铁死亡相关蛋白SLC7A11及GPX4在肾细胞癌中的表达及意义

目的:探讨SLC7A11及GPX4在肾细胞癌及正常肾组织中的表达差异,初步分析SLC7A11及GPX4的表达情况与肾癌预后之间的关系。方法:采用免疫组化方法检测SLC7A11及GPX4在肾癌及正常肾组织中的表达,同时分析SLC7A11及GPX4表达水平与肾癌患者临床病理参数的相关性。采用Spearman法分析SLC7A11及GPX4之间表达的相关性,利用Kaplan-Meier生存曲线及Cox回归方法分析SLC7A11,GPX4表达的高低及临床因素对肾癌患者预后产生的影响。结果:SLC7A11及GPX4在肾癌中为高表达,而在正常肾组织为低表达(P<0.05),SLC7A11及GPX4蛋白表达与肾癌大小、远处转移及临床分期密切相关,SLC7A11与GPX4之间呈正相关(r=0.583,P<0.01)。在肾癌组织中,SLC7A11,GPX4表达阳性的患者与阴性表达的患者相比预后较差(P<0.05)。多因素分析提示肾癌大小、远处转移、临床分期、SLC7A11及GPX4是影响肾癌预后的独立因素。结论:SLC7A11及GPX4在肾癌中高表达,可能参与了肾癌的发生,SLC7A11或GPX4高表达的肾癌患者预后不良,未来可能成为肾癌治疗新靶点。

LncRNA GATA2-AS1在肾癌组织中的表达及其对肾癌细胞ACHN恶性生物学行为的影响

目的:检测长链非编码RNAs(lncRNAs)GATA2-AS1在肾细胞癌(RCC)组织及肾癌细胞株中的表达,并探讨其表达与患者临床病理资料之间的相关性。研究过表达GATA2-AS1对肾癌ACHN生物学行为及上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:应用实时荧光定量多聚核苷酸酶链式反应(RT-qPCR)检测GATA2-AS1在71例肾细胞癌组织和与其相对应癌旁正常组织以及肾癌细胞株(786-O、ACHN)中的表达。通过建立过表达载体pcDNA3.1-GATA2-AS1并转染ACHN细胞,应用RT-qPCR法检测转染效率。应用细胞增殖实验(MTS)、克隆形成实验检测GATA2-AS1过表达对ACHN细胞体外增殖能力的影响。应用划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测GATA2-AS1过表达对ACHN细胞体外迁移能力及侵袭能力的影响。应用RT-qPCR法检测GATA2-AS1过表达对EMT进程中相关标志物(E-cadherin、N-cadherin及Vimentin)表达水平的影响。结果:GATA2-AS1在两株肾癌细胞系中相对表达量均明显下调(P<0.01),其中ACHN细胞的GATA2-AS1表达水平最低。GATA2-AS1在RCC组织中的相对表达量显著低于癌旁组织(P<0.01),GATA2-AS1在RCC组织中的表达水平与TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05或P<0.01)。成功构建过表达载体pcDNA3.1-GATA2-AS1并转染肾癌细胞ACHN,GATA2-AS1过表达组的相对表达量显著高于对照组(P<0.01)。GATA2-AS1过表达后可显著抑制ACHN细胞的在体外的增殖、迁移及侵袭能力(P<0.05或P<0.01)。同时E-cadherin表达水平上调,间充质标志物N-cadherin、Vimentin表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:GATA2-AS1在RCC组织及肾癌细胞株中低表达情况,与患者TNM分期及淋巴转移有关。GATA2-AS1过表达可以显著抑制肾癌细胞的体外增殖、迁移、侵袭能力及EMT的进程。

桧木醇诱导人肾透明细胞癌786-O细胞凋亡及其机制研究

目的:探讨桧木醇(hinokitiol)对人肾透明细胞癌786-O细胞株的增殖抑制作用及诱导凋亡效应,初步阐明其机制。方法:采用CCK-8法检测桧木醇对肾癌786-O细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡情况;转染EGFP-LC3后镜下观察细胞自噬状态;采用Western blot对细胞Caspase-3剪切体、LC3和P62蛋白表达量进行检测。结果:桧木醇可以显著抑制肾癌786-O细胞增殖,通过激活Caspase途径诱导细胞凋亡。桧木醇诱导肾癌786-O细胞发生自噬,LC3蛋白表达显著上调,而P62蛋白表达下调。结论:桧木醇可显著抑制肾癌786-O细胞的增殖并通过过度激活细胞自噬促进肾癌细胞凋亡。

河北医科大学第四医院前列腺癌患者的基线特征与生存分析

背景与目的:近年来,前列腺癌发病率逐年增高,但前列腺癌筛查工作仍不全面,国内前列腺癌数据库也相对匮乏。分析河北医科大学第四医院前列腺癌患者的基线特征、治疗以及生存情况等数据,为河北及周边地区前列腺癌的诊治提供参考。方法:回顾性分析2008年1月-2018年12月在河北医科大学第四医院泌尿外科就诊的857例前列腺癌患者信息,分析初次就诊时非转移性(M0)和转移性(M1)前列腺癌患者的基线特征、治疗方案和生存情况。对随访数据采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并用log-rank检验比较两组之间生存率差异。结果:纳入基线统计的患者共计857例,中位年龄71岁,797例存在前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)记录,689例存在Gleason评分记录。412例M0患者和445例M1患者中,PSA≥100 ng/mL的患者分别占11.1%(44/397)和57.3%(229/400),Gleason评分≥8分的患者分别占46.9%(166/354)和63.9%(214/335)。纳入随访分析的患者共计606例,患者生存395例,死亡211例,其中182例死于肿瘤进展。M0和M1患者5年生存率分别为63.2%(76/120)和41.3%(102/247),M0和M1患者的中位生存期分别为85和47个月(P<0.01)。此外,在所有采用传统内分泌治疗[雄激素剥夺治疗(androgen deprivation therapy,ADT)或联合雄激素阻断治疗(combined androgen blockade,CAB)]的M1患者和高危转移性激素敏感性前列腺癌(metastatic hormonesensitive prostate cancer,mHSPC)患者中,中位PSA进展时间(time to PSA progression,TTPP)分别为18和17个月。内分泌治疗初诊M0患者的中位TTPP为25个月。12例影像学检测未发现远处转移的去势抵抗性前列腺癌(non-metastatic castrateresistant prostate cancer,NM-CRPC)患者,中位无转移生存期(metastasis-free survival,MFS)仅为16个月。结论:前列腺癌患者的年龄、PSA及Gleason评分偏高,多数患者在治疗时有转移,5年生存率偏低,因此应重视和加强前列腺癌的筛查工作。在接受内分泌治疗的M1患者进展为转移性去势抵抗性前列腺癌(metastatic castrate-resistant prostate cancer,mC RPC)的时间较短,此外,接受内分泌治疗的M0患者进展至NM-CRPC后,进展为mC RPC或死亡的时间也非常短,未来对于M1和NMCRPC患者应采取更为积极的治疗,以延缓病情进展到mC RPC阶段。

肾细胞癌中Wif-1基因的甲基化状态及表达

目的检测肾细胞癌(RCC)中Wnt抑制因子-1(Wif-1)基因的甲基化状态及表达水平,探讨其在肾细胞癌发生发展中的可能机制。方法分别应用甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测56例肾细胞癌及相应癌旁正常肾组织中Wif-1基因的甲基化状态及表达水平。结果 Wif-1基因在RCC组织中的甲基化率显著高于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。Wif-1基因在RCC组织中的相对表达量显著低于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。在RCC组织中,Wif-1基因甲基化阳性组mRNA的相对表达量与甲基化阴性组mRNA的相对表达量比较无显著差异(P>0.05)。结论 Wif-1基因启动子区的高甲基化在肾细胞癌的发生中是一个频发事件。

粉防己碱对膀胱癌T24细胞的凋亡诱导和自噬抑制作用

目的 :研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)对人膀胱癌细胞增殖、凋亡以及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法 :应用Tet作用几种膀胱癌细胞后,CCK-8法检测细胞增殖活性及Tet的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。Tet处理膀胱癌T24细胞后,FCM法检测细胞凋亡状态,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3的剪切情况;同时,用Z-VAD-FMK抑制caspase活性后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性。应用Tet处理转染了重组质粒EGFP-LC3的T24细胞,激光共聚焦显微镜下观察细胞自噬体形成情况。蛋白质印迹法检测Tet处理前后T24细胞中自噬相关标志蛋白LC3和P62的表达量。应用LC3反转实验验证Tet对T24细胞自噬流的影响。同时,使用3-MA抑制自噬体形成后,再采用CCK-8法检测膀胱癌T24细胞的增殖活性变化。结果 :Tet可以显著抑制膀胱癌细胞增殖(P<0.01),Tet作用5637、T24、EJ和J82细胞48 h的IC50值分别为(8.03±1.2)、(6.71±0.99)、(4.93±0.72)和(2.72±0.24)μmol/L。Tet能够激活caspase-3,显著诱导T24细胞凋亡(P<0.01);而Z-VAD-FMK能够部分抑制Tet的凋亡诱导作用(P<0.05)。Tet处理重组质粒EGFP-LC3转染的T24细胞后,EGFP-LC3荧光点数量较药物未处理组明显增加(P<0.01)。Tet作用后,T24细胞中LC3-Ⅱ蛋白和P62蛋白的表达水平明显上调(P<0.05)。LC3反转实验证明,Tet处理后膀胱癌细胞自噬流下游发生阻断;而3-MA抑制自噬上游信号后,Tet的抗增殖作用不能被逆转(P>0.05)。结论 :Tet可显著抑制T24细胞的增殖,诱导细胞凋亡,阻断细胞自噬。

调节性B细胞促进前列腺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制研究

调节性B细胞(regulatory B cell,Breg)是机体内分泌IL-10的主要细胞,在肝癌等恶性肿瘤免疫中发挥重要作用。研究将2015年6月至2017年12月来河北医科大学第四医院就诊的前列腺癌和良性前列腺增生患者纳入研究范围,免疫组化法检测良、恶性组织中IL-10水平和Ki-67增殖指数;流式细胞术检测外周血CD19^+IL-10^+Breg百分比;MTT实验检测前列腺癌细胞增殖率;Transwell侵袭实验检测前列腺癌细胞侵袭能力。免疫组化结果显示良性前列腺增生组织中IL-10平均光密度(average optical density, AOD)为12.60±2.72,Ki-67增殖指数为(3.00±0.84)%,前列腺癌组织中IL-10的AOD为86.10±11.49,Ki-67增殖指数为(45.30±4.11)%(t=6.23,P<0.000 1;t=10.08,P<0.000 1);流式细胞术检测结果显示良性前列腺增生患者外周血中Breg百分比为(0.14±0.03)%,前列腺癌患者外周血中Breg百分比为(0.41±0.04)%(t=5.082,P<0.000 1);相关性分析结果显示前列腺癌患者和良性前列腺增生患者外周血Breg百分比与组织中IL-10表达水平和Ki-67增殖指数均呈显著正相关(r=0.701 9,P=0.000 6;r=0.784 3,P<0.000 1);MTT及Transwell实验结果显示Breg促进前列腺癌细胞增殖和侵袭,IL-10在其中发挥重要作用。综上,Breg在前列腺癌患者外周血中所占比例显著升高,能够通过分泌IL-10促进前列腺癌细胞增殖和侵袭,这可能为前列腺癌的免疫治疗提供新靶点。

长链非编码RNALOC100130476在肾细胞癌的表达及启动子区甲基化状态

目的:探讨LOC100130476在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)中的表达及启动子区甲基化状态。方法:应用RT-qPCR和甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测RCC中LOC100130476的表达及启动子区甲基化状态,并分析与临床病理资料的关系;DNA甲基转移酶抑制剂(5-Aza-dC)干预后的肾癌细胞系中,采用RT-qPCR检测LOC100130476的表达及甲基化状态。结果:RT-qPCR显示,LOC100130476在RCC组织的表达明显低于正常组织(0.593±0.306vs1.000±0.018,t=-11.143,P<0.001),并与淋巴结转移(t=2.774,P=0.007)及临床分期(F=5.436,P=0.002)相关。LOC100130476在3株肾癌细胞系(A498、ACHN、786-O)的相对表达量均低于对照组(HK-2)(F=107.068,P<0.001)。5-Aza-dC处理后,LOC100130476的表达均增高。MSP显示,RCC组织的甲基化率明显高于正常组织(χ^(2)=33.273,P<0.01),并与淋巴结转移有关(χ^(2)=4.250,P=0.039);3株肾癌细胞系经5-Aza-dC处理后,A498、786-O中LOC100130476甲基化消失,ACHN中LOC100130476甲基化降低,3种细胞中LOC100130476非甲基化增高。结论:LOC100130476在RCC中低表达,并呈高甲基化状态,其高甲基化可能是肾癌发生发展的分子机制之一。

肾细胞癌中WNK2基因甲基化状态与mRNA表达的研究

目的探讨WNK2基因在肾细胞癌(RCC)发生及发展中的作用。方法选取2016年5月至2017年6月本院的肾肿瘤患者58例,分别应用甲基化特异性PCR(MSP)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测其RCC及相应癌旁组织、正常组织标本中WNK2基因甲基化状态和mRNA表达情况。结果在58例RCC组织、癌旁组织及正常组织中的WHK2甲基化阳性率分别为65.52%(38/58),34.48%(20/58),10.34%(6/58)。RCC组织中WNK2基因甲基化阳性率明显高于癌旁组织及正常组织。而癌旁组织及正常组织中WNK2基因甲基化发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在RCC组织中WNK2基因启动子区甲基化的发生率在患者的不同年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、组织学分级等临床资料间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);WNK2 mRNA在RCC和癌旁组织、正常组织中的相对表达量分别为(0.54±0.03)、(0.66±0.02)、(0.68±0.02),RCC组织中WNK2 mRNA相对表达量明显低于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),但癌旁组织及正常组织中WNK2 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在RCC组织中WNK2基因mRNA相对表达量在患者的不同年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、组织学分级等临床资料间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);甲基化阳性组中WNK2基因的mRNA相对表达量显著低于甲基化阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论WNK2基因启动子区甲基化及其mRNA相对表达量降低可能参与了RCC的发生,但与RCC的临床进展无关。WNK2基因启动子区发生甲基化可能是引起其mRNA相对表达降低的原因之一。