lncRNA NONHSAT070341在宫颈癌中的差异表达及其对宫颈癌细胞生物学特性的影响

目的:探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)NONHSAT070341在宫颈癌组织及细胞系SiHa和Caski中的表达及其对宫颈癌细胞生物学功能如增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞周期分布的影响。方法:收集2021年06月至2022年06月于山西医科大学第二临床医学院妇产科行手术切除的处于不同宫颈病变阶段的患者90例,以30例同期因子宫肌瘤行子宫全切术的正常宫颈组织作为对照,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测宫颈癌组织及细胞系中lncRNA NONHSAT070341的表达情况;在SiHa及Caski细胞中瞬时转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰片段来靶向敲低lncRNA NONHSAT070341,并采用qRT-PCR验证转染效率;通过CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,细胞周期实验检测对宫颈癌细胞周期分布的影响,划痕愈合实验评估细胞横向迁移能力,Transwell实验检测细胞纵向迁移及侵袭能力,流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果:lncRNA NONHSAT070341在宫颈癌组织和细胞中高表达;NONHSAT070341 siRNA可降低SiHa和Caski细胞中NONHSAT070341的表达;敲低NONHSAT070341后,宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显降低,细胞停滞在G 1期,影响了宫颈癌细胞周期的分布,但却增加了SiHa和Caski细胞的凋亡率。结论:NONHSAT070341可促进宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭,改变了宫颈癌的生物学行为并有望成为诊断宫颈癌的一个新兴生物标志物。

叶酸、DNA甲基化在宫颈癌变中作用的研究进展

宫颈癌是严重威胁妇女生命健康的常见恶性肿瘤之一。叶酸为体内最重要的甲基提供者S-腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)合成的必需物质,广泛参与体内DNA甲基化,与肿瘤的发生和发展密切相关。近年研究显示,叶酸缺乏通过介导体内DNA甲基化异常在宫颈癌变过程中发挥协同作用,越来越受到学者的重视。本文就叶酸、DNA甲基化在宫颈癌变中的作用展开综述,以期为宫颈癌预防性药物的发现或靶向治疗的发展寻求新突破。

环状RNA与宫颈癌发病机制的研究现状

宫颈癌是最常见妇科恶性肿瘤之一,其发病率和导致的患者死亡率均居全球癌症第4位。目前已明确宫颈癌的发生、发展与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续感染有关。环状RNA(circRNA)是一种新型内源性非编码RNA(ncRNA),与其他种类RNA相比,circRNA的3个主要特征为进化保守性、结构稳定性和组织特异性。不同种类circRNA在宫颈癌中异常表达,可通过调控其相应结合元件参与宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭等,从而在宫颈癌的发生、发展中发挥重要作用。笔者拟就circRNA的生物学功能及其在宫颈癌发病机制中作用的最新研究进行阐述,旨在为宫颈癌的诊疗提供新靶点。

microRNA-154-5p靶向枯灵素2对人乳头瘤病毒16阳性子宫颈癌细胞的抑制作用研究

目的探讨microRNA-154-5p(miR-154-5p)靶向枯灵素2(Cullin2,CUL2)对人乳头瘤病毒(HPV)16型阳性子宫颈癌细胞的作用。方法收集山西医科大学第二医院妇产科2018年1月至2020年12月单一HPV16阳性的正常子宫颈(对照组)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)和子宫颈鳞状细胞癌(CSCC)组织各20份。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学(IHC)分别检测4组子宫颈组织中miR-154-5p和CUL2蛋白的表达情况。双荧光素酶报告分析明确miR-154-5p与CUL2的靶向调控关系。利用慢病毒载体介导的DNA重组技术构建稳定高、低表达miR-154-5p的SiHa细胞,分为miR-154-5p过表达组(Lv-miR-154-5p-OE组)和miR-154-5p沉默组(Lv-miR-154-5p-Sp组),对照组为转染空慢病毒载体的SiHa细胞(LvControl组)。RT-qPCR验证构建效果后,分别采用蛋白免疫印迹(Western blot)、细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)、划痕和Transwell侵袭实验评估差异表达miR-154-5p对CUL2蛋白表达量及SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果RT-qPCR结果表明,LSIL、HSIL和CSCC 3组中miR-154-5p表达量均低于对照组(11.89±42.31、0.18±0.26、0.03±0.05 vs.288.97±486.64,P<0.05)。IHC结果显示,相较于对照组,LSIL、HSIL和CSCC 3组中CUL2蛋白的表达强度增强。双荧光素酶报告分析证实CUL2为miR-154-5p的下游调控基因。Lv-miR-154-5p-OE组SiHa细胞较Lv-Control组CUL2蛋白表达量少(0.87±0.01 vs.1.00±0.03,P<0.05)、增殖活力低(7.56±0.51 vs.24.80±1.98,P<0.05)、迁移指数小(0.41±0.07 vs.1.00±0.13,P<0.01)、侵袭能力弱(35.33±3.22 vs.66.00±10.15,P<0.01);而Lv-miR-154-5p-Sp组SiHa细胞较Lv-Control组CUL2蛋白表达量多(1.17±0.04 vs.1.00±0.03,P<0.05)、增殖活力高(31.16±0.70 vs.24.80±1.98,P<0.05)、迁移指数大(1.97±0.13 vs.1.00±0.13,P<0.001)、侵袭能力强(134.67±9.29 vs.66.00±10.15,P<0.01)。结论miR-154-5p通过靶向调控CUL2抑制HPV16阳性子宫颈癌细胞的生长,有望成为子宫颈癌治疗的潜在靶点。

miR-154-5p调控CUL2对子宫颈癌裸鼠模型的抑制作用研究

目的探讨微小RNA 154-5p(miR-154-5p)调控枯灵素2(CUL2)对子宫颈癌裸鼠模型的抑制作用。方法(1)采用慢病毒转染技术,建立并筛选稳定过度表达miR-154-5p的子宫颈癌SiHa细胞株(miR-154-5p-OE组),以转染慢病毒空载体的SiHa细胞作为对照组(miR-154-5p-CO组),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测两组细胞中miR-154-5p和CUL2 mRNA的表达。将两组SiHa细胞悬液接种于裸鼠皮下,建立裸鼠皮下移植瘤模型,测量移植瘤体积。49 d后处死miR-154-5p-OE组和miR-154-5p-CO组裸鼠,剥离移植瘤,采用qRT-PCR技术、蛋白印迹(western blot)法和免疫组化法检测两组裸鼠移植瘤组织中miR-154-5p及CUL2 mRNA和蛋白的表达。(2)建立并筛选miR-154-5p与CUL2同时稳定过度表达的SiHa细胞株(CUL2-OE组),以转染过度表达miR-154-5p载体和空基因序列载体的SiHa细胞作为对照组(CUL2-CO组),进行功能回复实验,qRT-PCR技术检测两组细胞中CUL2 mRNA的表达。将两组SiHa细胞悬液接种于裸鼠皮下,建立裸鼠皮下移植瘤模型,测量移植瘤体积。(3)将miR-154-5p-CO组和miR-154-5p-OE组带有绿色荧光蛋白(GFP)的SiHa细胞悬液注射于裸鼠尾静脉内,建立裸鼠转移瘤模型,60 d后处死裸鼠,解剖肝、脾、肺、肾、子宫,采用小动物活体光学成像系统检测各器官的GFP信号强度。结果(1)与对照miR-154-5p-CO组SiHa细胞比较,miR-154-5p-OE组SiHa细胞中miR-154-5p表达水平显著升高(分别为1.00±0.23、22.30±16.29;t=3.92,P=0.001),CUL2 mRNA表达水平显著下降(分别为1.00±0.95、0.62±0.07;t=9.67,P<0.001)。接种49 d后,与对照miR-154-5p-CO组裸鼠比较,miR-154-5p-OE组裸鼠移植瘤体积显著缩小[分别为(554.6±108.3)、(84.9±47.4)mm3;t=4.17,P<0.001];miR-154-5p-OE组裸鼠移植瘤组织中miR-154-5p表达水平显著升高(P<0.001),CUL2 mRNA和蛋白的表达水平均显著下降(P均<0.01)。(2)功能回复实验中,与CUL2-CO组SiHa细胞比较,CUL2-OE组SiHa细胞中CUL2 mRNA表达水平显著升高(分别为1.00±0.17、6.24±0.88;t=10.13,P<0.001)。接种31 d后,与对照CUL2-CO组裸鼠比较,CUL2-OE组裸鼠移植瘤体积显著增大[分别为(4.5±0.4)、(18.4±6.5)mm^(3);t=2.64,P=0.020]。(3)60 d后处死肿瘤转移模型裸鼠,空白组、miR-154-5p-CO组、miR-154-5p-OE组裸鼠的肝、脾、肺、肾、子宫的GFP信号强度分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.001);且与miR-154-5p-CO组相比,miR-154-5p-OE组裸鼠的肺、子宫的GFP信号强度均显著下降(P均<0.001)。结论miR-154-5p可通过靶向调控CUL2在裸鼠体内发挥抑制子宫颈癌的作用,miR-154-5p可作为子宫颈癌治疗的潜在靶点。