利用同框敲除技术研究Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的代谢产物

为了阐明Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的功能,利用同源双交换的方法对该基因进行同框敲除,采用异位表达的方法进行了相应的回补实验。通过高效液相色谱及液相色谱-质谱联用分析发现基因orf18的敲除会明显降低发酵产物中苯甲酸盐的含量,回补该基因能够在一定程度上恢复苯甲酸盐的产量,表明orf18在原宿主中极有可能参与苯甲酸盐的生物合成。

Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中一个Ⅲ型聚酮合酶基因的克隆及功能分析

从链霉菌Streptomyces sahachiroi ATCC 33158基因组中克隆到1个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因orf18。生物信息学及进化树分析表明它可能属于rppA类Ⅲ型PKS基因。通过RT-PCR证实了该基因在野生型S.sahachiroi中是可以进行转录表达的。HPLC和LC-MS分析的结果表明orf18在S.lividans中异源表达时可产生1,3,6,8-四羟基萘(THN),并且发现该基因也可以在革兰氏阴性菌Pseudomonas stutzeri中异源表达并产生明显的棕红色色素。证明orf18编码的蛋白属于RppA类Ⅲ型PKS,可催化THN的合成,而产物THN在革兰氏阴性菌P.stutzeri中可进一步氧化及聚合形成棕红色色素。

胶带输送机机头底座固定方式选择

通过对综采工作面常用的两种胶带输送机机头固定方法进行分析和对比,明确了其各自的适用范围以及优劣势,为综采工作面胶带输送机安全高效快速安装提供应用经验和参考。

重组人金属硫蛋白-Ⅲα短肽毒性效应的初步研究

研究重组人金属硫蛋白Ⅲα短肽(rh-MT-Ⅲα)致HaCaT细胞、L929细胞和秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)毒性效应,为rh-MT-Ⅲα的安全应用提供实验基础。细胞暴露于不同浓度的rh-MT-Ⅲα溶液(0~400μg·mL^(-1)),24 h后检测细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)活性,观察细胞形态并检测细胞凋亡情况。结果表明,各剂量组2种细胞的存活率,与对照组相比均无显著性差异,细胞形态也未观察到显著变化。在400μg·mL^(-1)浓度下,LDH释放率明显增加,细胞凋亡率上升。线虫实验中,将线虫培养并同步化至L1期后进行染毒,剂量为5、50和500μg·mL^(-1),暴露48 h后检测其运动行为(头部摆动和身体弯曲频率)、发育(体长)及摄食行为(咽泵频率),各指标均未有明显改变。研究表明,在一定的剂量水平下,rh-MT-Ⅲα对HaCaT细胞、L929细胞和秀丽隐杆线虫无明显毒性效应。

重组人金属硫蛋白-Ⅲα短肽对UVB致HaCaT细胞氧化损伤的缓解作用

利用体外自由基清除实验研究重组人金属硫蛋白Ⅲα短肽(rh-MT-Ⅲα)自由基清除能力,建立紫外线B(UVB)损伤HaCaT细胞模型,使用不同浓度rh-MT-Ⅲα(25~200μg·mL^(-1))处理损伤的HaCaT细胞24 h后观察细胞存活率、细胞形态、细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)水平,从细胞水平上评价rh-MT-Ⅲα对UVB致HaCaT细胞氧化损伤的作用。体外自由基清除实验结果显示,随着rh-MT-Ⅲα浓度升高,其对1,1-二苯基-2-苦苯肼(DPPH)自由基清除率也随之增加,清除率为50%时所需rh-MT-Ⅲα浓度(IC_(50))为184.32μg·mL^(-1)。抗光氧化损伤实验结果显示,rh-MT-Ⅲα可有效提高UVB损伤后HaCaT细胞的存活率、改善细胞形态并显著降低细胞凋亡及细胞内ROS含量,且在100μg·mL^(-1)时修复作用最为明显。实验结果表明rh-MT-Ⅲα具有较强自由基清除能力,可有效缓解UVB诱导的HaCaT细胞氧化损伤,且在100μg·mL^(-1)剂量下作用显著。

郭庄煤业新建辅助提升井大断面掘进技术

文章针对山西潞安郭庄煤业公司新建辅助提升井井筒的地质、水文条件,采用普通凿井法施工,通过中深孔爆破、机械化配套设施、施工辅助系统等,实现快速施工。实践证明,平均月成井90 m以上,为立井井筒施工积累了经验。

大型煤矿排水系统的节能优化设计与应用

节能减排一直是困扰着我国经济发展的难题,而作为其中重要的煤矿开采尤为突出。本文主要介绍煤矿排水系统在节约能源的基础上的优化设计,为全面的分析大型煤矿排水系统节能提供强有力的支持。

重组人金属硫蛋白-Ⅲ对细胞和秀丽隐杆线虫毒性效应的研究

该文探索机体可能暴露剂量的重组人金属硫蛋白Ⅲ(rh-MT-Ⅲ)对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes,HaCaT)、小鼠成纤维细胞(L929)和秀丽隐杆线虫(Caenorhabdities elegans,C.elegans)的毒性效应,并探究其安全剂量范围,为安全应用提供实验依据。以0、12.5、25、50、100和200μg/mL rh-MT-Ⅲ对HaCaT细胞和L929细胞暴露24 h,检测其对细胞存活率、形态学变化、细胞膜损伤程度和细胞凋亡水平的影响;以0、5、50、500μg/mL rh-MT-Ⅲ对L1期线虫暴露72 h,考察其对线虫存活率、运动行为(头部摆动和身体弯曲频率)、生长发育(体长和体宽)、摄食和排便行为的影响。结果显示,与对照组相比,两种细胞的存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶释放率及凋亡水平以及线虫各项检测指标,在研究剂量下均无统计学差异。这表明rh-MT-Ⅲ在0~200μg/mL剂量时对HaCaT细胞和L929细胞无明显毒性效应;0~500μg/mL对线虫无明显毒性效应。