非酒精性脂肪肝病模型小鼠的肝脏病理变化及肝细胞获取方法

目的检测非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型小鼠的肝脏病理变化,并探索一种获得大量高活性、高纯度的NAFLD小鼠原代肝细胞的实验方法。方法60只小鼠随机分为正常组(正常饲料,CD)和高脂组(高脂饲料,HFD),分饮食饲养20周。定期检测小鼠的体质量,苏木精-伊红(HE)染色和天狼猩红染色观察肝脏组织病理特点。高脂饮食15周时,原位灌注Ⅳ型胶原酶6~8 mL消化得到混合肝细胞,铺于40%的Percoll分离液上,进行密度梯度离心获得纯化的肝细胞,锥虫蓝染色确定细胞的活性,显微镜观察其形态。结果随着建模时间的延长,HFD组小鼠的体质量逐渐增加,且增幅显著高于CD组;HFD组小鼠肝脏脂肪变性程度增加,在第20周伴随出现了纤维化;建模15周时,每只NAFLD小鼠可获得5×10^(7)~7×10^(7)个肝细胞,细胞存活率≥85%,细胞纯度≥95%,细胞呈圆形或椭圆形,其边缘平滑,且聚团少;通过精准控制温度、降低胶原酶浓度、使用低速离心和低速密度梯度离心等优化条件后,获得的细胞数量和质量均有显著提高。结论成功构建了NAFLD小鼠模型,并揭示了不同疾病阶段肝脏的病理特点。探索了一种高效、稳定的获取NAFLD小鼠原代肝细胞的方法。所得肝细胞的数量和活性都符合大多数实验的要求。

壳寡糖的制备及生物学活性研究进展

壳寡糖是由壳聚糖水解得到的一类具有抗炎、抗肿瘤、可调节免疫和神经保护等多种生物学活性的化合物,被广泛应用于农业、医药、食品等领域,也是目前国内外研究的热点。本文就壳寡糖的制备方法及生物学活性进行了综述,以期对深入研究壳寡糖提供依据。