重度不典型增生(12.5% vs 25.0%,X2=0.84,P>0.25),结直肠腺瘤和正常对照组(19.4% vs 4.4%,X2=3.51,P>0.05)中无显著性差异. 结论:FHIT蛋白在结直肠癌中呈低表达或缺失,且FHIT低表达与转移状况有相关关系,提示该基因可能与结直肠癌的发生发展有关.