基于响应面法优化芡实多糖提取工艺及其体外抗氧化研究

采用单因素实验和响应面法对芡实多糖的浸提工艺进行优化,并探讨其体外抗氧化活性。以芡实多糖提取率为指标,分别考察浸提温度、浸提时间、料液比、pH和乙醇浓度5个单因素对芡实多糖提取率的影响。通过响应面法对4个主要工艺参数进行优化,得到芡实多糖最佳提取工艺条件为浸提温度95℃,浸提时间5.3 h,料液比1∶24 g/mL,乙醇浓度93%。在最佳提取工艺条件下,芡实多糖提取率为0.65%。体外抗氧化活性结果表明,在0.1~10.0mg/mL范围内,芡实多糖具有较好的体外抗氧化性能,芡实多糖对DPPH自由基、超氧阴离子和羟基自由基的最大清除能力分别为82.10%、58.91%和71.07%,芡实多糖也具有较好的总还原力。该研究结果可为创制以芡实多糖为主要原料的功能食品和营养补充剂提供理论基础。

低剂量的甲醛诱导MRC5损伤耐受差异表达基因的研究

目的 用荧光差异显示PCR(fluoroDD PCR)方法寻找低剂量的甲醛(FA)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC 5 )损伤耐受差异表达的基因。方法 用MTT方法得到FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系。根据剂量-反应关系选择对MRC 5几乎没有损伤或有增殖的剂量作为低剂量,对细胞有明显损伤的剂量为高剂量,然后用低剂量、高剂量、损伤耐受模式(低剂量预刺激后继而用高剂量刺激)三种方式处理细胞,通过荧光差异显示PCR技术寻找不同处理组与对照组比较差异表达的基因。对其中的11个差异条带进行二次PCR、克隆、测序,在GeneBank上通过Blast鉴定基因。结果 根据FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系,选择10 0 μmol L为低剂量、10mmol L为高剂量。然后按方法中所述的方式处理细胞后,用荧光差异显示PCR的方法发现有6 1个差异表达的基因。对其中的11个差异条带进行鉴定,发现有2个已知基因,分别与nuclearfactorofactivatedT cells 5 (NFAT5 )和tetratricopeptiderepeatdomain 3(TPRD 3)高度同源,其余9个为新基因。结论 FA在低剂量可以促进MRC 5的增殖,通过荧光差异显示PCR获得6 1个FA诱导MRC 5损伤耐受差异表达的基因,通过对其中11个差异条带的鉴定,为进一步研究FA诱导MRC 5损伤耐受的机制提供线索。

低剂量三氯乙烯诱导人正常肝细胞损伤耐受差异表达基因的研究

目的寻找低剂量三氯乙烯(TCE)诱导人正常肝细胞(L02)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的TCE对L02毒性剂量-效应关系,选择5μmolL的三氯乙烯为低剂量,40μmolL为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、损伤耐受组(先用低剂量刺激24小时,再用高剂量刺激6小时),然后用荧光差异显示PCR(FluoroDDPCR)寻找不同方式刺激差异表达的基因,并对差异表达基因进行克隆、鉴定。结果按方法所示的方式处理细胞,处理完毕后提取各组细胞总RNA,进行荧光差异显示PCR,找到51个差异条带。对其中的11个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中9个已知基因,2个新基因。结论用荧光差异显示PCR方法寻找TCE诱导L02损伤耐受过程差异表达的基因,通过鉴定基因,为进一步研究TCE诱导L02的损伤耐受的机理提供科学依据。

低剂量过氧化氢诱导机体适应性反应差异表达基因的研究

目的寻找低剂量过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,分别用低剂量、高剂量和低剂量预刺激后用高剂量攻击细胞,观察细胞生长的变化,得到低剂量H2O2诱导MRC-5的适应性反应模型。然后用荧光差异显示聚合酶链反应(FluoroDD-PCR)寻找不同方式刺激的差异表达基因。结果根据H2O2诱导MRC-5毒性的剂量反应关系,选择0.088、0.88、8.8、88μmol/L为低剂量,1100μmol/L为高剂量,用低剂量处理细胞24h,然后用高剂量刺激1h,可以观察到在0.88μmol/L预刺激细胞24h后,对继而1100μmol/L的刺激有明显的抵抗效应。对不同方式处理的细胞RNA进行FluoroDD-PCR,找到60个差异条带。对其中的15个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中7个已知基因,8个新基因。结论H2O2可以诱导MRC-5的适应性反应过程,用FluoroDD-PCR方法找到差异表达的基因。

低剂量过氧化氢、甲醛、三氯乙烯诱导细胞适应性反应模型的建立

目的探讨低剂量的环境化学污染物过氧化氢(H2O2)、甲醛(FA)、三氯乙烯(TCE)能否诱导真核细胞的适应性反应。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2、FA、TCE对细胞毒性的剂量反应关系。按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、适应性反应组(先用低剂量预刺激一定的时间后,再用高剂量进行攻击),观察细胞生长的变化,建立低剂量的H2O2、FA、TCE诱导细胞适应性反应的模型。结果0.88μmol/L的H2O2预刺激人胚肺成纤维细胞(MRC-5)24 h后,再用1 100μmol/L的H2O2刺激1 h,可以观察到适应性反应;以0.01 mmol/L甲醛预处理MRC-5细胞12 h后,再给予1 mmol/L的甲醛攻击4 h,可以观察到适应性反应;1μmol/L TCE刺激人正常肝细胞L-02 12 h后,再用30μmol/L TCE攻击24h,可以观察到适应性反应。结论低剂量的环境化学污染物H2O2、FA、TCE均可以诱导真核细胞的适应性反应。

麦硒康对地方性砷中毒患者血砷、血清总巯基的影响

目的 观察麦硒康治疗地砷病的初步疗效 ,为其进一步推广应用提供依据。方法 选择典型砷中毒病人 4 0例 ,服用麦硒康一个月 ,比较服药前后血砷 ,血清总巯基的变化。结果 服药前后血砷含量偏高 ,而血清总巯基含量较低 ;服药后 ,血砷水平降低 ,血清总巯基含量升高 ,两项指标在服药前后均有显著性差异。结论 麦硒康在一定程度上可拮抗砷对机体的损伤。

当代公共卫生人才培养存在的问题

随着社会的发展和人类健康意识的不断提高,21世纪公共卫生有了新的定位。当代公共卫生不仅与国民的健康有关,还与国土安全等许多问题有关,这是公共卫生发展的新方向,因此对公共卫生人才培养提出新的要求。目前公共卫生人才培养模式已经不能满足新时代公共卫生人才的需要,就当前公共卫生人才培养存在的问题作一探讨。

香味文具对中小学生健康的影响

文具是学生必不可少的学习用品，尤其是铅笔、橡皮、笔芯、荧光笔和涂改液等在中小学生中用得更为普遍。为了迎合市场需求，商家推出了香味文具。所谓香味文具就是在铅笔、橡皮、涂改液甚至纸张等文具中加入香味添加剂，使文具散发出香味。在文具中添加少量香精是被允许的，但许多企业在文具的生产过程中滥用劣质香料。由于劣质香料中往往含有芳香类、醛类等化合物，尽管这些物质的含量较低，但消费者长期接触，特别是儿童通过吸入、吮吸、啃咬方式会将这些化合物引人体内，从而造成人体慢性中毒，尤其会引起神经系统和血液系统等方面的疾病，对儿童的健康造成危害。本文就香味文具的市场状况、对儿童健康的影响及其可能的机理作一综述。

毒理学基础教学的实践和体会

毒理学基础是一门重要的预防医学基础课程，是从预防医学的角度研究外来化合物对机体的生物学作用特别是损伤作用及其机理的科学。随着研究范围不断扩大和交叉学科大量新原理与技术广泛应用，毒理学有了较快的发展。但因其涉及范围广，部分内容过于抽象，难懂难记。因此，结合教学工作实践和平时积累的经验，就毒理学基础教学过程中遇到的问题及其改革措施谈几点体会。

选修课毒物漫谈的教学体会

为加强学生对日常生活中毒物的防范意识，开设了毒物漫谈的选修课，主要介绍常见毒物的基本知识和理论，目的是让更多的人了解毒物的特征和防范措施，受到了学生的广泛欢迎，效果良好。但同时感觉到由于各方面条件的不足。该课程仍有不尽完善之处。着重从这门课教学目的、教学内容、教学模式和教学考核等方面，探讨教学过程中的一些体会和看法。

应用荧光DDRT-PCR初探低剂量的ECPs诱导细胞适应性反应的机理

[目的]用荧光DDRT-PCR技术寻找低剂量环境化学污染物(ECPs)过氧化氢(H_2O_2)、甲醛(FA),三氯乙烯(TCE)诱导细胞适应性反应差异表达的基因,为进一步研究低剂量的环境化学污染物(ECPs)诱导机体的生物学效应及其机理提供科学依据。[方法]依据H_2O_2、FA、TCE对细胞毒性的剂量反应关系,建立适应性反应的模型。然后用荧光DDRT-PCR寻找对照组、低剂量组、高剂量组,适应性反应组差异表达的基因,并鉴定和验证部分差异表达的基因。[结果]按照对照组、低剂量组、高剂量组、适应性反应组处理细胞后,DDRT-PCR结果显示各处理组与对照组比较:H_2O_2有60个差异条带、FA有61个,TCE有52个。选择差异比较明显的条带进行2次PCR,然后通过进一步克隆、测序、同源性比较发现一些已知基因如BCL-2、EIF3S5、NDUFS4、RPS10等。[结论]低剂量环境化学污染物诱导机体的适应性反应可能有维持细胞稳态、抗氧化系统、DNA损伤修复级激活细胞信号分子等过程的参与。

多媒体在毒理学教学中的利与弊分析

多媒体作为重要的、先进的教学手段,在毒理学教学中已有广泛的应用。多媒体教学与传统教学相比,在一些方面具有无法比拟的优势,但多媒体的使用不当也会给教学带来不利影响。因此,如何将多媒体技术更好地应用于毒理学的教学中,是毒理学教育工作者较为关注的问题。

应用FDDRT-PCR技术研究低剂量过氧化氢诱导细胞适应性反应的基因差异表达

目的用荧光差异显示RT-PCR(FDDRT-PCR)技术寻找低剂量的过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因,为进一步研究低剂量的环境化学污染物(ECPs)诱导机体的生物学效应及其机制提供科学依据。方法依据H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,选择低剂量和高剂量,并建立低剂量H2O2诱导MRC-5的适应性反应模型。用乳酸脱氢酶漏出率(LDH%)、Annexin V/PI检测细胞凋亡验证适应性反应模型。然后用FDDRT-PCR寻找不同方式刺激下差异表达的基因,鉴定和验证部分差异表达的基因。结果MTT获得适应性反应的模型,乳酸脱氢酶漏出率和Annexin V/PI检测细胞凋亡的结果都验证了适应性反应的模型。对不同方式处理的细胞RNA进行FDDRT-PCR,找到60个差异条带。对其中的5个差异条带进行鉴定,发现其中4个已知基因(bcl-2、EIF3S5、NDUFS4、RPS10),1个新基因。荧光定量PCR技术证实5个基因在不同处理组中的表达与荧光差异显示PCR图谱上一致。结论低剂量H2O2可以诱导MRC-5的适应性反应过程,其中bcl-2、EIF3S5、NDUFS4、RPS10在该过程中起着一定的作用。

低剂量的氢醌诱导细胞损伤耐受差异表达基因的研究

目的探讨低剂量氢醌(HQ)诱导人胚肺成纤维细胞(HLF)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的HQ对HLF毒性的剂量效应关系,选择100pmol/L的HQ为低剂量,100μmol/L的HQ为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、损伤耐受组(先用低剂量预刺激24h,再用高剂量刺激6h,然后用荧光差异显示PCR寻找不同方式刺激差异表达的基因,并对差异表达基因进行克隆、鉴定同源性比较。结果按方法所示的方式处理细胞,处理完毕后提取各组细胞总RNA,进行荧光差异显示PCR,找到33个差异条带。对其中的8个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中1个已知基因,7个未知基因。结论用荧光差异显示PCR方法寻找HQ诱导HLF损伤耐受过程差异表达的基因,通过鉴定基因,为进一步研究低剂量HQ诱导HLF损伤耐受的机制提供科学依据。

利用蛋白质组学技术研究氢醌刺激后人胚肺成纤维细胞蛋白质表达改变

目的 研究氢醌 (HQ)对人胚肺成纤维细胞 (HLF)蛋白质表达的影响 ,以阐明氢醌引起细胞应答反应的分子机制。方法 细胞受HQ刺激后 ,加入裂解液 ,取上清丙酮沉淀 ,蛋白定量。双向凝胶电泳分离蛋白质组成分 ,胶体考马斯亮兰显色 ,Imagemaster2 0进行图像分析后选取差异点 ,胶内酶解后MALDI TOF进行肽指纹图谱鉴定。结果 图像分析结果显示 ,对照组HLF细胞检测到 4 90± 2 8个蛋白点 ,HQ染毒组为 4 38±2 3个。氢醌刺激后 15个蛋白斑点发生变化 ,初步鉴定了其中 8个蛋白斑点 ,包括一些氧化应激和细胞骨架相关蛋白。结论 氢醌可引起HLF细胞蛋白表达改变。

PARP-1及其相关因子在适应性反应中的表达改变

目的探讨PARP-1在适应性反应中的作用。方法低剂量甲醛预处理人胚肺成纤维细胞(MRC-5)后,观察细胞对高剂量甲醛攻击的适应性反应。在MTT法检测细胞存活率的基础上,荧光定量PCR技术测定不同组细胞中PARP-1及其相关因子表达的变化。结果用低剂量甲醛预刺激可提高细胞对继后大剂量甲醛攻击的抵抗力;低剂量甲醛能引起PARP-1及其相关因子表达增加,产生适应性反应时这种增加尤为突出,其中PARP-1的表达量是对照组的147倍。结论低剂量的甲醛可使PARP-1活化,进而调节其相关因子DNA-PK、P53、NF-κB的表达,促使细胞免疫功能增强,启动适应性反应的产生。