自噬对锌指转录因子1及高糖诱导的肾小管EMT的影响

目的探讨自噬是否可以通过调控锌指转录因子1(Snail1)的降解而影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常(NC)组、糖尿病(DM)组,予链脲佐菌素(STZ)53 mg/kg尾静脉注射复制大鼠Ⅰ型糖尿病模型;造模成功后第24周末处死NC和DM组大鼠,检测大鼠血糖、血尿素氮(BUN)和24 h尿白蛋白(24 hUAlb),Western blot检测肾组织自噬相关分子[自噬基因BECN 1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/Ⅰ)、自噬降解底物蛋白1(p62)]、Snail1蛋白的表达水平;将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为正常糖组(NG组)、高糖组(HG组)及高渗组(HM组),HG组培养的NRK-52E细胞在分为全蛋白组(Input组)和IP组[IP组又为阴性对照(IgG组)和实验组(Snail1/P62)];在高糖培养的NRK-52E细胞中分别使用自噬激动剂[雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂氯喹(CQ)]处理48 h,分为NG组、HG组、HG+RAP组及HG+CQ组,采用双标荧光腺病毒观察各组细胞的自噬流的情况,免疫荧光化学染色和免疫共沉淀观察Snail1与p62的蛋白相互作用,Western blot检测各组NRK-52E细胞中自噬相关分子、EMT、细胞外基质(ECM)指标表达变化;用二甲基亚砜(DMSO)、RAP、CQ处理NRK-52E细胞48 h,再联合放线菌酮(CHX)和蛋白酶抑制剂(MG-132)处理0、6及10 h,分为HG+DMSO/RAP组、HG+DMSO/CQ组,采用Western blot检测自噬对Snail1蛋白衰减的调控作用。结果与NC组相比,DM组大鼠血糖、BUN及24 hUAlb均增高(P<0.05);Western blot结果显示,与NC组比较,DM组大鼠肾组织及高糖培养的NRK-52E细胞中Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下调(P<0.05),p62、Snail1蛋白表达上调(P<0.05);双标腺病毒实验显示,在高糖刺激的NRK-52E中自噬流受阻,与HG组相比,HG+RAP组NRK-52E细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达增多,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)的蛋白表达减少(P<0.05),而HG+CQ组结果相反;免疫共沉淀实验发现Snail1与p62存在蛋白互作;联合CHX和MG-132后,HG+DMSO/RAP组中Snail1蛋白衰减速度加快。结论在DM大鼠肾组织和高糖培养的肾小管上皮细胞中,自噬受抑后使Snail1通过自噬降解减少,诱导EMT及ECM沉积增多,促进了肾脏纤维化的发生。

耳穴埋针对血管性痴呆大鼠记忆障碍及β淀粉样蛋白表达的影响

目的:探讨耳穴改善血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆障碍的反应机制。方法:采用4-血管阻断(4-Vesselocclusion,4-VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型,随机分为假手术组、正常对照组、模型组、耳针组,针刺耳穴脑、肾后,做免疫组化、行为学检测、图像分析。结果:耳针能显著降低VD模型大鼠脑内顶叶皮层Aβ免疫阳性神经元的细胞数,升高其平均光密度值(P<0·05)。结论:耳针能减少或抑制Aβ的过度产生,这可能是减少了Aβ的沉积,阻止Aβ装备成有毒性的聚合体,保护神经元免受Aβ的神经毒性,从而改善VD模型大鼠学习记忆。

耳穴埋针对血管性痴呆大鼠记忆障碍及β淀粉样前体蛋白表达的影响

目的探讨耳针对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆障碍的改善及其与β淀粉样前体蛋白(APP)表达的关系。方法采用4血-管阻断(4-VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型,针刺脑、肾耳穴后,作行为学检测、免疫组化、图像分析。结果迷宫学习记忆能力测试表明,耳针组大鼠成绩优于VD模型组(P<0.05)。耳针组大鼠脑内APP免疫阳性神经细胞数低于VD模型组,其平均光密度值高于VD模型组(P<0.05)。结论耳针改善了VD模型大鼠学习记忆,这可能是耳针抑制了VD大鼠APP的过量表达,从而对VD模型大鼠海马神经元起到保护作用。

耳针对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍及NMDAR1的影响

目的:观察耳针对血管性痴呆(VD)模型大鼠学习记忆能力及脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)的影响。方法:采用4-血管阻断(4-VO)的方法,复制大鼠血管性痴呆模型,采用Y-型迷宫,进行行为学检测,定量测定其学习记忆成绩,用免疫组化法检测脑内NMDAR1表达水平的变化。结果:正常对照组脑组织有少量的NMDAR1免疫阳性神经细胞分布,VD模型组NMDAR1免疫阳性细胞数较正常对照组显著增高,平均光密度显著降低(P<0.05);耳针治疗组脑、肾两耳穴交替治疗3周脑组织NMDAR1免疫阳性神经细胞数显著减少,平均光密度值增高(P<0.05)。结论:耳针对脑缺血性神经元损伤的保护作用可能是通过抑制NMDAR1的过表达、下调NMDAR1的数量而实现的,从而改善VD大鼠学习记忆障碍。

中医综合疗法治疗中风后偏瘫30例

目的:观察中医综合疗法治疗中风后偏瘫的临床效果。方法:对30例中风后偏瘫患者采用综合疗法(针刺、拔罐、中药外敷、穴位贴敷)进行治疗,观察其疗效。结果:治愈13例,显效15例,进步1例,无效1例,总有效率96.67%。结论:综合疗法治疗中风后偏瘫效果良好,临床易于操作,值得推广。

耳针对血管性痴呆大鼠行为学及大脑皮质STAT1表达的影响

目的:探讨耳穴改善血管性痴呆(VascularDementia,VD)大鼠学习记忆障碍的反应机制。方法:雄性Wistar大鼠30只,随机分为3组:正常组,模型组,耳针组,采用4-血管阻断(4-Vesselocclusion,4-VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型,Y-型迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,SABC法检测大脑信号转导和转录激活子1(STAT1)阳性细胞的表达。结果:耳针能显著降低模型鼠大脑皮质的信号转导和转录激活子1(STAT1)免疫阳性细胞数,升高其平均光密度值(P<0.05)。结论:耳针能减少或抑制STAT1的过度产生,改善VD模型大鼠学习记忆。

血管性痴呆大鼠学习记忆能力与大脑皮质ED1表达

目的:研究血管性痴呆(Vascular Dementia,VD)大鼠巨噬细胞-小胶质细胞胞质抗原(ED1)及学习记忆能力的改变。方法:雄性Wistar大鼠30只,随机分为正常对照组、假手术组和VD模型组,采用4-血管阻断(4-Vesselocclusion,4-VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型,Y-型迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,SABC法检测大脑皮质ED1阳性表达细胞。结果:与正常组、假手术组相比较,模型组大鼠学习、记忆能力受损明显,ED1免疫神经元表达增高(P<0.05)。结论:VD模型大鼠学习记忆能力下降可能与ED1表达增高有关。

芦荟提取物对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍及Aβ、APP和NMDAR1表达影响随机平行对照研究

[目的]观察芦荟提取物对血管性痴呆大鼠脑β淀粉样蛋白(Aβ)、β淀粉样前体蛋白(APP)和N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)影响。[方法]使用随机平行对照方法,将SPF级Wistar大鼠30只按随机数字表法分为3组:对照组、模型组、芦荟组,每组10只。建立4-血管阻断的血管性痴呆大鼠模型,检测干预前后各组Y-迷宫箱试验得分、海马区Aβ、APP、NMDAR1阳性细胞数的变化。[结果]芦荟提取物治疗后,Y-迷宫箱试验得分及Aβ、APP、NMDAR1阳性细胞数减少优于对照组和模型组(P<0.05)。[结论]芦荟提取物能减少或抑制Aβ、APP、NMDAR1过表达。

阿托伐他汀对DN小鼠肾组织SFRP1表达的影响

目的:观察阿托伐他汀对糖尿病肾病(DN)小鼠肾组织SFRP1表达的影响,探讨阿托伐他汀延缓DN肾纤维化的可能机制。方法:30只雄性昆明小鼠均分为正常对照组(NC)组、糖尿病肾病(DN)组及阿托伐他汀治疗(Ato)组,DN和Ato组小鼠给予55 mg/kg链脲佐菌素(STZ)腹腔注射复制DN动物模型、NC组给予相同剂量无菌柠檬酸钠缓冲液;造模成功后第5周,Ato组小鼠给予阿托伐他汀20 mg/(kg·d)灌胃4周、NC组和DN组给予羧甲基纤维素灌胃;造模成功后第9周时处死小鼠,采用HE和Masson染色观察小鼠肾脏病理形态结构的变化,免疫组织化学染色观察小鼠肾组织β-catenin和SFRP1表达,Western blot检测小鼠肾组织SFRP1、Wnt4、β-catenin、E-cadherin、α-SMA和Col-Ⅳ蛋白表达,Real time-PCR检测小鼠肾组织SFRP1 mRNA表达。结果:HE和Masson染色见DN组肾小管管腔扩张,肾小管间质有蓝色胶原纤维沉积,Ato组上述病变减轻;免疫组织化学染色显示,β-catenin表达水平为DN组>Ato组>NC组,SFRP1表达水平为NC组>Ato组>DN组; Western blot结果显示,与NC组比较,DN组小鼠肾组织Wnt4、β-catenin、α-SMA及Col-Ⅳ表达上调(P<0.05)、SFRP1及Ecadherin表达下调(P<0.05),Ato治疗后Wnt4、β-catenin、α-SMA及Col-Ⅳ表达较DN组减少(P<0.05),SFRP1及E-cadherin表达增多(P<0.05); Real-time PCR结果显示,与NC组比较,DN组SFRP1 mRNA表达明显下调(P<0.05),经Ato治疗后SFRP1 mRNA表达较DN组增多(P<0.05)。结论:阿托伐他汀能抑制DN小鼠肾小管上皮细胞间质转化过程、减少肾间质细胞外基质沉积、延缓DN小鼠肾纤维化进程,可能与其上调SFRP1表达,进而增强对Wnt4/β-catenin信号通路的抑制作用有关。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对高糖培养的NRK-52E细胞中分泌型卷曲相关蛋白1表达的影响

目的检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预肾小管上皮细胞(NRK-52E)后对分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)表达变化的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组(NC组)和糖尿病肾病组(DN组),DN组建模10周后检测相关生化指标、计算肾脏指数(KI);免疫组化法检测肾组织中Sfrp1的表达;将NRK-52E细胞分为正常糖组(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(HG,葡萄糖30 mmol/L)和高糖加5-Aza-CdR组(5-Aza-CdR组,80μmol/L),用Western blot检测Sfrp1、DNA甲基转移酶(Dnmt)3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白的表达;RT-qPCR检测Sfrp1 mRNA的表达;Pearson检验分析Sfrp1与Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ及col-Ⅳ的相关性。结果DN组大鼠KI、血糖(BG)、24 h尿蛋白(24 h UP)、肌酐水平均高于NC组。与NC组比,DN组肾组织中Sfrp1表达明显降低。与NG组比,HG组Sfrp1 mRNA和蛋白表达减少(P<0.05),Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白表达增加(P<0.05);与HG组相比,5-Aza-CdR组Sfrp1 mRNA和蛋白表达增多(P<0.05);Dnmt3a、Dnmt3b、col-Ⅲ和col-Ⅳ蛋白表达减少(P<0.05);Sfrp1与Dnmt3a(r=-0.937,P<0.05)、Dnmt3b(r=-0.965,P<0.05)、col-Ⅲ(r=-0.694,P<0.05)和col-Ⅳ(r=-0.888,P<0.05)均呈负相关。结论5-氮杂-2’-脱氧胞苷可能通过降低Dnmt3a和Dnmt3b表达,进而使Sfrp1表达升高。

miR-27 a调控Sfrp1对肾小管上皮细胞EMT的影响

目的探讨高糖培养肾小管上皮细胞中miR-27 a调控分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)对细胞向间质细胞转分化(EMT)的影响。方法将NRK-52E细胞分为正常糖(NG组)和高糖(HG组)两组,利用RT-qPCR检测NRK-52E细胞中miR-27 a、Sfrp 1的表达情况,Western blot检测NRK-52E细胞中Sfrp1、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(col-Ⅳ)的蛋白表达;将NRK-52E细胞分为野生型Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mimics阴性对照组(wt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mnc组)、野生型Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mimics组(wt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a m组)、突变型Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mimics阴性对照组(mt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mnc组)以及突变型Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mimics组(mt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a m),通过双荧光素酶报告基因检测系统检测萤火虫荧光值与海肾荧光值的比值,验证miR-27 a对Sfrp1表达的影响;在高糖诱导下,利用细胞转染实验将NRK-52E细胞设miR-27 a mimics阴性对照组(miR-27 a mnc组)、miR-27 a mimics组(miR-27 a m组)、miR-27 a inhibitor阴性对照组(miR-27 a inc组)以及miR-27 a inhibitor组(miR-27 a i组),通过RT-qPCR检测各组细胞中miR-27 a、Sfrp 1 mRNA的表达,Western blot检测各组细胞中Sfrp1、E-cadherin、α-SMA、col-Ⅳ蛋白的表达水平。结果RT-qPCR结果显示,与NG组比较,HG组miR-27 a表达水平增高(P<0.05),Sfrp 1 mRNA表达水平降低(P<0.05);Western blot结果显示,与NG组比较,HG组α-SMA、col-Ⅳ蛋白水平增高(P<0.05),Sfrp1、E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05);荧光素酶报告基因显示,wt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a m组荧光素酶活性明显低于wt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a mnc组(P<0.05),而mt Sfrp 1-3′UTR+miR-27a mnc组与mt Sfrp 1-3′UTR+miR-27 a m组荧光素酶活性未见明显变化(P>0.05);细胞转染RT-qPCR结果显示,与miR-27 a mnc组比较,miR-27 a m组miR-27 a表达增加(P<0.05),而Sfrp 1 mRNA表达降低(P<0.05);与miR-27 a inc组比较,miR-27 a i组miR-27 a表达降低(P<0.05),而Sfrp 1 mRNA表达增加(P<0.05);Western blot结果显示,与miR-27 a mnc组比较,miR-27 a m组α-SMA、col-Ⅳ蛋白表达增加(P<0.05),Sfrp1、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与miR-27a inc组比较,miR-27 a i组α-SMA、col-Ⅳ蛋白表达降低(P<0.05),Sfrp1、E-cadherin蛋白表达增加(P<0.05)。结论miR-27 a可以通过抑制Sfrp1的表达促进肾小管EMT,参与糖尿病肾病肾纤维化的发生。

基础工程施工质量检验要点

简述基础工程施工质量的检验要点和方法,实践证明该要点和方法很好也很适用。

沉默信息调节因子1调控Zeste同源物2增强子对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质转化影响的研究

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)通过调控Zeste同源物2增强子(EZH2)表达影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程及DKD肾纤维化发病机制。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照(NC)组、DKD组,各6只,检测各组BG、BUN和24 h尿白蛋白(24 hUAlb)。培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)和高渗组(HM)。在无血清条件下用脂质体2000(Lip2000)转染法,将空载质粒(Vector)、敲低及过表达SIRT1和EZH2质粒分别转染细胞,将细胞分为正常空载组(Con+Vector)、正常敲低EZH2转染组(Con+sh-EZH2)、正常敲低SIRT1转染组(Con+sh-SIRT1)、正常过表达EZH2转染组(Con+oe-EZH2)、正常过表达SIRT1转染组(Con+oe-SIRT1)、高糖空载组(HG+Vector)、高糖敲低EZH2转染组(HG+sh-EZH2)、高糖敲低SIRT1转染组(HG+sh-SIRT1)、高糖过表达EZH2转染组(HG+oe-EZH2)、高糖过表达SIRT1转染组(HG+oe-SIRT1)、高糖双转过表达组(HG+oe-EZH2+oe-SIRT1)。HE、Masson染色观察肾组织病理形态改变,免疫荧光化学染色观察NRK-52E细胞中SIRT1和EZH2表达,Western blot和qRT-PCR检测肾组织和NRK-52E细胞SIRT1、EZH2、E-cadherin、α-SMA和CollegenⅢ蛋白和mRNA表达。结果DKD组BG、BUN、24 h UAlb高于NC组(P<0.05),HE、Masson染色观察到DKD组肾小管管腔扩张,肾小球和肾间质有蓝紫色胶原纤维沉积;DKD组较NC组α-SMA、CollagenⅢ、EZH2蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低(P<0.05)。培养的细胞中,HG组较Con组α-SMA、CollagenⅢ、EZH2蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+Vector组比较,HG+sh-EZH2组E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达降低(P<0.05),HG+oe-EZH2组EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);HG+sh-SIRT1组较HG+Vector组EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达升高(P<0.05),SIRT1、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),HG+oe-SIRT1组SIRT1、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达降低(P<0.05);HG+oe-EZH2+oe-SIRT1组较HG+oe-EZH2组α-SMA、CollagenⅢ、EZH2蛋白表达升高(P<0.05)。无论是敲减内源性SIRT1或过表达SIRT1,对EZH2 mRNA表达均无影响。免疫共沉淀研究结果显示,在肾小管上皮细胞中SIRT1蛋白与EZH2蛋白存在体内互作关系。结论SIRT1可负调控EZH2蛋白表达抑制肾小管上皮细胞EMT过程,抑制DKD肾纤维化以发挥肾脏保护作用。

控制血糖对糖尿病肾脏疾病大鼠肾脏组织Wnt4/β-catenin信号通路及肾脏纤维化的影响

目的观察降糖治疗对DKD大鼠肾脏组织Wnt4/βcatenin信号通路相关分子表达的影响,探讨降糖治疗延缓DKD肾纤维化的可能机制。方法 24只SD雄性大鼠,分为正常对照组(NC)、DKD组和胰岛素降糖组(INS),每组各8只。微量末梢血检测HbA1c,生化法测血糖、BUN、24 h UAlb。HE、Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组织化学检测Wnt4和β连环蛋白(βcatenin)在肾脏组织的表达。Western blot检测Wnt4、βcatenin、磷酸化糖原合成酶激酶3β(pGSK3β)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、上皮型钙黏附蛋白(Ecadherin)、I型胶原(CollagenⅠ)蛋白在大鼠肾脏组织中的表达。RTPCR检测Wnt4、βcatenin和CollagenⅠmRNA表达。结果与NC比较,DKD组Wnt4 mRNA和蛋白表达升高[(0. 27±0. 04)vs(1. 28±0. 42),(0. 03±0. 01)vs(0. 09±0. 03),P<0. 05],pGSK3β、βcatenin和αSMA蛋白表达升高[(0. 13±0. 02)vs(0. 92±0. 35),(0. 11±0. 03)vs(0. 47±0. 12),(0. 02±0. 002)vs(0. 20±0. 04),P<0. 05],CollagenⅠ沉积增加[(0. 01±0. 01)vs(0. 20±0. 07),P<0. 05]。与DKD组比较,INS组Wnt4 mRNA和蛋白表达降低[(1. 28±0. 42)vs(0. 78±0. 12),(0. 09±0. 03)vs(0. 05±0. 01),P<0. 05],pGSK3β、βcatenin和αSMA蛋白表达降低[(0. 92±0. 35)vs(0. 28±0. 02),(0. 47±0. 12)vs(0. 16±0. 03),(0. 20±0. 04)vs(0. 08±0. 01),P<0. 05],CollagenⅠ沉积减少[(0. 20±0. 07)vs(0. 03±0. 01),P<0. 05]。结论控制血糖可抑制Wnt4/βcatenin信号通路的活化,减少ECM沉积,延缓糖尿病大鼠肾纤维化的发展。

穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜的抗炎修复作用

目的:观察穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠体质量、大便性状、出血情况、肠黏膜组织形态及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响,探讨艾灸和埋线联合应用对UC大鼠的抗炎修复作用。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、埋线组、埋线加艾灸组,每组6只。采用三硝基苯磺酸联合乙醇灌肠法复制UC大鼠模型。穴位选取双侧"天枢""大肠俞""上巨虚"。艾灸组给予温和灸,每次10 min,每日1次,共干预14次。埋线组给予穴位简易埋线,每周1次,共干预2次。埋线加艾灸组干预方法同艾灸组、埋线组,埋线干预于温和灸干预6 h后进行。观察各组大鼠一般情况、体质量、大便性状、出血情况,并进行疾病活动指数(DAI)评估;HE染色法观察结肠黏膜组织形态变化;免疫组织化学法和Western blot法检测结肠黏膜IL-6的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠饮食减少,活动、精神差,易激惹,毛发少泽,便稀或不成形,肛周红肿伴脓血分泌;治疗后3个治疗组一般情况较模型组均有不同程度的改善。与正常组比较,模型组大鼠DAI明显升高(P<0.01);与模型组比较,埋线加艾灸组、埋线组、艾灸组DAI均明显降低(P<0.01,P<0.05);埋线加艾灸组DAI明显低于埋线组、艾灸组(P<0.01)。HE染色结果显示,正常组结肠组织结构完整清晰;模型组结肠黏膜上层缺损严重,有大量炎性细胞浸润;各治疗组大鼠结肠组织损伤均有所改善,有少量炎性细胞浸润,其中埋线加艾灸组改善最明显。与正常组比较,模型组结肠黏膜组织IL-6阳性表达及蛋白表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,埋线加艾灸组、埋线组、艾灸组结肠黏膜组织IL-6阳性表达及蛋白表达量明显降低(P<0.01,P<0.05);且埋线加艾灸组IL-6明显低于埋线组、艾灸组(P<0.01)。结论:埋线联合艾灸能有效降低UC大鼠DAI,改善结肠黏膜的病理损伤,下调促炎因子IL-6的表达,从而达到对UC大鼠结肠黏膜的抗炎修复作用。

穴位注射对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg相关转录因子及细胞因子表达的影响

目的:观察穴位注射对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜叉头状转录因子p3(Foxp3)和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、血清白细胞介素-17(IL-17)表达的影响,从Th17/Treg平衡角度探讨穴位注射治疗AR的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、穴位注射组、非经非穴组,每组8只。采用卵清蛋白致敏法复制AR模型。穴位注射组每隔3d于"印堂"和双侧"迎香"注射地塞米松、转移因子和利多卡因混合液各0.1mL,共4次。非经非穴组同样方法于大鼠左右臀部"后海"与"环跳"连线中点和左(或右)前肢腋窝直下5cm处注射。采用叠加量化记分法进行行为学评分,采用免疫组织化学法检测鼻黏膜中Foxp3和RORγt的表达,酶联免疫吸附法检测血清中IL-17的表达。结果:模型组症状评分高于正常组(P<0.05),穴位注射组症状评分低于模型组和非经非穴组(P<0.05),非经非穴组症状评分略低于模型组,但差异无具统计学意义(P>0.05)。模型组较正常组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率降低(P<0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率增高、血清IL-17表达升高(P<0.05),Foxp3/RORγt比值下降(P<0.05)。与模型组和非经非穴组比较,穴位注射组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率增高(P<0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率、血清IL-17表达降低(P<0.05),Foxp3/RORγt比值升高(P<0.05)。大鼠鼻黏膜Foxp3表达与症状评分呈负相关(P<0.05),鼻黏膜RORγt表达和血清IL-17表达与症状评分呈正相关(P<0.05),鼻黏膜Foxp3/RORγt与症状评分呈负相关(P<0.05)。结论:穴位注射可通过上调鼻黏膜Foxp3表达水平,下调鼻黏膜RORγt表达水平,纠正其失衡,并抑制IL-17产生,从而缓解鼻部炎性反应。

“迎香”“印堂”穴位注射对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组胺受体H 1、H 4表达的影响

目的:观察"迎香""印堂"穴位注射对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜组胺H 1受体(H1R)和组胺H 4受体(H4R)表达的影响,探讨穴位注射治疗AR的可能机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、非经非穴组和穴注组,每组8只。除空白对照组外,均采用卵清蛋白致敏法制备AR模型。穴注组每隔3d于双侧"迎香"和"印堂"注射转移因子、地塞米松和利多卡因混合液各0.1mL,共4次。非经非穴组于大鼠左右腋下5cm处和左臀部"后海"与"环跳"连线中点注射,方法与穴注组相同。对各组大鼠进行行为学症状评分,采用免疫组化法和荧光定量PCR法检测鼻黏膜组织H1R、H4R蛋白和mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组症状评分及鼻黏膜H1R、H4R蛋白和mRNA表达均明显升高(P<0.05)。与模型对照组比较,穴注组症状评分及鼻黏膜H1R、H4R蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05)。与非经非穴组比较,穴注组症状评分及鼻黏膜H1R、H4R蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05)。结论:H1R和H4R参与了AR的发病过程,穴位注射治疗可有效下调H1R、H4R蛋白和mRNA的表达,减少炎性介质组胺生物学效应的发挥,起到治疗AR的作用。

穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织IL-6/JAK/STAT3信号通路的影响

目的:观察“天枢”“大肠俞”“上巨虚”穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织白细胞介素-6(IL-6)含量及酪氨酸激酶(JAK)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)表达的影响,探讨穴位埋线联合艾灸治疗UC的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、埋线组、艾灸组、联合组,每组6只。采用三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型。穴位选取双侧“天枢”“大肠俞”“上巨虚”。埋线组予埋线治疗,1次/7d,共2次。艾灸组予艾条温和灸治疗,10min/次,1次/d,共14d。联合组予艾条温和灸治疗,并于6h后进行埋线治疗,方法、疗程同埋线组、艾灸组。HE染色法观察结肠组织形态变化,ELISA法检测结肠组织IL-6含量,免疫组织化学法和Western blot法检测结肠组织JAK和STAT3的表达。结果:正常组大鼠结肠黏膜结构完整,无炎性细胞浸润;模型组大鼠结肠上皮组织结构破损模糊,大量炎性细胞浸润;埋线组、艾灸组和联合组大鼠结肠上皮组织损伤均有不同程度改善,联合组改善最明显。与正常组比较,模型组结肠组织IL-6含量及JAK、STAT3蛋白表达均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,埋线组、艾灸组、联合组结肠组织IL-6含量及JAK、STAT3蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与埋线组和艾灸组比较,联合组结肠组织JAK、STAT3蛋白表达降低更明显(P<0.01)。结论:埋线联合艾灸干预能有效下调IL-6含量及JAK和STAT3的表达,抑制炎性信号通路IL-6/JAK/STAT3的活化,促进损伤结肠组织的修复。

埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎活动期大鼠结肠黏膜Notch信号通路的调控作用

目的:观察穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜组织Notch受体1及靶基因Hes 1、Math 1表达的影响,从Notch信号通路角度探讨其治疗UC的机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、埋线+艾灸组、埋线组、艾灸组,每组6只。采用5%三硝基苯磺酸+50%乙醇混合溶液灌肠法复制UC模型。模型成功次日开始治疗,穴位取"上巨虚""天枢""大肠俞"。艾灸组艾条温和灸10 min, 1次/d,共14次。埋线组用简易埋线针进行穴位埋线,1次/周,共2次。埋线+艾灸组于艾灸后6 h埋线。HE染色法观察结肠黏膜组织形态变化;q-PCR法和Western blot法检测结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1和Math 1 mRNA及蛋白表达。结果:正常组大鼠结肠上皮完整、结构清晰,杯状细胞丰富,腺管结构正常。模型组大鼠结肠黏膜结构模糊,上皮大量破损、脱落,杯状细胞缺失,腺管破坏,大量炎性细胞浸润,各治疗组较模型组结肠损伤有不同程度改善,埋线+艾灸组最为明显。与正常组比较,模型组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01),Math 1 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),埋线+艾灸组、埋线组Math 1 mRNA表达水平升高(P<0.01),各治疗组结肠黏膜组织Math 1蛋白表达水平升高(P<0.01)。埋线+艾灸组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平低于埋线组、艾灸组(P<0.01,P<0.05),Math 1 mRNA表达水平高于艾灸组(P<0.01),Math 1蛋白表达水平高于埋线组、艾灸组(P<0.01)。结论:穴位埋线+艾灸对UC大鼠结肠损伤修复具有促进作用,其可能通过降低结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1表达水平,上调Math 1表达水平,抑制Notch信号通路的过度活化,从而调节结肠上皮分泌细胞系和吸收细胞系间分化的平衡而起效。

PGLA线体微创埋线后对正常人体足三里穴刺激效应的时效性观察

目的:探讨PGLA线体对正常人体经穴局部产生刺激效应的客观性及时效性,为临床使用PGLA线体行微创埋线的合理间隔周期提供依据。方法:应用医学影像学磁共振成像(MRI)扫描技术采集8例正常人体左侧足三里穴埋线前、埋线后8 h,埋线后第3、7、10、14天多个时间点埋线局部T2WI压脂及T2-Mapping 8回波序列图像,所得T2-Mapping 8回波序列图像利用相关软件生成T2-Mapping图并测量局部T2值,观察分析左侧足三里穴施行PGLA线体微创埋线后局部T2WI压脂像信号强度及T2值随时间变化的特点。结果:①埋线前左侧足三里穴局部T2WI压脂像上未见异常信号,埋线后各时间点局部T2WI压脂像上均见到高信号,其中埋线后8 h、第3天、第7天局部信号强度无较大差别,埋线后第10天局部信号强度较前减弱,埋线后第14天局部信号强度明显减弱。②与埋线前比较,埋线后各时间点T2值均显著升高(均P<0.01);埋线后1周内各时间点之间比较:埋线后8 h、埋线后第3天、埋线后第7天T2值比较差异无统计学意义(均P>0.05);埋线7d(1周)后各时间点之间比较:埋线后第10天T2值与埋线后第7天相比差异无统计学意义(P>0.05),埋线后第14天(2周)T2值与埋线后第7天(1周)相比显著下降(P<0.01)。结论:PGLA线体埋入后对正常人体经穴局部存在刺激效应,且刺激效应具有一定时效性,其有效刺激时间约为2周,临床使用同规格型号的PGLA线体施行微创埋线时其合理的间隔周期建议为2周。