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莲藕多酚氧化酶互作蛋白的筛选及验证
被引量:
1
1
作者
原新博
程婷婷
+4 位作者
惠小涵
陈章玉
王瑞红
柯卫东
郭宏波
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第18期3777-3791,共15页
【目的】以中国莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)的多酚氧化酶家族成员之一NnPPO1(GenBank:ADC92563.1)为研究对象,筛选、验证与其互作的蛋白,为深入研究莲藕PPO的分子作用机制、精准抑制其活性奠定基础。【方法】利用酵母双杂交(Y2H)技术...
【目的】以中国莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)的多酚氧化酶家族成员之一NnPPO1(GenBank:ADC92563.1)为研究对象,筛选、验证与其互作的蛋白,为深入研究莲藕PPO的分子作用机制、精准抑制其活性奠定基础。【方法】利用酵母双杂交(Y2H)技术,验证莲藕抗氧化酶是否与NnPPO1存在互作关系。通过转化酵母试验检测互作蛋白过氧化氢酶同工酶NnCAT1(GenBank:XP_010242894.1)的毒性和自激活活性。构建双分子荧光标记试验(BiFC)所用的35S-NnPPO1-SPYNER173、35S-NnCAT1-SPYCEM表达载体,通过农杆菌介导法,将重组质粒转化烟草,进一步验证NnPPO1与NnCAT1之间的互作关系。根据NnPPO1和NnCAT1的结构域截短蛋白,寻找互作关键结构域。利用PlantCARE分析NnPPO1与NnCAT1启动子相关作用元件,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析NnPPO1与NnCAT1在莲藕不同组织中的表达水平。采用同源重组的方法构建35S-NnCAT1-GFP融合蛋白表达载体,用于亚细胞定位分析。运用DNAMAN软件对NnCAT1序列和其他物种序列进行多序列比对。运用生物信息学网站对NnCAT1进行理化性质与结构分析。【结果】NnCAT1与NnPPO1存在蛋白互作,且NnCAT1蛋白无自激活作用,对酵母菌株也没有毒性。在细胞膜和细胞核上观察到黄色荧光信号,进一步证实NnPPO1与NnCAT1之间存在互作。NnPPO1的酪氨酸酶结构域在蛋白互作中发挥主要作用。NnPPO1与NnCAT1启动子序列上存在多种顺式调控元件,如光响应元件Box 4、GT1-motif、TCT-motif,逆境响应元件ARE以及激素响应元件CGTCA-motif、TGACG-motif等。NnPPO1与NnCAT1的表达模式基本相同,在各组织中均有表达,均在叶中表达量最高,在茎尖中表达量最低。亚细胞定位结果显示NnCAT1定位于细胞膜和细胞核中。莲藕NnCAT1的相对分子质量约为57.0 kD,理论等电点(PI)为6.93;该蛋白为同源四聚体亲水性蛋白质;无跨膜结构和信号肽,存在叶绿体转运肽,前21 aa为转运肽区域;二级结构由27.64%的α-螺旋、15.65%延长链、6.30%β-转角和50.41%无规则卷曲构成。【结论】筛选出NnCAT1与NnPPO1之间存在蛋白互作,用BiFC进一步证实两者互作的真实性,NnPPO1保守的酪氨酸酶结构域在互作中发挥主要作用;NnPPO1与NnCAT1的表达模式基本相同,推测NnPPO1与NnCAT1协同互作导致莲藕等果蔬褐变。
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关键词
莲藕
NnPPO1
NnCAT1
蛋白互作
亚细胞定位
组织特异性表达
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职称材料
10个产地莲藕营养成分分析与品质综合评价
被引量:
20
2
作者
程婷婷
惠小涵
+5 位作者
尚欣欣
原新博
柯卫东
郭宏波
左小容
刘景玲
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第8期320-325,共6页
为探究不同产地莲藕中主要营养成分与活性成分的含量特征,建立莲藕品质综合评价体系。对10个产地的12份莲藕样本中的粗蛋白、淀粉、脂肪、粗纤维、可溶性总糖、总黄酮、总多酚、维生素C、矿物质和氨基酸含量进行测定,结果显示,云南红河...
为探究不同产地莲藕中主要营养成分与活性成分的含量特征,建立莲藕品质综合评价体系。对10个产地的12份莲藕样本中的粗蛋白、淀粉、脂肪、粗纤维、可溶性总糖、总黄酮、总多酚、维生素C、矿物质和氨基酸含量进行测定,结果显示,云南红河莲藕的淀粉(136.87 g/kg)、脂肪(7.26 g/kg)、总多酚(155.5 mg/kg)、总氨基酸(15.75%)、铁(50.7 mg/kg)、锌(3.52 mg/kg)和钾(407 mg/100 g)含量最高,山东菏泽莲藕的可溶性总糖(71.35 mg/g)和粗纤维(69.84 g/kg)含量最高,江苏淮安莲藕的VC含量最高(67.53 mg/100 g),四川眉山莲藕的黄酮含量最高(117.92 mg/kg),湖北荆州莲藕的粗蛋白含量最高(38.4 g/kg),河南三门峡莲藕的磷含量最高(61.3 mg/100 g),陕西富平1莲藕钙含量最高(323 mg/kg),湖南湘潭莲藕的硒含量最高(9.5μg/kg)。利用因子分析和系统聚类分析对莲藕营养成分和综合品质进行评价,因子分析表明可将评价莲藕品质的指标用2个因子表示,淀粉、钾、维生素C、硒、铁和锌含量可以用来衡量莲藕品质的优劣。综合评价显示云南红河莲藕的品质最优,陕西富平3、江苏淮安和湖北荆州莲藕的品质较差。
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关键词
莲藕
不同产地
营养成分
因子分析
聚类分析
品质评价
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职称材料
荷叶生物碱成分及其调脂机制研究进展
被引量:
41
3
作者
程婷婷
原新博
+2 位作者
惠小涵
柯卫东
郭宏波
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期1998-2003,共6页
荷叶Nelumbo nucifera是《本草纲目》记载具有调脂减肥功效的药材。荷叶生物碱是从荷叶中提取的生物碱类活性物质,具有抑菌、调脂、止痉等多种功效。近年来因肥胖引发的健康问题受到高度重视,因此荷叶生物碱的调脂减肥功效成为研究热点...
荷叶Nelumbo nucifera是《本草纲目》记载具有调脂减肥功效的药材。荷叶生物碱是从荷叶中提取的生物碱类活性物质,具有抑菌、调脂、止痉等多种功效。近年来因肥胖引发的健康问题受到高度重视,因此荷叶生物碱的调脂减肥功效成为研究热点。对荷叶生物碱的成分、调脂机制及其在药品开发中的应用进行综述,为荷叶生物碱调脂产品的开发及调脂机制的深入研究提供参考。
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关键词
荷叶
荷叶生物碱
调脂机制
荷叶碱
莲碱
原文传递
题名
莲藕多酚氧化酶互作蛋白的筛选及验证
被引量:
1
1
作者
原新博
程婷婷
惠小涵
陈章玉
王瑞红
柯卫东
郭宏波
机构
西北农林科技大学化学与药学院/中药指纹图谱国家地方联合工程研究中心/陕西省中药指纹图谱与天然产物库研究中心
西北农林科技大学生命科学学院
武汉市农业科学院蔬菜研究所
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第18期3777-3791,共15页
基金
国家重点研发计划(2016YFD0100204-29)
国家杨凌农业高新技术产业示范区科技计划(2018SF-08)。
文摘
【目的】以中国莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)的多酚氧化酶家族成员之一NnPPO1(GenBank:ADC92563.1)为研究对象,筛选、验证与其互作的蛋白,为深入研究莲藕PPO的分子作用机制、精准抑制其活性奠定基础。【方法】利用酵母双杂交(Y2H)技术,验证莲藕抗氧化酶是否与NnPPO1存在互作关系。通过转化酵母试验检测互作蛋白过氧化氢酶同工酶NnCAT1(GenBank:XP_010242894.1)的毒性和自激活活性。构建双分子荧光标记试验(BiFC)所用的35S-NnPPO1-SPYNER173、35S-NnCAT1-SPYCEM表达载体,通过农杆菌介导法,将重组质粒转化烟草,进一步验证NnPPO1与NnCAT1之间的互作关系。根据NnPPO1和NnCAT1的结构域截短蛋白,寻找互作关键结构域。利用PlantCARE分析NnPPO1与NnCAT1启动子相关作用元件,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析NnPPO1与NnCAT1在莲藕不同组织中的表达水平。采用同源重组的方法构建35S-NnCAT1-GFP融合蛋白表达载体,用于亚细胞定位分析。运用DNAMAN软件对NnCAT1序列和其他物种序列进行多序列比对。运用生物信息学网站对NnCAT1进行理化性质与结构分析。【结果】NnCAT1与NnPPO1存在蛋白互作,且NnCAT1蛋白无自激活作用,对酵母菌株也没有毒性。在细胞膜和细胞核上观察到黄色荧光信号,进一步证实NnPPO1与NnCAT1之间存在互作。NnPPO1的酪氨酸酶结构域在蛋白互作中发挥主要作用。NnPPO1与NnCAT1启动子序列上存在多种顺式调控元件,如光响应元件Box 4、GT1-motif、TCT-motif,逆境响应元件ARE以及激素响应元件CGTCA-motif、TGACG-motif等。NnPPO1与NnCAT1的表达模式基本相同,在各组织中均有表达,均在叶中表达量最高,在茎尖中表达量最低。亚细胞定位结果显示NnCAT1定位于细胞膜和细胞核中。莲藕NnCAT1的相对分子质量约为57.0 kD,理论等电点(PI)为6.93;该蛋白为同源四聚体亲水性蛋白质;无跨膜结构和信号肽,存在叶绿体转运肽,前21 aa为转运肽区域;二级结构由27.64%的α-螺旋、15.65%延长链、6.30%β-转角和50.41%无规则卷曲构成。【结论】筛选出NnCAT1与NnPPO1之间存在蛋白互作,用BiFC进一步证实两者互作的真实性,NnPPO1保守的酪氨酸酶结构域在互作中发挥主要作用;NnPPO1与NnCAT1的表达模式基本相同,推测NnPPO1与NnCAT1协同互作导致莲藕等果蔬褐变。
关键词
莲藕
NnPPO1
NnCAT1
蛋白互作
亚细胞定位
组织特异性表达
Keywords
Nelumbo nucifera
NnPPO1
NnCAT1
protein interaction
subcellular localization
tissue-specific expression
分类号
S645.1 [农业科学—蔬菜学]
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职称材料
题名
10个产地莲藕营养成分分析与品质综合评价
被引量:
20
2
作者
程婷婷
惠小涵
尚欣欣
原新博
柯卫东
郭宏波
左小容
刘景玲
机构
西北农林科技大学化学与药学院
武汉市农业科学院蔬菜研究所
西安安得药业有限责任公司
西北农林科技大学生命科学学院
出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第8期320-325,共6页
基金
国家重点研发计划(2016YFD0100204-29)
国家杨凌农业高新技术产业示范区科技攻关计划(201SF-08)。
文摘
为探究不同产地莲藕中主要营养成分与活性成分的含量特征,建立莲藕品质综合评价体系。对10个产地的12份莲藕样本中的粗蛋白、淀粉、脂肪、粗纤维、可溶性总糖、总黄酮、总多酚、维生素C、矿物质和氨基酸含量进行测定,结果显示,云南红河莲藕的淀粉(136.87 g/kg)、脂肪(7.26 g/kg)、总多酚(155.5 mg/kg)、总氨基酸(15.75%)、铁(50.7 mg/kg)、锌(3.52 mg/kg)和钾(407 mg/100 g)含量最高,山东菏泽莲藕的可溶性总糖(71.35 mg/g)和粗纤维(69.84 g/kg)含量最高,江苏淮安莲藕的VC含量最高(67.53 mg/100 g),四川眉山莲藕的黄酮含量最高(117.92 mg/kg),湖北荆州莲藕的粗蛋白含量最高(38.4 g/kg),河南三门峡莲藕的磷含量最高(61.3 mg/100 g),陕西富平1莲藕钙含量最高(323 mg/kg),湖南湘潭莲藕的硒含量最高(9.5μg/kg)。利用因子分析和系统聚类分析对莲藕营养成分和综合品质进行评价,因子分析表明可将评价莲藕品质的指标用2个因子表示,淀粉、钾、维生素C、硒、铁和锌含量可以用来衡量莲藕品质的优劣。综合评价显示云南红河莲藕的品质最优,陕西富平3、江苏淮安和湖北荆州莲藕的品质较差。
关键词
莲藕
不同产地
营养成分
因子分析
聚类分析
品质评价
Keywords
lotus root
different producing areas
nutrient content
factor analysis
systematic cluster analysis
quality evaluation
分类号
TS255.1 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
荷叶生物碱成分及其调脂机制研究进展
被引量:
41
3
作者
程婷婷
原新博
惠小涵
柯卫东
郭宏波
机构
西北农林科技大学化学与药学院中药指纹图谱国家地方联合工程研究中心陕西省中药指纹图谱与天然产物库研究中心
武汉市农业科学院蔬菜研究所
出处
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期1998-2003,共6页
基金
国家重点研发计划(2016YFD0100204-29)
国家杨凌农业高新技术产业示范区科技攻关计划(201SF-08)
文摘
荷叶Nelumbo nucifera是《本草纲目》记载具有调脂减肥功效的药材。荷叶生物碱是从荷叶中提取的生物碱类活性物质,具有抑菌、调脂、止痉等多种功效。近年来因肥胖引发的健康问题受到高度重视,因此荷叶生物碱的调脂减肥功效成为研究热点。对荷叶生物碱的成分、调脂机制及其在药品开发中的应用进行综述,为荷叶生物碱调脂产品的开发及调脂机制的深入研究提供参考。
关键词
荷叶
荷叶生物碱
调脂机制
荷叶碱
莲碱
Keywords
Nelumbinis Folium
alkaloids in Nelumbinis Folium
lipid-lowering mechanism
nuciferine
roemerine
分类号
R284 [医药卫生—中药学]
R285 [医药卫生—中药学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
莲藕多酚氧化酶互作蛋白的筛选及验证
原新博
程婷婷
惠小涵
陈章玉
王瑞红
柯卫东
郭宏波
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
下载PDF
职称材料
2
10个产地莲藕营养成分分析与品质综合评价
程婷婷
惠小涵
尚欣欣
原新博
柯卫东
郭宏波
左小容
刘景玲
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021
20
下载PDF
职称材料
3
荷叶生物碱成分及其调脂机制研究进展
程婷婷
原新博
惠小涵
柯卫东
郭宏波
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2019
41
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