连续棒状弱阳离子交换柱的合成及其对蛋白质保留行为

以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂在空管柱内就地 聚合制备了一种聚合物连续棒状色谱基质，并通过“在线”化学改性将其修饰为弱阳离子交换 柱。考察了该色谱柱的孔结构特征、表面亲水性能、对标准蛋白的分离效果和ｐＨ值对保留 行为的影响以及色谱柱的重现性。结果表明，该色谱柱对蛋白的分离性能及重现性良好，柱 寿命不短于半年。对溶菌酶的活性回收率达９６．２％。流动相流速为 ８．０ｍＬ／ｍｉｎ条件下，在 ３．５

用参数Z表征疏水色谱中脲浓度与蛋白质分子的构象变化

研究了５种标准蛋白在流动相中含有不同脲浓度条件下的疏水色谱保留行为。当脲 浓度不变时，蛋白质的保留仍然服从计量置换保留模型，并可测定在该特定脲浓度条件下蛋白质的Ｚ值。计量置换参数Ｚ可作为疏水色谱中生物大分子构象变化的表征。蛋白质的Ｚ值随脲浓度的增大而减小。除分子构象变化的因素外，Ｚ值变化与脲参与置换剂分子间的计量置换过程有关。Ｚ值变化的连续性与否直接反映了蛋白质分子构象的连续性变化或突变。

一种金属螯合连续棒色谱柱的制备及色谱性能

A procedure for the preparation of continuous rod consisting of poly(glycidyl methacrylate\|co\|ethylene dimethacrylate) for immobilized metal affinity chromatography (IMAC) is presented. When chelating Cu(Ⅱ), Zn(Ⅱ) or Ni(Ⅱ) on it, the rod displayed a property of IMAC and the selectivity for protein separation was different from that obtained from the naked rod. An abnormal increase in retention times of proteins was found under the condition of either very high pH or very low pH on the metal chelated rods.

表面引发原子转移自由基聚合在分离材料制备中的应用

基于固相吸附的分离富集技术在生命、环境、化工、制药等领域具有广泛应用。吸附剂的吸附容量以及选择性对提高目标物的分离富集效率有重要作用。文中拟结合课题组的研究工作,对近年来发展的表面原子转移自由基聚合技术、以及用该技术制备的高容量和选择性吸附剂及其在分离富集中的应用进展进行评述,以期对这一领域发展、研究趋势及寻求新的研究突破点提供帮助。

参数Z对疏水色谱中胍变蛋白质分子构象变化的表征

用计量置换参数Ｚ对疏水色谱流动相中存在盐酸胍时蛋白质分子构象变化进行了表征。除溶菌酶外，其余４种蛋白质的Ｚ值随盐酸胍浓度的增大先增大，而后减小。将盐酸胍和脲对蛋白质Ｚ值的影响进行了比较后发现，在疏水色谱中Ｚ值作为蛋白质分子构象变化表征的一个重要的结论是随变性剂浓度的增大，埋藏在蛋白质分子内部的疏水性氨基酸残基暴露到分子表面的程度逐渐增大，造成了Ｚ值随蛋白质分子构象变化程度的增大而减小。蛋白质的Ｚ值随盐酸胍及脲浓度变化的不同特点，反映了两者对蛋白质变性机理的不同。

用芳香醇同系物研究疏水色谱的保留机理

首次研究了芳香醇同系物在疏水色谱 (HIC)中的保留行为。同系物的保留符合同系物规律。随绝对温度倒数的增加 ,保留值先增大而后减小 ,符合Van′tHoff曲线方程。用计量置换保留模型中的参数表征了同系物分子的性质 ,揭示了HIC中小分子的保留在本质上与反相色谱相同 ,均由非选择性疏水作用力所控制。证明了用中性小分子作为溶质研究HIC保留机理是一个新方法 。

复方丹参方中使药冰片对君药丹参药代动力学的影响

目的探讨复方丹参方中使药冰片对君药丹参在新西兰大白兔体内药代动力学过程的影响。方法丹参组、丹参-冰片配伍组水煎液灌胃给药,液-液萃取法提取血浆中的丹参素,以对羟基苯甲酸为内标,采用离子阱质谱多级反应模式(MRM)测定兔血浆和脑脊液中丹参素的质量浓度,DAS数据处理软件计算药动学参数。结果丹参-冰片配伍给药可使丹参中丹参素的药动学参数t1/2αt、1/2β、kα、AUC(0-∞)较单独给药时明显增大,丹参素的脑血比提高。结论复方丹参方中,使药冰片可提高君药丹参中丹参素的生物利用度,减慢代谢,促进血脑屏障对丹参素的通透性。该研究可为“君-使”对药体内作用机制的研究提供思路。

秦始皇兵马俑彩绘胶料的气相色谱-质谱联用分析

采用气相色谱-质谱联用技术,结合C4柱固相萃取、氨水超声辅助萃取、离子交换树脂净化以及微波辅助水解/皂化等步骤,建立了对同一个文物样品进行蛋白、脂肪酸和糖类物质分析的方法。利用此方法分析了秦始皇兵马俑彩绘所使用胶料中的氨基酸、脂肪酸和糖类物质,结果表明,秦俑彩绘样品使用的胶料为蛋白类物质,但残留量较低(仅有0.89‰)。通过样品胶料的氨基酸组成特点,即均含有动物胶的特征氨基酸羟基脯氨酸,以及甘氨酸、谷氨酸及脯氨酸的相对含量,结合因子分析,判断7件文物样品的胶料为蛋类与动物胶的混合物, 2件为动物胶与奶类的混合物, 1件为动物胶、奶类和蛋类的三元混合物。本研究结果表明,秦俑彩绘制作时的胶料选择可能并没有严格一致的规定,当前秦俑彩绘易于脱落的另一重要原因是胶料残留量少,出土后应立即进行加固处理。

强极性中药组分的亲水作用色谱保留行为

采用亲水作用色谱模式,以二醇基硅胶为固定相,水-有机溶剂为流动相,通过改变流动相中有机溶剂种类及浓度、缓冲盐、有机酸种类及其浓度、柱温等条件,研究了强极性中药组分在亲水作用色谱中的保留行为。结果表明:流动相中水的比例在0～100%(V/V)变化时,溶质保留呈"U"型曲线,属于亲水色谱和反相色谱的混合保留机理。水含量在0～50%(V/V)范围时,亲水作用控制溶质的保留。溶质保留随流动相中缓冲盐浓度的增大而增强。对于酸性溶质,其保留随有机酸三氟乙酸、甲酸、乙酸的酸性降低而增大。

聚乙烯四唑型螯合树脂及其对重金属离子的吸附性能

采用表面引发原子转移自由基聚合(SI-ATRP)方法将丙烯腈(AN)接枝到氯甲基化聚苯乙烯树脂(PS-CH2Cl)表面,再与叠氮化钠进行3+2环加成反应,制备了一种聚乙烯四唑型螯合树脂(PVT-g-PS).用红外光谱和元素分析对PVT-g-PS树脂进行了表征,考察了该树脂对Pb(Ⅱ),Ni(Ⅱ)和Cd(Ⅱ)的吸附性能.在一定聚合时间范围内,丙烯腈接枝率与SI-ATRP时间呈线性关系,树脂表面四唑含量及树脂对金属离子的吸附容量随丙烯腈接枝率增大而增大,说明丙烯腈在树脂表面聚合为活性可控聚合,树脂表面功能团含量和树脂吸附容量可以用聚合时间调控.通过分析树脂吸附容量与溶液pH值的关系、吸附等温线和吸附动力学,证明3种金属离子的吸附主要是基于配位作用的化学吸附.当SI-ATRP时间为10 h时,树脂对Pb(Ⅱ),Ni(Ⅱ)和Cd(Ⅱ)吸附容量高达1.57,1.68和1.92 mmol/g.经过10次吸附-解吸循环实验,树脂的吸附容量无显著变化,表明新型树脂具有较高的吸附量和良好的重复使用性.

线性参数logI对反相液相色谱中的非极性小分子溶质体系的表征

从理论上阐明了计量置换平衡常数的对数ｌｏｇＫ．对液相色谱（ＬＣ）中计量置换保留模型的线性参数ｌｏｇＩ起着主导作用。ｌｏｇＩ表示溶质对固定相的亲合势，且具有热力学平衡常数的性质。指出ｌｏｇＩ作为ＬＣ中对非极性小分子溶质、固定相和流动相性质的表征参数的可能性，并用非极性小分子溶质对上述的预计进行了检验，符合程度甚佳。还发现ｌｏｇＩ与绝对温度倒数有线性关系。

RP-HPLC法研究广枣在家兔体内的药代动力学

目的:建立家兔血浆中没食子酸和原儿茶酸含量的反相高效液相色谱分析方法,并研究了2种成分在正常家兔体内的药代动力学。方法:给家兔灌服广枣水煎液,采用 RP-HPLC 测定广枣水提液灌胃后广枣酚酸在兔体内的血药浓度,DAS 2.0药动学软件拟合房室模型,计算药动学参数。结果:没食子酸和原儿茶酸在0.04～2.0μg·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系,检出限为0.563μg·mL^(-1),平均回收率均大于95%,精密度和稳定性试验的 RSD 均小于5%;没食子酸呈二室开放模型,原儿茶酸血浆轮廓出现双峰现象,广枣药材中的未知成分含量在家兔体内明显增加。结论:该方法可用于没食子酸和原儿茶酸体内的药代动力学研究;原儿茶酸可能在胃肠中存在不同的吸收位点或存在肝肠循环。

LC-MS／MS法研究活血化瘀方中丹参素在兔体内的组织分布

目的：建立高效液相色谱-串联质谱分析方法，研究丹参-郁金中丹参素在兔体内的组织分布。方法：免灌胃给予丹参-郁金水煎液后，于30，50，70min处死，取心、脑、肝、肾、肺、脾组织，10％高氯酸沉淀组织蛋白，上清液2倍量乙酸乙酯萃取3次，氮气吹干，残渣用流动相溶解，高效液相色谱-串联质谱法测定各组织中的丹参素含量。结果：检测限为0．01μg／mL，线性范围为0．05～400．0μg/mL，方法回收率为83．2％～105．6％；丹参中丹参素在各组织中的分布特征为：肾〉脑〉肝〉脾〉肺〉心。结论：该方法精密、灵敏、准确，可用于其他生物样品中丹参素的测定。

多羟基化合物键合亲水色谱固定相的制备及其分离性能

用硅胶与氨丙基三甲氧基硅烷反应,再与δ-葡萄糖酸内酯反应,制备了一种多羟基化合物键合的新型亲水色谱固定相。以水-有机溶剂(乙醇、乙腈、四氢呋喃)为流动相,通过改变流动相中有机溶剂的种类及浓度、缓冲盐浓度和柱温,考察了该固定相对6种强极性中药组分的保留行为和保留机理。当水的比例在0～40%(v/v)范围时,溶质的保留随着流动相中水的比例的增大而减小,属于典型的亲水色谱分离模式;而当流动相中水的比例在0～100%(v/v)范围内变化时,溶质的保留随着水的比例变化呈"U"形曲线,属于亲水色谱和反相色谱的混合保留机理。缓冲盐的浓度和pH效应说明,所选用的中药组分与所制备的固定相间还存在弱的静电作用。该固定相对6种中药组分以及丹参注射液具有良好的分离性能,表明其在强极性中药有效成分的分离及其他强极性物质的分离分析中具有一定的应用前景。

以四唑为固定相配体的新型离子交换固定相的制备及色谱性能

用硅胶与γ-缩水甘油基丙基三乙氧基硅烷和3-羟基丙腈反应,再采用链接化学(Click chemistry)中腈与叠氮化钠进行的3+2环加成反应,合成了以四唑基为配体的弱阳离子交换色谱固定相.结果表明,所制得的色谱柱(4.6mm×50mm,i.d.)对蛋白质具有良好的分离性能,且质量回收率大于93%.蛋白质在该固定相上的保留符合弱阳离子交换色谱机理,但保留值随流动相pH的变化规律与蛋白质在以羧基为交换基团的固定相上的保留值的变化规律不同,并对此现象进行了初步解释.

胍变及脲变α-淀粉酶的研究 Ⅰ.用高效疏水色谱法研究变性机理和复性效率

用疏水性强弱不同的两种色谱柱对７．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍及８．０ｍｏｌ／Ｌ脲变性的α－淀粉酶变体和在疏水色谱介质表面上折叠的中间体进行了分离和复性。通过研究和比较发现，两者的变性机理和形成折叠中间体的个数以及复性效率均不相同。在用疏水性较弱的疏水色谱柱对脲变α－淀粉酶的折叠中间体进行分离时，得到了疏水性接近连续的、数目很多的中间体。用疏水性较强的疏水色谱柱对胍变α－淀粉酶进行复性的效果较好。还研究了柱温变化对其折叠、分离效果和复性效率的影响。

红外光谱结合PCA-LDA对嘉峪关戏台文物建筑彩画胶料种类的判别

为了判别嘉峪关戏台文物建筑彩画的胶料种类,采用皮胶、鱼鳔胶、蛋清、蛋黄、牛奶为参考样品,使用傅里叶红外光谱仪采集了参考样品及三件文物样品胶料的红外吸收光谱,利用主成分分析结合线性判别分析(PCA-LDA)构建胶料种类判别的数学模型,并应用于文物样品。发现参考样品红外光谱在1800~1000 cm^(-1)区间包含了丰富的分子结构特征信息。该区间中蛋白类胶料的共同特征为1650 cm^(-1)附近的仲酰胺C=O键伸缩振动峰,1542 cm^(-1)附近的酰胺C—N键伸缩振动和N—H键弯曲振动峰,1240 cm^(-1)附近的酰胺C—N键伸缩振动峰。此外,蛋黄、皮胶和牛奶因其中含有较多脂类物质,在1745 cm^(-1)附近还存在饱和脂肪酸酯羰基C=O键伸缩振动峰。在此基础上,通过对参考样品红外吸收光谱主成分得分散点图的分析,发现不同胶料参考样品的红外光谱类间差异显著。据此,使用参考样品红外光谱的主成分得分为训练集,添加类别变量拟合判别函数,绘制函数组质心图并进行交叉验证,得出方程的判别正确率为93.3%。发现因老化降解导致三件文物样品的红外吸收光谱与参考样品光谱有所不同,但仍具有蛋白类胶料的特征。利用PCA-LDA分析模型对文物胶料种类进行判别,结果均为皮胶。该胶料种类判别模型稳定、有效,用该模型判定嘉峪关建筑彩画胶料为动物胶中皮胶。

用高效疏水色谱法对多种脲变α-淀粉酶折叠中间体的研究

用高效疏水色谱法对用脲变性的α-淀粉酶的体外折叠中间体进行了分离，发现脲变α-淀粉酶折叠至少有19个中间体，而且，这些中间体在色谱流出液中可稳定一周．这一结论已由电泳、离子交换色谱和体积排阻色谱法证实．此外，还用紫外吸收光谱和荧光发射光谱研究了这些折叠中间体与天然α-淀粉酶构象之间的差异．

盐酸异丙肾上腺素与牛血清蛋白相互作用的光谱研究

本研究采用紫外和荧光光谱分析法研究了生理pH条件下盐酸异丙肾上腺素(HAI)与牛血清白蛋白(BSA)在不同温度(25℃和37℃)下的相互作用。实验结果表明,HAI使BSA紫外吸收峰增强,并使BSA的特征荧光峰猝灭,表明HAI与BSA形成结合物。HAI对BSA荧光猝灭机制为静态猝灭,属于单位点结合。25℃时两者之间的结合常数为7.41×103L·mol-1,ΔG为-22.10 kJ·mol-1,ΔH为25.86 kJ·mol-1,ΔS为940 J·mol-1。37℃时的结合常数为4.26×105L·mol-1,ΔH和ΔS与25℃时相同,ΔG为-33.41 kJ·mol-1。以上热力学参数表明HAI与BSA之间的结合属自发过程,两者之间的作用力以疏水作用为主。根据Fster非辐射能量转移理论计算出HAI与BSA间的结合距离为2.503nm。

CS-HPLC-ESI-MS^n法分析复方丹参滴丸的代谢指纹图谱(英文)

目的:建立舌下含服复方丹参滴丸后人血浆中活性成分的代谢特征指纹图谱。方法:在不同时间点采集人血浆样品,通过微血管张力实验测试血管扩张效果,采用柱切换系统对样品进行富集纯化。结果:1.5h采集的血浆扩张血管能力最强,在色谱图中出现5个新的色谱峰。结论:色谱图中5个特征色谱峰与复方丹参滴丸的药效物质基础关系密切。