基于网络药理学探明八宝丹治疗原发性肝癌的潜在机制研究

目的基于网络药理学探讨八宝丹对原发性肝癌(HCC)影响的潜在机制。方法首先利用二乙基亚硝胺诱导的原发性HCC大模型,观察八宝丹对HCC的影响;然后利用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS)检测八宝丹中的有效成分,再在Swiss Target Prediction数据库等预测八宝丹有效成分的潜在作用靶点。运用GeneCards、OMIM和Therapeutic Target Database筛选HCC对应靶点,取交集后获得八宝丹与HCC的共同靶点。使用Cytoscape软件和STRING数据库绘制蛋白与蛋白间互作网络,筛选出八宝丹调控HCC的关键分子。利用DAVID数据库对有效作用靶点进行GO及KEGG富集分析。最后在TCGA数据库验证关键分子与HCC患者的临床相关性。结果八宝丹可延缓HCC大鼠肿瘤进展。UPLCMS检测出八宝丹中化学成分851个,主要活性成分9个,作用靶点285个;筛选出HCC靶点637个,八宝丹调控HCC的靶点16个。GO富集分析显示802个生物过程、11个细胞组成、43个分子功能,KEGG通路共90条。TCGA相关性分析发现3个关键分子与HCC患者生存期相关。结论通过HCC大鼠模型发现,八宝丹可显著延长HCC大鼠的生存周期并减少肿瘤负荷,通过UPLC-MS及网络药理学方法初步预测八宝丹调控HCC的作用机制,表明八宝丹具有多成分、多通路、多靶点作用原发性HCC的特点,为进一步相关实验研究提供参考。

应用银染端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞系端粒酶活性的研究

观察人肝癌细胞的端粒酶活性。应用非放射同位素银染的端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ），检测６株人肝癌细胞株（ＢＥＬ－７４０２，ＨｅｐＧ２，ＱＧＹ－７７０１，ＱＧＹ－７７０３，ＳＭＭＣ－７７２１，ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）的端粒酶活性，同时检测ＲＮａｓｅ处理的阴性标本。６株人肝癌细胞的端粒酶均为阳性。

急性病毒性肝炎患者血清透明质酸含量变化的初步观察

透明质酸(HA)由体内各组织的间质细胞合成,广泛存在于细胞外基质中。在体内,HA 可从基质中释出,经淋巴系统进入血液循环。近年发现,肝窦内质细胞是摄取分解血清 HA 的场所。目前有报道,在肝脏受损时,特别是肝硬化时,血清 HA 升高。本文应用血清 HA 放射分析法。

检测端粒酶活性的端粒重复序列扩增法的初步建立

端粒是真核线性染色体末端结构,人端粒DNA由(TTAGGG)n重复序列组成.端粒酶是核糖核酸蛋白酶,具有RNA依赖的DNA合成酶活性,可重新合成端粒的重复序列.最近研究证实端粒及端粒酶与细胞衰老及肿瘤相关,是近年来生物学研究的热点.检测端粒酶活性是研究端粒酶的基本方法,同时具有潜在的临床诊断价值.本文拟应用最新的端粒重复序列扩增法(Telomeric Repeat AmplificationProtocal,TRAP),检测肝癌细胞端粒酶活性.

应用端粒重复序列扩增法检测原发性肝癌组织端粒酶活性的研究

目的:检测原发性肝癌及癌旁组织端粒酶活性并探讨端粒酶活性在原发性肝癌中的临床意义。方法:应用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测36例原发性肝癌及癌旁组织和3例正常肝组织端粒酶活性。结果:36例原发性肝癌组织有29例(80.6%)阳性。而36例癌旁组织只有4例(11.1%)阳性。3例正常肝组织均阴性。4例癌旁组织端粒酶阳性的患者均于术后半年内复发。结论:原发性肝癌癌旁组织端粒酶活性可望成为预测原发性肝癌术后复发的重要指标,对患者术后治疗方案的选择以及术后随访观察具有一定的指导意义。

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的研究

HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染新生乳鼠后24小时,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发现,有5株McAb保护率为100％,1株McAb保护率为17％,另有7株McAb可使感染乳鼠的发病死亡时间推迟。取有明显保护作用的5株McAb分别接种感染后不同时间的乳鼠,结果在48小时内接种保护率均达100％;但随接种时间推后,保护率逐渐下降,感染后10天接种几乎无保护作用。此5株McAb保护作用均优于多克隆的免疫血清。应用不同稀释的McAb 3D8进行保护试验,发现保护效果与接种剂量密切相关。采用固定抗体,稀释病毒方法测得McAb 3D8对HFRS病毒陈株感染乳鼠的保护指数为5.8。

银染端粒重复序列扩增法检测肝癌模拟肝穿组织端粒酶活性的研究

目的:探讨细针穿刺肝活检组织行端粒酶活性检测用于肝细胞癌(HCC)诊断的可行性。方法:HCC共28例,每例HCC肿瘤切除后立即行肝肿瘤模拟细针穿刺。应用非放射性同位素银染的端粒重复序列扩增法(TRAP),分别对28例模拟肝穿组织和28例肿瘤切取组织行端粒酶活性检测。结果:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织的端粒酶检测结果完全一致,阳性率均为82%(23/28)。结论:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织在HCC端粒酶活性检测方面具有同等的效果。该结果提示,B超引导下经皮肝穿刺活检行端粒酶活性检测在HCC的诊断、治疗效果评价和预后的判断方面具有一定的应用前景。

B细胞融合人肝癌细胞疫苗^(60)Co照射后生长及表型的观察

目的：探讨Ｂ细胞与人肝癌细胞的融合细胞经６０Ｃｏ照射后的生长和免疫原性相关表型的变化。方法：体外照射后观察融合细胞生长曲线和软琼脂集落形成；体内采用裸鼠成瘤试验，观察体外生长和动物体内成瘤性，应用流式细胞仪检测照射后融合细胞ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及肝癌抗原（ＧＰ７５）表达，观察其免疫原性相关表型变化。结果：经６０Ｃｏ照射的融合细胞失去增殖能力，４ｄ后可见部分细胞死亡，７ｄ后几乎全部死亡。６０Ｃｏ照射后３ｄ内ＭＨＣ－Ⅰ，ＭＨＣ－Ⅱ，Ｂ７及ＧＰ７５表达无明显变化。结论：经６０Ｃｏ照射后融合细胞失去增殖能力。

细胞融合肝癌疫苗体内抗肿瘤特异性及T细胞作用的初探

目的：观察大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与自体激活Ｂ细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与Ｔ细胞亚群的关系。方法：（１）应用聚乙二醇（ＰＥＧ）融合大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与激活Ｂ细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；（２）事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌ＢＥＲＨ－２细胞和大鼠膀胱癌ＮＢＴ－Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；（３）该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠ＣＤ４单抗或抗ＣＤ８单抗多次注射，以清除大鼠ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：ＢＥＲＨ－２细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而ＮＢＴ－Ⅱ细胞可致瘤；事先清除ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌ＢＥＲＨ－２细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了ＣＤ４＋细胞后不能被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤，清除了ＣＤ８＋细胞后则可被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用。

银染的端粒重复序列扩增法检测人细胞端粒酶活性的研究

目的：探讨应用简便、快速及无害化的非核素银染端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）检测人细胞端粒酶活性。方法：与核素ＴＲＡＰ相比较，采用非核素银染ＴＲＡＰ检测了２９３细胞，并检测了经ＲＮａｓｅ和加热处理的阴性对照标本和ＱＧＹ７７０１、ＳＭＭＣ－７７２１２株人肝癌细胞。结果：１０个以上的２９３细胞均为阳性，而ＲＮａｓｅ和加热处理的标本均阴性；２株人肝癌细胞均阳性；非核素银染ＴＲＡＰ比核素ＴＲＡＰ快１０ｈ左右。结论：非核素银染的ＴＲＡＰ是特异、敏感及快速的端粒酶活性检测方法，证实２株人肝癌细胞株均有端粒酶活性表达。

应用McAb和免疫血清对不同HFRS病毒株感染乳鼠保护作用的比较

HFRS病毒陈茱、76-118株和R22株100LD_(50)分别感染新生乳鼠。感染后24h,经腹腔分别接种McAb(3D8、3G1、8F8、8G3和8G2)和免疫血清(陈株、76-118株和R22株),结果发现,这5株McAb对陈林和76-118株感染乳鼠100％保护,而对R22株感染乳鼠只有McAb8F8有25％保护,而其佘McAb均无保护。免疫血清的保护实验也表明,陈株和76-118株可以交互保护。上述结果提示,陈株与76-118株保护性抗原较一致,但R22株与前两株差别较大。

人端粒及端粒酶的研究进展及其生物学意义

人端粒及端粒酶的研究进展及其生物学意义卫立辛综述吴孟超郭亚军审校第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤免疫和基因治疗中心（上海市２００４３８）恶性肿瘤表现为异常增殖的特性，是什么机制介导癌细胞异常生长？是肿瘤学家一直关注的课题。端粒是由ＤＮＡ重复序列和结...

Fas介导凋亡的免疫学研究进展

激活Ｔ细胞表达Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ），ＦａｓＬ与靶细胞Ｆａｓ结合，可使其凋亡。Ｆａｓ介导凋亡是Ｔ细胞杀伤途径之一。Ｆａｓ－ＦａｓＬ介导的淋巴细胞凋亡有免疫下调作用。其中主要参与外周Ｔ细胞克隆清除和活化Ｔ细胞凋亡。当Ｆａｓ介导凋亡功能缺失或功能过强均可出现免疫病理现象。

细胞融合大鼠肝癌疫苗制备及免疫相关表型分析

制各大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞和激活Ｂ细胞融合肿瘤疫苗并观察其免疫相关表型，为融合肿瘤疫苗应用人体提供依据。方法：应用ＰＥＧ在不同条件下，将肝癌细胞与激活Ｂ细胞融合。流式细胞仪鉴定融合细胞比例和检测ＭＨＣ－／Ⅱ、Ｂ７、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１的水平。结果：５０％ＰＥＧ－１４００介导细胞融合６０秒获得融合细胞百分比最高。与融合前ＢＥＲＨ－２细胞相比，融合细胞获得了ＭＨＣ－Ⅱ、Ｂ７、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１的表达，ＭＨＣ－Ｉ表达增加。结论：制备大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞和激活Ｂ细胞融合肿瘤疫苗的最佳条件为５０％ＰＥＧ－１４００融合６０秒。融合细胞不但表达肿瘤抗原，同时表达免疫原性相关分子。

细胞融合大鼠肝癌疫苗体内治疗和预防作用研究

目的 :观察大鼠 BERH - 2肝癌细胞与激活 B细胞的细胞融合大鼠肝癌疫苗对肿瘤的预防和治疗作用。方法 :应用 PEG将大鼠 BERH- 2肝癌细胞与激活 B细胞融合 ,制备细胞融合大鼠肝癌疫苗 ;部分肝癌疫苗免疫动物前经 6 0 Co照射 ;大鼠被肝癌疫苗免疫之前或之后 ,接种肝癌 BERH- 2细胞或组织块 ,观察疫苗对肝癌的预防和治疗作用。结果 :经细胞融合疫苗保护的大鼠可获 10 0 %无瘤生存 (8/8) ,而 HERH- 2或照射后 BERH- 2对照组大鼠均生长肿瘤死亡 (0 /8)。经皮下接种细胞融合肝癌疫苗治疗大鼠 ,肝内注射肝癌细胞的大鼠可获 85 %以上无瘤存活。照射后细胞融合肝癌疫苗与未照射的获得同样治疗效果。不经筛选的细胞融合疫苗也获相同治疗效果 ,而对照组大鼠均生长肿瘤后死亡。结论 :细胞融合肝癌疫苗对大鼠有预防和治疗作用 ,照射的细胞融合大鼠肝癌疫苗和不经筛选的融合细胞同样具有较好的治疗作用。

原发性肝癌及癌旁组织端粒酶检测与术后复发的关系

目的 观察原发性肝癌（HCC）及癌旁组织端粒酶活性与肝癌术后复发关系。方法 应用端粒酶TRAP－ELISA法，检测63例手术切除的肝癌及癌旁组织端粒酶活性，术后随访1年，观察术后复发。结果 肝癌组织端粒酶阳性53例中，术后1年有28例复发，阴性10例中，术后4例复发，二组相差不显著；而癌旁组织端粒酶阳性22例中，有20例术后1年复发，端粒酶阴性41例中，有12例复发，两组相差显著。结论 肝癌组织端粒酶活性与术后1年复发无关，而癌旁组织端粒酶阳性与术后1年内复发密切相关，可望作为术后近期复发预测指标。

端粒酶活性检测方法研究进展

端粒是真核细胞线性染色体末端结构，端粒酶是合成端粒重复序列的反转录DNA合成酶。检测端粒酶不但是进一步研究的手段，而且有潜在的诊断及预后意义。目前检测端粒酶活性方法主要有二种，一是最早建立的端粒重复序列延伸法，二是与PCR结合的端粒重复序列扩增法(TRAP)及其改良方法。＊＊AP是目前常用的一种方法。其特点是敏感，可大量检测，所需标本量少。但因标本中存在抑制Taq酶等因素影响，易出假阴性结果。近年有二种改良TRAP方法：加内对照法和TRAP-SPA法，使端粒酶检测方法更敏感、特异及快速。

细胞衰老研究进展及意义

细胞衰老是指正常细胞有限增殖特性。有关细胞衰老饥制假说主要有二种,一是分子损伤累积假说;二是基因调控假说。许多研究证实细胞衰老具有重要生物学意义。细胞衰老被认为是机体抗肿瘤形成机制之一;细胞衰老与机体衰老机制相关。