“一肾一夹”高血压大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位的基因表达

目的 :探讨“一肾一夹 ( 1k1c)”高血压大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位各异构体基因表达的改变 ,为高血压发病机制的深入研究提供理论及实验依据。方法 :分别应用RT -PCR及免疫组化技术 ,探讨 1k1c高血压大鼠肾脏皮质钠泵α1、α2 及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果 :正常大鼠肾脏皮质主要表达钠泵α1亚单位 ,α2 与α3亚单位表达较弱 ;在mRNA水平 ,1k1c高血压大鼠肾脏皮质钠泵α1亚单位表达明显较强 ,α2 与α3亚单位表达无改变 ,而在蛋白水平各亚单位基因表达与对照组比较均无明显差异。结论 :1k1c高血压大鼠肾皮质钠泵α亚单位基因表达发生改变 ,这种改变可能参与该模型的血压升高机制。

哇巴因抗体对肾血管性高血压大鼠的降压作用

目的：探讨哇巴因抗体的降压作用及内源性哇巴因与高血压发病的关系。方法：给“一肾一夹（１Ｋ１Ｃ）”、“两肾一夹＋盐（２Ｋ１Ｃ－ｓａｌｔ）”及“两肾一夹（２Ｋ１Ｃ）”肾血管性高血压大鼠随机静注哇巴因抗体、硝普钠、正常免免疫球蛋白（ＩｇＧ）及生理盐水，颈动脉插管观察注射后３小时内大鼠血压的动态变化。结果：哇巴因抗体对“一肾一夹”、“两肾一夹＋盐”型高血压大鼠具有明显的降压作用，而对“两肾一夹”高血压鼠降压作用不明显。正常免免疫球蛋白对各种高血压模型均无降压作用。结论：哇巴因抗体对“一肾一夹”、“两肾一夹＋盐”型高血压大鼠具有降压作用，间接证明了内源性哇巴因可能是高血压的发病因素之一。

“一肾一夹”高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位的基因表达

目的 探讨“一肾一夹 (1k1c)”高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位各异构体基因表达的改变 ,为高血压发病机制的深入研究提供理论及实验依据。方法 分别应用分子生物学RT PCR及免疫组化技术 ,探讨 1k1c高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果 1k1c高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位基因表达发生改变 :无论在mRNA或蛋白水平 ,α1亚单位表达增强 ,而α2与α3亚单位表达无改变。结论 1k1c高血压大鼠动脉平滑肌细胞钠泵α亚单位基因表达发生改变 ,这种改变可能参与了该模型的血压升高机制。

内源性哇巴因对高血压动物模型的血压调节机制

内源性哇巴因 (endogenousouabain ,EO)是新近发现的由肾上腺皮质所分泌的一种类固醇激素 ,体内EO含量升高在高血压的发病中可能起着重要作用 ,该文针对各种高血压模型体内EO含量的改变以及这种改变在血压升高中的意义作一综述。

“一肾一夹”高血压鼠血清及组织内哇巴因含量及其与血压相关性的研究

目的 :探讨内源性哇巴因 (EO)在“一肾一夹 (1k1c)”高血压模型血压升高中的作用及其分泌特点。方法 :采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定“1k1c”高血压大鼠血清及多种组织内EO含量的改变 ,并对体内EO含量与大鼠血压进行相关性分析。结果 :“1k1c”高血压鼠血清及心脏、肾脏、肾上腺、垂体及下丘脑内EO含量均高于正常大鼠 ;尤以肾上腺及下丘脑内EO含量最高 ;其中血清、肾脏及下丘脑内EO含量与大鼠血压呈显著正相关。结论 :EO含量增加可能在“1k1c”模型高血压的发生机制中发挥着较为重要的作用 ;

正常SD大鼠组织钠泵α亚单位的基因表达

目的 系统研究正常SD大鼠各组织内钠泵α亚单位三种异构体的分布情况。方法 采用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术 ,检测正常大鼠多种组织内钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平的表达。结果 左室心肌主要表达α1与α2亚单位 ,α3亚单位表达较弱 ;肝脏中在mRNA水平α1亚单位表达较强 ,α2与α3亚单位较弱 ,而在蛋白水平三者表达均较弱 ;肾脏中主要表达α1亚单位 ,α2与α3亚单位较弱 ;肾上腺中α1亚单位的表达略高于α2与α3亚单位 ;动脉平滑肌中α2亚单位的表达略高于α1与α3亚单位 ;垂体中三种亚单位的表达均较强 ;下丘脑中α2与α3亚单位表达较强 ,α1亚单位表达较弱。结论 本研究系统揭示了正常大鼠多种组织内钠泵α亚单位三种异构体在mRNA及蛋白水平的表达情况 。

哇巴因与地高辛对大鼠肝脏钠泵A亚单位基因表达的影响

目的 观察哇巴因与地高辛对大鼠肝脏钠泵基因表达的影响 .方法 分别给大鼠注射哇巴因 (2 0 μg· kg- 1·d- 1 )、地高辛 (32 μg·kg- 1·d- 1 )和生理盐水 (1m L· kg- 1·d- 1 ) ,观察给药后 6wk大鼠血压的动态变化 ;并分别应用分子生物学 RT- PCR及免疫组织化学技术 ,探讨各组大鼠肝脏钠泵 α1 ,α2 及 α3 亚单位 m RNA及蛋白水平基因表达的改变 .结果 给予哇巴因 2 wk后大鼠血压开始升高 ,至 6 wk时明显高于生理盐水组 (17.7± 1.2 ) vs(15 .4± 1.1) k Pa,P<0 .0 1) ,而实验过程中地高辛组血压与对照组比较差异不明显 .无论是在 m RNA水平还是在蛋白水平 ,哇巴因对大鼠肝脏钠泵α1 亚单位表达无影响 ,而地高辛使α1 亚单位表达增强 ;两组大鼠 α2 亚单位表达均无改变 ;哇巴因使 α3 亚单位蛋白水平表达减弱 ,而 m RNA水平增强 ,地高辛组大鼠肝脏钠泵 α3 亚单位无论在 m RNA水平及蛋白水平表达均增强 .结论 哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致不同的钠泵基因表达改变 。

哇巴因的升压作用及哇巴因抗体对高血压大鼠血压的影响

目的 :探讨内源性哇巴因在高血压发病中的作用。 方法 :分别给予正常 SD大鼠每天腹腔注射外源性哇巴因 (2 5μg/kg,哇巴因组 )及等量生理盐水 (对照组 ) ,观察用药10周血压的动态变化 ;“一肾一夹”高血压大鼠分别给予舌下静脉注射哇巴因抗体 (哇巴因抗体组 )、生理盐水 (生理盐水组 )及正常兔免疫球蛋白 G(正常兔 Ig G组 ) ,颈动脉插管监测血压 ,观察用药后 3小时内血压的动态改变。 结果 :与对照组比较哇巴因组大鼠注射哇巴因后 3周血压即开始升高 [12 0 .5± 15 .4mm Hg比 10 9.4± 11.8mm Hg(1mm Hg=0 .133 k Pa) ,P<0 .0 5 ],第 10周时血压明显高于对照组 (143.6± 17.3 mm Hg比 12 1.3± 15 .3 mm Hg,P<0 .0 1) ;哇巴因抗体对“一肾一夹”高血压大鼠具有明显的降压作用 ,而正常兔 Ig G组与生理盐水组比较降压作用不明显。 结论 :体内哇巴因含量升高可能是高血压发病因素之一 ,在血压升高中发挥着较为重要的作用。

钠泵抑制物噬菌体单链抗体库的构建

目的 应用噬菌体展示技术构建钠泵抑制物单链抗体库 .方法 用 OUA- OVA(ouabain- ovalbumin)免疫小鼠 ,取脾脏 ,分离淋巴细胞 ,提取 m RNA,逆转录成 c DNA第一链 ,用简并引物经 PCR分别扩增轻、重链抗体库 ,经重叠延伸PCR由 L inker将轻、重链拼接成 Sc Fv(单链抗体 ) ,用 RS引物以 Sc Fv为模板进行第 2次 PCR,同时在 5 及 3 端分别加上 Sfi I,N ot I酶切位点 .经 Sfi I,N ot I酶切后 ,在 T4连接酶的作用下将 Sc Fv与 p CANTAB 5 E噬菌粒连接 ,电转化进入TG1大肠杆菌 ,挑取 12个单菌落提取质粒用 Eco R 和 H ind 进行酶切鉴定 ,后经 M13KO7辅助噬菌体拯救 ,离心收集上清即为全套 Sc Fv基因的噬菌体表面展示文库 .结果 以OU A- OVA免疫小鼠 ,检测血清中抗体效价可达 (1∶ 2×10 6 ) ,用通用引物分别扩增出轻、重链片段的大小为 32 5 bp和 34 0 bp,将两者拼接得到约 72 0 bp大小的单链抗体库 ,以8× 10 1 1 的转化效率转染 TG1细胞 ,Eco R 和 H ind 酶切后 ,12个单菌落所提噬菌粒 DNA中有 10个切出了约为 2 .1kb的目的条带 ,所构建的噬菌体抗体库库容量约为 1.2× 10 8.经 M13KO7超感染后 ,测噬斑滴度为 9× 10 1 4 pfu· L- 1 .结论 成功地构建了钠泵抑制物噬菌体单链抗体库 .

追踪最新医学进展 全面提高医生素质

现代医学的迅速发展要求每一位临床医生不仅要有扎实的基本功 ,全心全意为患者服务的精神 ,而且要能够将最新的医学知识与技术应用于救治病人的临床实践中 ,这就要求经常翻阅相关文献 ,跟上医学最新进展 ,全面提高医生素质 ,本文对如何从浩如烟海的医学文献中获取临床工作所需的医学文献与相关知识以及有关内容加以阐述。

内源性哇巴因的来源及其分泌调节

内源性哇巴因 (EO)是新近发现的一种类固醇激素 ,具有重要的病理和生理学意义。应用细胞培养、离体及在体动物实验的研究结果以及大量的临床证据表明 ,EO可能是由肾上腺皮质分泌的 ,但也有研究提示它可能来源于下丘脑。EO的分泌受摄盐量、血容量、肾素 血管紧张素 醛固酮系统、中枢神经系统、体内胰岛素水平以及缺氧等多种因素的调节 ,对机体水、电解质平衡的稳定以及血压调控等方面具有重要作用。

“一肾一夹”高血压大鼠心肌钠泵α亚单位的基因表达

目的 :探讨“一肾一夹 (IKIC)”高血压大鼠心肌钠泵α亚单位各异构体基因表达的改变 ,为高血压发病机制的深入研究提供理论及实验依据。方法 :分别应用分子生物学RT -PCR及免疫组化技术 ,探讨IKIC高血压大鼠心肌钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果 :在mRNA水平 ,1K1C高血压大鼠心肌钠泵α2亚单位表达减弱 ,α3亚单位表达增强 ,而蛋白水平表现为α2亚单位表达增强。结论 :1K1C高血压大鼠心肌钠泵α亚单位基因表达发生改变 ,这种改变可能与肾血管性高血压的发病有关。

正常SD大鼠血清及组织内源性哇巴因的含量及其意义

探讨正常 SD大鼠血清及组织内源性哇巴因 ( EO)的含量 ,为 EO生理及病理作用的进一步研究提供理论及实验依据。方法 制备高度特异性的哇巴因抗体 ,应用酶联免疫吸附试验 ( ELISA)的方法 ,对正常 SD大鼠血清及组织标本测定其 EO含量。结果 血清、肝脏、肾脏、肾上腺、垂体及下丘脑内 EO含量分别为 ( 1 .1 2± 0 .1 7) μg/ L、( 1 .79± 0 .44) μg/ kg组织、( 1 .0 8±0 .63)μg/ kg组织、( 1 .73± 0 .81 )μg/ kg组织、( 2 7.54± 6.91 )μg/ kg组织、( 1 .83± 0 .54)μg/ kg组织、( 1 0 .1 0± 3.0 8) μg/ kg组织。肾上腺内 EO含量明显高于其它组织及血清 EO含量。结论 确定了正常 SD大鼠血清及多种组织内源性哇巴因的含量 ,提示肾上腺有可能是

哇巴因与地高辛对大鼠垂体钠泵α亚单位基因表达影响的对比研究

目的 对比研究哇巴因与地高辛对大鼠垂体钠泵(Na+,K+ ATP酶 )α亚单位基因表达的影响 ,探讨内源性哇巴因 (EO)的生物学效应以及洋地黄类药物药理作用的分子机制。方法 长期给予大鼠注射小剂量哇巴因 (2 0 μg·kg-1·d-1)与地高辛 (32 μg·kg-1·d-1) ,动态观察大鼠血压变化 ;分别应用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术 ,探讨各组大鼠垂体钠泵α1、α2 及α3 亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果 哇巴因与地高辛对大鼠血压的影响存在着明显差别 ,长期给予大鼠注射小剂量哇巴因可使大鼠血压升高 ,而地高辛对大鼠血压无影响。哇巴因与地高辛对垂体钠泵α亚单位表达的影响存在明显不同 :在mRNA水平 ,哇巴因使α1、α2 及α3 亚单位的表达均明显减弱 ,而地高辛仅使α3 亚单位表达减弱 ;在蛋白水平 ,哇巴因使α2 及α3 亚单位表达减弱 ,α1亚单位无改变 ,而地高辛使α1及α3 亚单位表达减弱 ,α2 亚单位无改变。结论 哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致不同的钠泵基因表达改变 ,为进一步揭示EO生理与病理作用以及洋地黄类药物药理与毒理作用的分子机制提供了理论及实验依据。

哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位基因表达的影响

目的 对比研究哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵 (Na+ ,K+ ATP酶 )α亚单位基因表达的影响 ,探讨内源性哇巴因 (EO)的生物学效应以及洋地黄类药物药理作用的分子机制。方法 长期给予大鼠注射小剂量哇巴因 (2 0 μg·kg- 1·d- 1)与地高辛 (32 μg·kg- 1·d- 1) ,动态观察大鼠血压变化 ;分别应用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术 ,研究各组大鼠肾脏皮质钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果 哇巴因与地高辛对大鼠血压的影响存在着明显差别 ,长期给予大鼠注射小剂量哇巴因可使大鼠血压升高 ,而地高辛对大鼠血压无影响。但哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位基因表达的影响是相同的 ,在mRNA水平均可使α1亚单位表达增强 ,α2与α3亚单位表达无改变 ;而在蛋白水平α1亚单位表达减弱 ,α3亚单位表达增强 ,α2亚单位表达无改变。结论 哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致相同的肾脏皮质钠泵基因表达改变 ,提示这种表达的改变在哇巴因导致血压升高的过程中可能并不起着关键性作用。

哇巴因与地高辛对大鼠肾上腺钠泵α亚单位基因表达影响的对比研究

目的 对比研究哇巴因与地高辛对大鼠肾上腺钠泵 (Na+ ,K+ ATP酶 )α亚单位基因表达的影响 ,探讨内源性哇巴因(EO)的生物学效应以及洋地黄类药物药理作用的分子机制。方法 长期给予大鼠注射小剂量哇巴因 (2 0 μg·kg-1·d-1)与地高辛 (32 μg·kg-1·d-1) ,动态观察大鼠血压变化 ;分别应用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术 ,探讨各组大鼠肾上腺钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果 哇巴因与地高辛对大鼠血压的影响存在着明显差别 ,长期给予大鼠注射小剂量哇巴因可使大鼠血压升高 ,而地高辛对大鼠血压无影响。哇巴因与地高辛对肾上腺钠泵α亚单位的影响存在明显差异 ;哇巴因使α1亚单位表达减弱 ,α3亚单位增强 ,而α2亚单位在蛋白水平表达减弱 ,mRNA水平增强 ;地高辛使α3亚单位表达增强 ,α2亚单位无改变 ,α1亚单位在蛋白水平表达减弱 ,mRNA水平增强。结论 哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致不同的钠泵基因表达改变 。

哇巴因多克隆抗体对两肾一夹肾血管性高血压大鼠血流动力学的影响

为探讨哇巴因多克隆抗体的降压作用及哇巴因与高血压发病的关系 ,给“两肾一夹 +盐 ( 2 k1 c+盐 )”、“两肾一夹 ( 2 k1 c)”肾血管性高血压大鼠随机静注哇巴因多克隆抗体、硝普钠、正常兔免疫球蛋白 ( Ig G)及生理盐水 ,颈动脉插管观察注射后 3h内血压动态变化。结果表明 :哇巴因多克隆抗体对“两肾一夹 +盐”肾血管型高血压大鼠具有明显的降压作用 ,而对“两肾一夹”高血压模型降压作用不明显。正常兔免疫球蛋白对各种高血压模型均无降压作用。提示内源性哇巴因 ( EO)升高可能是高血压的发病因素之一 ;高盐引起血压升高的机制之一可能是通过刺激 EO的分泌增加。

EXPERIMENTAL STUDY ON THE ROLES OF ENDOGENOUS OUABAIN IN THE DEVELOPMENT OF HYPERTENSION

Objective To explore the relationship between endogenous ouabain and the pathogenesis of hypertension. Methods ① Sixteen Sprague Dawley (SD) rats were selected and randomly divided into two groups, and then the rats were injected with ouabain in dosage of 20μg/kg.d and normal saline (NS), respectively. The indirect systolic blood pressure of all the rats were recorded once a week. ② Twenty five 1k1c (one kidney and one clipped) hypertensive rats were established and injected randomly with anti ouabain antibody, normal rabbit IgG and normal saline, respectively. The direct blood pressure of all the 1klc hypertensive rats were recorded by cannulated carotid artery for 3h after administration. Results The systolic blood pressure of rats injected with ouabain began to increase 2 weeks after ouabain administration and increased significantly at 6 weeks compared with NS group (17.7±1.2)kPa vs (15.4±1.1)kPa, P <0.01).Anti ouabain antibody could significantly decrease the blood pressure of 1k1c rats, while the normal rabbit IgG could not. Conclusion The results of this study indicate that endogenous ouabain might be one of the pathogenetic factors of hypertension.