肿瘤相关成纤维细胞作为预测非肌层浸润性膀胱癌复发的生物标志物的评估

目的:探究肿瘤相关成纤维细胞作为生物学标志物预测非肌层浸润性膀胱癌(non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC)患者术后复发的临床意义。方法:从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库下载转录组数据以及对应的临床信息,分析原发性和复发性膀胱癌样本中ACTA2的表达差异。免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测56例膀胱癌样本中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达。绘制无复发生存曲线(recurrence-free survival,RFS)和时间依赖性受试者工作特征曲线(time-dependent receiver operating characteristic curves,tdROC)。采用单变量和多变量Cox比例风险回归模型分析α-SMA作为膀胱癌患者术后复发的预测因素的可行性。结果:GSE13507、GSE120739和GSE128959数据集复发组中ACTA2的表达均高于原发组(P<0.05)。IHC结果显示,α-SMA蛋白定位在肿瘤间质,复发组中α-SMA阳性/强阳性占比56.52%,而在原发组中占比16.13%,差异有统计学意义(P<0.001)。α-SMA蛋白表达与年龄、性别、病理分期、分级、肿瘤数量和大小等指标无明显相关性。α-SMA高表达组患者术后RFS较低表达组患者明显缩短[风险比(hazard ratio,HR)=2.76,95%可信区间(confidence interval,CI)=1.21~6.30,P=0.016]。多变量Cox分析显示,α-SMA蛋白表达水平是影响患者术后RFS的独立危险因素(HR=2.47,95%CI=1.02~5.97,P=0.045)。tdROC曲线提示α-SMA对复发的预测能力优于其他临床因素。结论:肿瘤间质的α-SMA蛋白表达水平与膀胱癌复发密切相关,可作为临床预测NMIBC患者术后复发的标志物。

腹腔镜保留肾单位肾肿瘤切除术对肾细胞癌患者肾功能和预后的影响

目的:分析肾细胞癌患者接受腹腔镜保留肾单位肾肿瘤切除术治疗对其肾功能及预后的影响。方法:收集2017年1月至2022年3月重庆医科大学附属第一医院泌尿外科接诊的肾细胞癌患者182例作为研究对象,采取随机法将患者进行分组,一组应用腹腔镜根治性肾切除术进行治疗,共91例为对照组,另一组应用腹腔镜保留肾单位肾肿瘤切除术进行治疗,共91例为研究组,对比两组患者术后肾功能及预后效果差异性。结果:研究组患者术后住院时间(P=0.011)优于对照组,对照组患者手术期间出血量(P<0.001)及手术时间(P=0.019)优于研究组,差异均有统计学意义;研究组患者手术后24 h血清肌酐水平(P=0.013)低于对照组,差异有统计学意义;研究组患者术后认知功能(P=0.018)、躯体功能(P=0.021)、社会功能(P=0.025)、情绪功能(P=0.032)及总体生活质量(P=0.033)等各维度评分高于对照组,差异有统计学意义。结论:临床中为肾细胞癌患者提供腹腔镜保留肾单位肾肿瘤切除术进行治疗可以缓解对患者肾功能造成的影响,提升患者手术治疗后的生活质量水平。

抗体偶联药物治疗尿路上皮癌的研究进展

尿路上皮癌(urothelial carcinoma,UC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤,在手术、化疗和免疫治疗等多种治疗措施下,仍有部分患者经历疾病复发、转移,预后不佳。抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC)兼有抗体药物的靶向性和化疗药物的细胞毒性,是近年来癌症个体化精准治疗的研究热点,成为这些患者新的选择。目前ADC治疗UC相关临床试验成果颇丰,靶向Nectin-4的Enfortomab Vedotin、靶向TROP-2的Sacituzumab Govitecan和靶向HER-2的Disitamab Vedotin已获批应用于临床,针对其他靶点的新型ADC也开始崭露头角。本文拟对最近的研究进展进行综述。

氧化应激诱导自噬对骨髓间充质干细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察氧化应激是否可诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)自噬,探索在氧化应激微环境中自噬对MSCs增殖和凋亡的影响及可能机制,以期提高移植MSCs治疗糖尿病勃起功能障碍(DMED)的效果。方法:以过氧化氢(H2O2)模拟氧化应激微环境。台盼兰染色细胞计数法及MTT分析检测不同浓度(0、50、100、200、400μmol/L)H2O2对MSCs增殖的影响。联合MTT、流式细胞术、Western blot及透射电镜等方法研究H2O2对MSCs凋亡及自噬的影响。结果:H2O2呈浓度依耐性抑制MSCs增殖,IC50=(384.5751±16.8895)μmol/L;Western blot分析及透射电镜提示H2O2在诱导MSCs凋亡的同时,诱导MSCs产生自噬;MTT分析及流式细胞术提示H2O2组细胞增殖受抑、凋亡率上升,阻断自噬后细胞增殖进一步减弱,凋亡率进一步上升;Western blot结果提示H2O2诱导cleaved caspase-3增多及多聚ADP-核糖聚合酶1(PARP1)裂解增强;阻断凋亡后,cleaved caspase-3降低及PARP1裂解减弱;阻断自噬后,cleaved caspase-3进一步增多及PARP1裂解进一步增强。结论:氧化应激对MSCs存活具有双重作用,在诱导MSCs凋亡的同时还诱导保护性自噬,阻断MSCs自噬可以增加MSCs的凋亡,因此进一步增强细胞保护性自噬将有望提高移植MSCs在糖尿病高氧化应激微环境中的存活率,从而改善移植MSCs对糖尿病勃起功能障碍的疗效。

siRNA干扰HMGB1表达对膀胱癌T24株细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的:探讨高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)对膀胱癌T24株细胞的增殖、凋亡及恶性生物学行为的影响及其潜在作用机制。方法:收集2014年12月至2016年1月期间重庆医科大学附属第一医院泌尿外科病区手术切除的20例膀胱癌以及相应癌旁组织,免疫组化方法检测膀胱癌和癌旁组织HMGB1表达差异;应用RNAi处理T24细胞并分为空白对照组(Blank)、阴性对照组(NC)和干扰组(si HMGB1);CCK-8、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测HMGB1敲低后对T24细胞增殖、凋亡、周期、迁移以及侵袭能力的影响;Western blotting检测不同膀胱癌细胞株BIU-87和T24细胞的HMGB1表达水平以及敲低HMGB1对T24细胞恶性生物学行为相关蛋白的影响。结果:与癌旁组织相比,HMGB1在膀胱癌组织处于高表达状态[(67.33±4.91)vs(12.00±3.79),P<0.05]。与NC组和Blank组相比,si HMGB1组细胞增殖受抑制(P<0.05);流式细胞术提示敲低HMGB1后细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期;划痕实验及Transwell侵袭实验显示,敲低HMGB1后细胞迁移(P<0.05)以及侵袭[穿膜细胞数:(16.33±1.45)vs(35.00±1.53)、(34.00±2.08)个,均P<0.05]能力减弱;Western blotting结果显示敲低后E-钙黏着蛋白表达上调(P<0.05),N-钙黏着蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶(metrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、细胞周期蛋白D1、c-Myc、β-联蛋白表达下调(均P<0.05)。结论:HMGB1可通过促进膀胱癌细胞EMT进而增强其恶性生物学行为,其机制可能是通过β-联蛋白信号通路介导。

茶多酚增强表柔比星诱导膀胱癌T24细胞凋亡和抑制其自噬的机制

目的研究表柔比星(EPI)诱导人膀胱癌T24细胞发生自噬的分子机制,探讨茶多酚(TP)联合EPI对T24细胞的影响及其机制。方法将T24细胞分成对照组、EPI组、TP组、TP联合EPI组。分别处理8 h,用透射电镜观察各组细胞自噬体形成情况,Western blot法检测T24细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、p62水平。处理24 h后,用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot法检测T24细胞中活化的胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、活化的多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)水平。用自噬通路抑制剂氯喹、3-甲基腺嘌呤联合EPI处理T24细胞8 h,Western blot法检测T24细胞LC3Ⅱ水平,再将TP与c-Jun氨基端激酶(JNK)通路抑制剂SP分别联合EPI处理8 h后,检测2组细胞LC3Ⅱ及磷酸化的JNK(p-JNK)水平。结果 TP联合EPI组T24细胞自噬体数量及LC3Ⅱ含量明显少于EPI组;JNK通路抑制剂SP能显著降低EPI引起的LC3Ⅱ表达,p-JNK水平与EPI呈时间依赖性增强;TP联合EPI能降低JNK通路活性;联合组细胞凋亡率及c-caspase-3和c-PARP蛋白水平明显高于EPI组。结论TP通过抑制JNK通路活性抑制膀胱癌T24细胞自噬并增强其对EPI敏感性。

顺铂对膀胱癌细胞自噬和凋亡的作用及其相关性

目的研究顺铂(DDP)能否激活人膀胱癌T24细胞自噬以及其中可能的机制,并且探索自噬和凋亡之间相关性。方法用MTT法检测不同浓度的顺铂(0、10、20和40μg/m L)对T24细胞的增殖作用。透射电镜观察细胞内自噬小体;用Western blot技术检测细胞内LC3-Ⅱ、P62蛋白和细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2蛋白的表达量。研究自噬对于DDP处理后T24细胞增殖和凋亡的影响。结果 DDP可显著抑制T24细胞的增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)为(30.3±2.4)μg/m L。DDP可以诱导T24细胞发生自噬,细胞自噬体数目明显增加;明显上调LC3-Ⅱ蛋白的表达(P<0.05),下调P62蛋白的表达(P<0.05)。DDP能上调ERK1/2的磷酸化(P<0.05);ERK1/2通路抑制剂U0126可以抑制DDP诱导的自噬,表现为LC3-Ⅱ蛋白表达明显下降(P<0.05)。自噬抑制剂渥曼青霉素(WTM)抑制自噬后明显加强DDP对T24细胞的增殖抑制和凋亡促进作用(P<0.05);在DDP和WTM联合处理组,细胞凋亡相关蛋白多聚ADP-核糖聚合酶1(PARP 1)裂解增强,cleaved-caspase-3增多(P<0.05)。结论自噬对T24细胞具有保护作用,可抑制DDP诱导的细胞凋亡,自噬活化的机制可能与ERK信号通路的激活有关。

CTHRC1通过活化FAK-ERK1/2信号通路促进膀胱癌5637细胞迁移和侵袭

目的:探讨胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在膀胱癌组织和细胞中的表达及其对膀胱癌5637细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:利用TCGA和Arrayexpress数据库中膀胱癌基因表达数据,分析CTHRC1转录和翻译水平。收集2014年9月至2020年12月重庆医科大学附属第一医院手术切除的144例膀胱癌组织和25例全膀胱切除的癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞RT4、5637、T24、UMUC-3、TCCSUP和输尿管上皮永生化细胞SV-HUC-1。采用免疫组织化学染色法、qPCR法和WB法检测膀胱癌组织和细胞中CTHRC1的表达水平,通过Kaplan-Meier曲线分析CTHRC1表达对总生存期(OS)的影响。运用RNAi技术,敲降5637细胞CTHRC1表达后,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测CTHRC1表达下调对5637细胞迁移和侵袭的影响。利用基因集富集分析(GSEA)预测CTHRC1相关的潜在信号通路,WB法检测敲降CTHRC1表达对FAK-ERK1/2通路相关蛋白表达的影响。结果:CTHRC1的转录和翻译水平在肌层浸润性膀胱癌(MIBC)组织和细胞中表达显著上调(均P<0.05),CTHRC1高表达组患者5年OS较低表达患者缩短(P<0.05)。干扰CTHRC1表达后,膀胱癌5637细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。GSEA预测显示,CTHRC1高表达组主要富集在黏着斑激酶(FAK)、肌动蛋白细胞骨架调节、FAK和ERK1/2信号通路。WB法实验结果表明,重组CTHRC1蛋白促进膀胱癌5637细胞FAK-ERK1/2信号通路活化(P<0.05或P<0.01)。结论:CTHRC1在MIBC中表达上调,且与膀胱癌患者不良预后密切相关;CTHRC1促进膀胱癌细胞迁移和侵袭,该过程可能与FAK-ERK1/2信号通路的激活有关。

基于炎症因子的两种非透明细胞肾癌临床特征及预后分析

目的探讨非透明细胞肾癌(non-ccRCC)患者临床病理特征并分析影响其生存预后的因素。方法回顾性分析2013年1月至2019年12月重庆医科大学附属第一医院收治的140例术后病理诊断为乳头状肾癌和嫌色细胞癌患者的临床资料,并探究其临床病理特征和预后的相关性。研究终点为肿瘤进展,生存分析数据采用Kaplan-Meier法进行计算,并用Log-rank法进行检验。结果在随访期内有22例(15.7%)患者出现肿瘤进展,3年无进展生存率(PFS)为84.2%,5年PFS为79.8%。单因素分析显示肿瘤最大径、白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原(Fbg)、淋巴细胞与单核细胞比值(LMR)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)与non-ccRCC患者预后有关(P<0.05);Cox多因素回归模型显示Fbg降低、LMR升高是患者术后肿瘤进展的独立危险因素。结论术前伴有Fbg升高(Fbg>3.76 g/L)或LMR降低(LMR≤3.23)的乳头状肾癌和嫌色细胞肾癌患者术后出现肿瘤复发或转移的风险较高。

胱氨酸结石诊疗新进展

胱氨酸尿症作为一种常染色体隐性遗传性疾病,是胱氨酸结石最常见的病因,具有发病时间早,进展快速的特点。部分病例早期即合并急性肾功能不全或衰竭。目前最新的检测方式包括衰减全反射-傅里叶变换红外光谱(ATR-FTIR)联合高效液相色谱结合荧光检测(HPLC-FL)、新型苯并咪唑探针和便携式荧光仪等具有高特异度的方法。最新的治疗包括胱氨酸晶体抑制剂、重组酶修复蛋白错误折叠、补硒辅助抑制胱氨酸结晶形成以及基因治疗等。在发达国家已经形成胱氨酸尿症的规范化治疗,但在我国目前针对胱氨酸结石的规范化诊疗仍然不尽如人意。本文就胱氨酸结石的最新诊疗进展进行阐述与总结。

良性输尿管狭窄腔内手术治疗后置入海马型输尿管支架的临床效果研究

目的研究良性输尿管狭窄腔内手术治疗后置入海马型输尿管支架的临床效果。方法选取2020年1月至2021年12月该院行良性输尿管狭窄腔内手术治疗患者60例作为研究对象。根据置入输尿管支架类型分为3组,采用单根标准形状输尿管支架者纳入A组,采用海马型输尿管支架者纳入B组,采用多根标准形状输尿管支架者纳入C组,每组各20例。同时收集3组患者一般资料(包括年龄、性别、狭窄侧别、狭窄部位、狭窄长度、狭窄程度、肾积水程度、术前肌酐水平等)及留置输尿管支架期间不良反应情况(包括腰痛症状、肉眼血尿症状、膀胱刺激症状及支架结石壳形成等),并对所收集的资料进行系统性分析讨论。结果60例患者均顺利完成手术,其中男性36例,女性24例;轻度狭窄36例,重度狭窄24例;轻度积水30例,中度积水20例,重度积水10例。3组患者一般资料和狭窄特征比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组患者治疗有效率比较差异无统计学意义(P=0.174),但A组的狭窄复发率(55.0%)明显高于B组(40.0%)和C组(25.0%)。A、B组腰痛视觉模拟量表(VAS)评分,输尿管支架症状问卷(USSQ)血尿评分、USSQ膀胱刺激症状评分均低于C组,生活质量评分高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论良性输尿管狭窄腔内手术后置入海马型输尿管支架的治疗费用相对较少,能有效促进输尿管恢复,明显缓解留置输尿管支架期间不良反应症状。