小鼠锌指蛋白基因ZF-12的克隆与基因结构以及5′端启动子活性的分析

人类锌指蛋白ZNF191为类kr櫣ｐｐｅｌ转录因子 ,其可能与神经精神病、心血管疾病和肝癌等疾病的发生或发展有关 ,为了采用基因敲除模型来探讨它的生理功能 ,克隆和定位其在模式生物 (小鼠 )中的同源基因 ,并阐明其结构特征是必需的。通过筛选小鼠λ噬菌体基因组文库 ,获得了它在小鼠中的同源基因ZF 12基因组全长片段。序列分析表明 :该基因含有 4个外显子和 3个内含子 ,内含子都遵循GT AG的剪接模式 ;第 91密码子处存在单核苷酸多态性 ;可能存在 2种大小不同的 3′端的非翻译区 (3′ UTR) ;与锌指蛋白基因Zfp 35相连锁 ,可将其定位于 18号染色体的B3 C带上或附近 ;5′端上游存在 1个约 2 5 0bp高度富含GC的启动子序列。ZF 12基因的 5′端系列缺失荧光素酶基因报告载体的瞬时转染实验表明 :其上游序列 (- 76 2～ +70bp)具有启动子转录活性 ,在更上游的序列(- 82 4～ - 76 2bp)上可能存在负调控元件。这项研究结果为进一步的基因敲除研究奠定了基础。

小鼠锌指蛋白基因ZF-12基因剔除的ES细胞系的建立

利用小鼠锌指蛋白ZF 12基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠ZF 12基因座的替换型打靶载体pSSC TV 10 .5。经限制性核酸内切酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,通过电穿孔将线性化打靶载体导入ES细胞内 ,经G4 18/GANC双药筛选和分子鉴定 ,获得 4个ZF 12 + /-基因的ES细胞杂合子克隆 ,其生长状态良好 ,为进一步建立ZF 12基因剔除的小鼠动物模型创造了条件。

一个与小鼠锌指蛋白基因ZF-12相关的假基因的克隆和鉴定

小鼠类Krüppel锌指蛋白基因ZF-12为人的类Krüppel锌指蛋白基因ZNF191的同源基因,它们都编码368个氨基酸残基,N端存在SCAN结构域,C端有4个连续的锌指模体,最近的研究表明ZNF191是肝癌发生的相关基因。我们以人锌指蛋白基因ZNF191的cDNA为探针,筛选小鼠λ噬菌体基因组文库,意外地获得了1个与小鼠锌指蛋白基因ZF-12相类似的基因,多种组织的RT-PCR和启动子序列分析,暗示该基因不表达,且该基因无内含子,与ZF-12高度相似,存在突变,暗示其为与ZF-12相关的假基因序列,经查新证实它为新的序列后,以ZF12p(ZF-12 pseudogene)命名在GenBank登录(AY040222)。查寻GenBank的人类基因组库以及Southern结果显示人类基因组中无ZNF191假基因序列。ZF12p与ZF-12高度相似,暗示ZF12p在进化过程中产生的时间较晚,这对研究锌指蛋白基因ZF-12的突变与进化具有重要的意义。

多媒体在专业课《基因工程药学》教学中的应用

如何将课程体系、教学内容和教学手段建立在现代教育技术的平台上，已成为当前形式下高等教育改革和发展的一个重要方向。本文介绍我们将各种现代教育技术应用到《基因工程药学》课程教学方面，对提高课程的教和学的水平，进行了一些有益的尝试。

人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体β基因(PILRβ)的克隆、表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的:表达和纯化人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体蛋白PILRβ,制备并鉴定其多克隆抗体。方法:应用RT-PCR从人的外周血细胞总RNA中反转录并扩增出PILRβ基因,将其克隆到表达载体pET-32a,在大肠杆菌中IPTG诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,纯化后的蛋白多次注射免疫新西兰大白兔,获取多克隆抗血清,ELISA法检测抗体效价,Western印迹检测抗体特异性。结果:获得了较高纯度的PILRβ蛋白(Mr约为42 000)及其抗体,多抗效价达到1:10 000,且特异性较好。结论:成功克隆了PILRβ基因并表达纯化了其蛋白,获得了效价较高、特异性较强的多克隆抗体,为进一步研究PILRβ蛋白的功能和潜在的药物开发打下了基础。

生物技术药物教学内容和模式的优化探索

为提高生物技术药物课程的教学质量,对该课程的教学内容和教学模式在以下几个方面进行了优化:在教学内容上求精求新,注重突出学科特色,同时充分利用网络资源,拓展学生的知识面,激发其学习主动性;在教学方式上采用多媒体教学,提高课堂授课质量,并在传统课堂讲授教学的同时,适当结合问题导向式教学模式,积极开展教学互动;在理论教学的基础上,进一步加强实验教学,提高学生的实践能力和创新能力。

生物技术药物虚拟实验室建设的思考

生物技术药物实验教学中存在着实验周期长、成本高、实验过程复杂等各种客观问题。结合学科的工作实际和虚拟实验室的特点,对生物技术药物课程建立虚拟实验室的必要性进行了分析和总结,并进一步阐述了虚拟实验室建设过程中的注意事项,以期做到虚拟实验和现实实验的相互补充,增强实验教学效果。

生物技术药物实验课程建设的探索与实践

为了使学生能够在学习理论知识的同时,获得动手实践的机会,进行了生物技术药物实验课程的建设,提出了"四个一"的实验课程建设目标,即编写一本易用的实验讲义、制作一套生动的媒体课件、培养一支专业的教学团队、搭建一个完善的实验平台。该实验课程的建设和实施提高了学生的学习兴趣,增强了教学效果,积累了课程建设经验,也为其他实验课程的建设和改革提供了有益借鉴。

研究生蛋白质组学理论及技术实验教学实践与体会

随着蛋白质组学技术在生命科学各个领域的广泛应用,为了提高研究生培养质量,国内已有多家高等医学院校开设了蛋白质组学专业课。结合教学实践,提出应用现代教学理念,通过建设网络教学平台、细化实验课考核指标、使用多媒体技术和加强双语教学等手段,提高教学效果。

酵母糖化酶基因高效表达的剂量效应研究

通过原生质体融合和秋水仙素加倍技术，将糖化酵母的3个等效异位基因（STA1、STA2和STA3）分别构建成交配型位点等位基因纯合（a／a）、和糖化酶基因各自纯合加倍的纯合二倍体（STA1／STA1、STA2／STA2和STA3／STA3）以及糖化酶基因相互组合加倍的组合二倍体（STA1／STA2、STA2／STA3和STA1／STA3）。研究了这3个糖化酶基因表达的剂量效应及其相互关系。糖化酶酶活测定的结果表明，在交配型位点等位基因纯合状态下，糖化酶基因的剂量效应明显。例如，1株纯合二倍体SFY56-6的酶活可达其单倍体亲株的2．35倍，而1株纯合三倍体SFY56-104其酶活是亲株的3．18倍。糖化酶基因组合二倍体的酶活也表现出不同程度的组合剂量效应。

生物技术药物教学互动模式探讨与思考

生物技术药物是一门知识更新快、专业性很强的课程,是生物技术专业和药学专业学生重要的专业课。在教学过程中,我们通过构建有效的课堂教学互动,开展创新教育和网络教学,全面推动师生相互交流、相互促进,最大限度地实现教学相长,为培养学生的学习能力和创新能力营造有利的环境,使教学质量得到稳步提高。

药学专业本科生教研室实习带教体会

药学专业本科生实习包括教研室实习、药厂实习及药房实习等。教研室实习主要围绕课题研究展开，如何培养实习生的创新能力，帮助其具备科研素养是教研室实习面临的重要课题。教研室实习涉及选题、开题、实验、论文撰写及答辩等多个环节，由于实习时间较短及实习工作量大等问题。笔者就近年来教研室在实习生培养方面的经验进行总结和思考。

课题式教学在基因工程药物教学中的应用

基因工程药物课程内容庞杂,理论体系复杂且实践性强,单纯采用传统课堂讲授式教学难以达到理想的教学效果。介绍了在基因工程药物教学中引入课题式教学法以提高教学质量的一些做法,不仅可以使学生更加深刻地理解基因工程药物相关的概念、原理,还可以提高获取知识的兴趣和能力,培养科学研究的思维和创新意识,增强交流沟通、团队合作等多方面的综合素质。

肝组织特异表达人核受体nr5a2转基因小鼠的构建(英文)

人乙肝病毒增强子ⅡB1结合因子(hB1F)系FtzF1(NR5A)亚家族的新成员。经基因重组法将人hb1fcDNA置于小鼠白蛋白增强子/启动子序列下游构建成肝特异重组载体,通过原核显微注射将该载体导入小鼠受精卵原核,经注射且状态良好的卵回输至假孕母鼠输卵管。产下仔鼠经PCR和Southernblotting鉴定,同时RTPCR和Westernblotting分析转基因的表达。阳性Founder鼠与正常C57鼠交配以建立转基因纯系小鼠,F1代以PCR法鉴定。结果共获得4只PCR鉴定转基因阳性Founder鼠,其中一只同时经Southernblotting鉴定为阳性。RTPCR和Westernblotting结果显示,外源基因在转基因小鼠的肝组织成功表达。遗传学分析表明,转基因已整合入小鼠基因组并可稳定遗传。

核糖体蛋白S3a RNA干扰重组慢病毒载体的构建及其对细胞凋亡的影响

目的 构建小鼠核糖体蛋白S3a（RPS3a）特异性RNA干扰重组慢病毒载体（Lenti-shmRPS3a）,分析其对细胞凋亡的影响。方法 设计针对小鼠RPS3amRNA的4条干扰序列,合成相应的发夹序列,连接入慢病毒载体系统pLLU2GeGFP中构建重组质粒,将重组质粒与辅助包装质粒共转染293T细胞组装病毒,检测病毒滴度。病毒感染RAW264.7细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果,流式细胞术分析其对凋亡的影响。结果 PCR和测序证明成功构建出LentishmRPS3a慢病毒载体,病毒滴度为（6~9）×107 TU/mL;RT-PCR表明Lenti-shmRPS3a的沉默效率高达72.64%,蛋白质印迹法证明RPS3a蛋白表达水平降低;流式细胞术证明感染了Lenti-shmRPS3a的细胞凋亡率较对照组升高（P〈0.05）。结论 表达小鼠RPS3ashRNA的慢病毒载体能有效沉默RPS3a基因表达,促进细胞凋亡。

肝癌中EPHA3受体SAM结构域缺失突变体的发现

酪氨酸蛋白激酶受体(RTKs)具有调节细胞生长、分化和迁移的能力,是一类多功能的跨膜糖蛋白。EPH受体家族蛋白高度保守,成员众多,是RTKs中最大的一个分支。大量的研究表明,EPH家族蛋白不仅在胚胎发育过程中具有调节细胞间黏附或排斥、细胞迁移、轴突导向以及血管形成等多方面作用,并且在一些恶性肿瘤的血管生成、肿瘤转移与侵袭等肿瘤的发生发展及预后过程中也发挥着重要的调节作用。在研究EPHA3受体对肝癌转移的作用过程中,发现Epha3在肝癌组织中具有一种新的突变体,该突变体在其胞内部分缺失了96 bp并提前终止翻译而缺少SAM结构域,推测其可能在肝癌的发生发展过程中起调控作用。

药学专业本科学员新药创新能力的培养

生物医药产业发展迅猛,竞争日趋激烈,对高等军事院校培养创新型人才提出了更高的要求。本文立足于第二军医大学药学院生化药学教研室培养新药创新人才的实践,就近年来教研室立足课堂、积极探索利用研究生教育资源培养本科学员新药创新能力等方面取得的经验进行总结,力求不断提高创新型军事人才培养水平。

抓住机遇 开拓进取 迎接新世纪的挑战

１９９７年１１月１６日是中国运载火箭技术研究院建院４０周年。４０年来，在党和国家三代领导集体的亲切关怀和英明领导下，在全国人民的大力支持下，全院职工发扬航天传统精神，奋力拼搏，在发展火箭技术方面，走出了一条有中国特色的道路，取得了举世瞩目的成就。