siRNA抑制X连锁凋亡抑制蛋白基因对人HeLa细胞凋亡及周期的影响

目的：探讨特异性 siRNA 对宫颈癌 Hela 细胞 X 连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因的抑制作用及其抑制后细胞凋亡和细胞周期的变化。方法设计合成 XIAP 特异性抑制 siRNA，并将 Hela 细胞分成4组，即观察组（pG-PU6／GFP／Neo ／XIAP -siRNA 转染细胞）、空白组（未加 siRNA 及转染试剂）、NC 组（阴性对照，为所选目的序列被无序打乱的 siRNA 转染）、Mock 组（转染试剂对照，加转染试剂未加 siRNA）。RT-PCR 法检测各组 XIAP mRNA 表达情况，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及细胞周期变化。结果转染48、72 h，观察组 XIAP mRNA 表达分别为20．20±0．10、19．99±0．14，空白组分别为21．43±0．04、20．95±0．15，两组比较均有统计学差异（P 均＜0．05）。转染48 h，观察组、空白组细胞凋亡率分别为（28．91±0．12）％、（9．73±0．02）％；转染72h，观察组、空白组细胞凋亡率分别为（37．29±0．10）％、（10．62±0．04）％；观察组细胞凋亡率均高于空白组（P 均＜0．05）。空白组、Mock组、NC 组间 XIAP mRNA 表达、细胞凋亡率比较均无统计学差异（P 均＞0．05）。与空白组相比，观察组转染48、72 h 后 G0～G1期细胞增多而 S 期细胞减少（P 均＜0．05）。结论特异性 XIAP-siRNA 可有效沉默宫颈癌 Hela 细胞XIAP 基因，抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。

凋亡抑制因子Survivin siRNA荧光表达载体的构建

目的构建靶向survivin siRNA真核表达质粒载体,通过RNA干扰技术阻断survivin基因的表达。方法针对目的基因survivin序列设计双链DNA(dsDNA),采用DNA重组技术与载体连接,转化感受态细胞经诱导表达筛选阳性克隆子。结果重组质粒经酶切、测序鉴定,证实插入载体目的基因片段大小与插入方向正确,且转染至肿瘤细胞,可见其发出绿色荧光,转染率为70%-80%。结论靶向survivin-siRNA真核表达载体pGU6/GFP/Neo/survivin-siRNA可用于转染肿瘤细胞、阻断survivin基因表达并诱导细胞凋亡的RNA i实验研究,为肿瘤的基因治疗奠定一定的基础。

livin基因沉默对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfening RNA,siRNA)沉默livin基因对人恶性黑素瘤A375细胞周期和凋亡的影响。方法:构建2个针对人源livin基因的siRNA表达质粒,并通过脂质体介导转染人恶性黑素瘤A375细胞株,利用荧光定量PCR检测livin mRNA的表达情况,AnnexinⅤ-PE FCM法检测A375细胞凋亡情况,PI单染FCM法检测细胞周期情况。结果:成功构建livin siRNA表达质粒,转染siRNA-1和siRNA-2后48h的A375细胞中livin mRNA表达量较空白对照组分别下降17%和42%,72h分别下降71%和61%。转染siRNA-1和siRNA-2后48h的A375细胞凋亡率(29.45%和33.25%)及72h细胞凋亡率(33.52%和38.18%)均高于空白组(7.95%和9.70%)(P<0.05)。siRNA-2可引起G0/G1期升高,S期下降(P<0.05),siRNA-1作用不明显(P>0.05)。结论:siRNA-1、2体外均能有效抑制livin mRNA的转录,促进人恶性黑素瘤A375细胞凋亡。siRNA-2表达质粒能使人恶性黑素瘤A375细胞周期出现G/G期阻滞,细胞增殖受到抑制。