无血清单层细胞诱导法培养猪诱导多能性干细胞定向分化为血管内皮细胞

背景:诱导多能性干细胞是一种新型的干细胞来源,具有多向分化潜能。猪作为人类心血管及代谢性疾病研究的良好模型,对其多能性细胞向血管内皮细胞定向分化体系的建立,将为创建心血管疾病模型提供保障。目的:建立一种无血清单层诱导分化方法,使猪诱导多能性干细胞定向分化为CD31阳性血管内皮细胞,并对获得的内皮细胞进行鉴定。方法:使用CHIR99021、骨形态发生蛋白4、碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子等对猪诱导多能性干细胞和人胚胎干细胞进行单层细胞诱导分化,使干细胞经历3个分化阶段最终成为血管内皮细胞,检测并比较分化过程中2种干细胞的胚层标记基因的表达,对流式分选后获得的血管内皮细胞进行鉴定。结果与结论:①通过无血清单层细胞诱导法从猪诱导多能性干细胞定向诱导分化获得的内皮细胞具有与猪永生化主动脉血管内皮细胞类似的基因表达模式及生物学功能——能够吸收低密度脂蛋白并在Matrigel上形成微血管样结构;②该诱导体系下,猪诱导多能性干细胞的分化效率高于人胚胎干细胞的分化效率,这可能与诱导过程中2种细胞谱系基因表达模式上的差异相关。

利用单细胞融合技术高效获得融合细胞的方法

试验以小鼠胚胎干细胞(mESC)作为细胞融合对象,用0.25%胰酶将mESC消化成单细胞,利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对,在含有50%聚乙二醇的ES培养液中培养1 min,随后将细胞继续培养7 d,获得既表达红色荧光也表达绿色荧光的克隆即为融合成功。结果显示,单细胞融合法的克隆效率(46.25%)显著高于传统融合的效率(0.001 7%)。进一步检测融合细胞的生物学特性发现,虽然细胞形态与mESC具有很大的差异,但依然呈AP阳性,RNA水平上表达Oct4、Sox2和Nanog,具有向三胚层分化的能力等。结果表明,单细胞融合法是一种高效构建融合细胞的新途径。

探究农村污水治理现状及加强PPP融资模式应用的对策

农村地区污水治理工作的开展受到“小而散”、“监管缺失”、“污水处理设施大量闲置”等问题影响而导致最终的建设成效不佳,对此相关企业可联合当地政府部门通过合理地应用PPP融资模式来有效地改善当地的污水治理乱象问题。接下来,笔者将以农村污水治理以及PPP融资模式为核心,对农村污水治理现状及存在的问题、农村污水治理实施PPP模式的存在的问题以及利用PPP模式治理农村污水的有效措施等内容展开详细地阐述,旨在为从事农村地区污水治理工作并深入贯彻落实PPP融资模式的相关企业略陈管见。