CaMKⅣ信号缺失促进肌损伤炎症并影响肌再生

目的探究CaMKⅣ信号对肌损伤炎症反应及肌修复的调控作用。方法采用CRISPR/Cas9技术构建CaMKⅣ基因缺失(CaMKⅣ^(-/-))小鼠,PCR表型鉴定。心脏毒素(Cardiotoxin,CTX)诱导野生B6鼠及CaMKⅣ^(-/-)鼠急性肌损伤。HE染色观察损伤肌内炎症程度及肌修复过程。Dystrophy、F4/80免疫荧光双标,观察损伤肌内巨噬细胞渗出差异。F4/80、Ly-6C、CD206、Ki67染色及流式检测,分析损伤肌内M1、M2巨噬细胞的数量和比例,以及M1、M2巨噬细胞的局部增殖能力。结果成功构建并繁殖CaMKⅣ^(-/-)鼠。HE及荧光染色观察证实小鼠体内CaMKⅣ信号缺失可致肌内炎症加剧、肌修复延迟。CaMKⅣ^(-/-)小鼠损伤肌内再生的中央核肌纤维(Dystrophin^(+))数量低于WT鼠,巨噬细胞(F4/80^(+))数量显著高于WT鼠,以M1细胞(F4/80^(+)Ly-6C^(+))为主,M2细胞(F4/80^(+)CD206^(+))比例低于WT鼠。CaMKⅣ^(-/-)鼠损伤肌内增殖巨噬细胞(F4/80^(+)Ki67^(+))数量显著高于对照鼠,但以增殖的M1细胞为主(Ly6C^(+)Ki67^(+)),M2细胞(CD206^(+)Ki67^(+))的增殖与对照鼠无显著差异。结论CaMKⅣ信号缺失可致肌损伤炎症加剧、促进损伤肌内M1巨噬细胞的渗出及增殖,延误肌修复。