人脑星形细胞瘤p16及胶质原纤维酸性蛋白表达的研究

胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达水平与星形（胶质）细胞瘤分化程度有关，其与常规病理组织学分级的反比关系并不完全反映星形细胞瘤的生物学行为。P16蛋白是抑癌蛋白，广泛而高频率地表达于人类肿瘤中。本研究用免疫组化方法结合观察了42例星形细胞瘤标本的GFAP和P16表达。结果显示：GFAP表达水平随着星形细胞瘤病理组织学恶性程度的升高而下降，P16有着相同的表达水平的变化。本文对这种关系进行了讨论。

RNA-RNA原位杂交检测星形细胞瘤p16基因表达

p16基因及其表达变化与多种人类肿瘤的发生发展相关。本研究在观察42例星形细胞瘤p16蛋白表达的基础上，采用RNA－RNA原位杂交检测星形细胞瘤p16mRNA表达情况。结果显示：Ⅰ、Ⅱ级肿瘤p16mRNA表达水平显著高于Ⅲ～Ⅳ级病例，其与p16蛋白表达水平呈正相关。提示p16的失活或／和低表达极有可能发生在从低级向高级恶性转化的星形细胞瘤进展期中，p16的应用在肿瘤治疗学方面将具有重要意义。

D-半乳糖对大鼠空间学习记忆行为与海马结构电生理以及突触形态学的影响

为了观察经 D-半乳糖处理大鼠的空间学习记忆行为以及在体诱导海马齿状回长时程增强及海马 CA3区突触形态学的变化 ,本研究采用向正常组大鼠每日皮下注射生理盐水 1ml,模型组大鼠每日皮下注射 D-半乳糖 (共 6周 )作为实验材料。对空间学习记忆行为 ,以 Morris水迷宫潜伏期作为判定标准 ;应用在体记录单脉冲刺激穿通纤维在海马齿状回诱发的群体电位 ,测量高频刺激前后单脉冲刺激诱发的电位幅值变化 ,将高频刺激前的记录作为基线值 ,进行组间比较 ;应用透射电镜结合图像分析对大鼠海马 CA3区突触形态结构进行观察。结果证明 :( 1)模型组水迷宫潜伏期成绩显著低于正常组 ( P<0 .0 5 ) ;( 2 )高频刺激前二组间峰潜伏期和电位平均幅值无显著性差异 ,高频刺激后对各时间段群体电位与高频刺激前群体电位峰值之比进行的分析表明 ,模型组在高频刺激后 2 0 min时段开始其比值较正常组显著减小 ( P<0 .0 1) ,模型组长时程增强诱导率显著低于正常组 ( P<0 .0 0 1) ;( 3 )经 D-半乳糖处理的大鼠海马 CA3区突触间隙明显增宽、突触后致密物厚度变薄、突触活性区长度缩短 ( P<0 .0 5 )。结论 :皮下注射 D-半乳糖可损害大鼠的空间学习记忆能力 ,降低大鼠在体海马齿状回长时程增强的诱导率 ,使长时程增强增幅降低 ,并可显?

电针对D-半乳糖所致衰老模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的:探讨电针对D-半乳糖处理后衰老大鼠神经细胞凋亡的抑制作用。方法:实验于2000-10/2003-01在上海中医药大学生理学教研室完成。选取雄性Wistar大鼠42只,随机分为正常组、模型组、电针组,14只/组。正常组每天皮下注射生理盐水1mL,连续6周;模型组每天皮下注射D-半乳糖800mg/kg,连续6周;电针组每天皮下注射同剂量D-半乳糖,第18天开始电针,电针穴位根据动物“针灸穴位图谱”选择百会、大椎,采用电流强度5mA、频率10Hz的断续波,15min/d,至第6周末结束。凋亡细胞以原位末端标记法检测,凋亡相关因子蛋白行免疫组织化学法检测,线粒体形态的改变用体视学方法分析。结果:42只大鼠全部进入结果分析。①各组脑海马锥体细胞的超微结构比较:正常组核周边内质网、线粒体、高尔基体等细胞器丰富,核大而圆,染色质密度均一,核仁明显。模型组粗面内质网大量增生,线粒体嵴变短、不规则或消失,溶酶体数量增加,细胞内出现自嗜体,核不规则固缩,染色质向核膜凝集成块,有核仁裂解现象,核膜、细胞器膜、细胞膜完整,提示模型组神经细胞有凋亡样形态学改变。电针组与正常组接近,主要表现为线粒体的肿胀不明显,溶酶体数量有所下降,核结构接近正常。②各组大鼠脑海马CA1区线粒体比表面情况:与正常组比较,模型组变小,电针组基本无变化(25.02±14.66,21.03±10.75,23.87±14.00,P<0.05,P>0.05)。③各组大鼠脑海马CA1区线粒体平均轴比情况:与正常组比较,模型组变大,电针组基本无变化(1.57±0.72,2.04±0.83,1.63±0.69,P<0.05,P>0.05);电针组明显高于模型组(P<0.05)。④凋亡阳性细胞率:与正常组比较,模型组显著增加,电针组略高(0.25±0.11,1.07±0.31,0.50±0.34,P<0.05),与模型组比较,电针组明显降低(P<0.05)。⑤Bax与Bcl-2阳性细胞数检测结果:与正常组Bax比较,模型组呈过表达,电针组略高(66.4±12.8,140.4±41.0,77.1±18.1,P<0.05),电针组明显低于模型组(P<0.05);与正常组Bcl-2比较,模型组表达明显降低,电针组略低(157.0±59.7,56.9±15.3,108.5±25.8,P<0.05),电针组明显高于模型组(P<0.05)。⑥Bax与Bcl-2积分吸光度检测结果:与正常组Bax比较,模型组呈过表达,电针组略高(4.2±2.1,10.6±5.9,7.5±5.7,P<0.05),电针组明显低于模型组(P<0.05);与正常组Bcl-2比较,模型组表达明显降低,电针组升高(8.0±1.7,1.2±0.8,13.9±4.1,P<0.05),电针组明显高于模型组(P<0.05)。结论:D-半乳糖致衰老时,大鼠脑海马组织中存在凋亡阳性神经细胞增加的现象。电针干预后,凋亡抑制基因Bcl-2蛋白的表达量显著增强,线粒体形态得到改善,凋亡阳性细胞率也有所下降,但对促凋亡基因Bax蛋白的调节不很明显。因而推断电针是通过调节Bcl-2蛋白的表达来抑制D-半乳糖所引起的神经细胞凋亡的。

D-半乳糖对大鼠海马氨基酸含量及海马CA1区突触结构参数的影响

目的 观察经 D-半乳糖长期处理的大鼠海马氨基酸含量及海马 CA1区突触结构参数的改变。方法 应用反相高效液相法对大鼠海马氨基酸含量进行分析 ,应用透射电镜结合图像分析对突触结构参数进行观察。结果 (1 ) D-半乳糖可导致模型大鼠天冬氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸含量降低 ,谷氨酸含量升高 (P<0 .0 5) ;(2 )在突触结构参数中 ,经 D-半乳糖处理的大鼠突触间隙明显增宽、突触后致密物厚度变薄、突触活性区长度缩短 (P<0 .0 5) ,突触界面曲率三组间无差异。结论 D-半乳糖可改变大鼠海马氨基酸含量 。

糖尿病大鼠视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的变化

目的:观察糖尿病不同时期视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体各亚基的表达。方法:采用雄性SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别于4、8、12周灌注,取眼球、冷冻切片;免疫组织化学、原位杂交方法检测NMDA受体NR1、NR2A、NR2B亚基表达的变化;用RS IMAGE软件进行图像分析。结果:NR1、NR2A、NR2B基因及其蛋白表达在糖尿病第4周时开始升高,至12周升高具有统计学意义,特别是NR1的变化更为显著。结论:NMDA受体各亚基的高表达参与了糖尿病视网膜病变。

D-半乳糖对大鼠空间学习记忆行为与脑海马结构电生理以及突触形态学的影响(英文)

背景:学习记忆障碍是衰老的主要表现之一,D-半乳糖致衰老模型是近年来常用的动物模型,长期D-半乳糖处理可引起动物神经细胞形态学的改变。目的:对D-半乳糖引起拟衰老改变时大鼠的空间学习记忆行为进行观察,并结合其体内诱导海马齿状回长时程增强以及海马CA3区突触形态学的变化予以探讨。设计:随机对照观察。单位:上海第二医科大学解剖学教研室,上海中医药大学生理学教研室。材料:实验于2000-08/2001-04在上海中医药大学生理学教研室完成。选取3月龄雄性Wistar大鼠22只,随机分正常组和D-半乳糖组,11只/组。D-半乳糖(上海化学试剂二厂),Morris水迷宫(上海中医药大学老年所提供,自制)。方法:正常组每天皮下注射生理盐水1mL,D-半乳糖组每天皮下注射D-半乳糖800mg/kg,连续给药6周。大鼠空间学习记忆行为以Morris水迷宫潜伏期作为判定标准;应用体内记录单脉冲刺激穿通纤维在海马齿状回诱发的群体电位,测量高频刺激前后单脉冲刺激诱发的电位幅值变化,将高频刺激前的记录作为基线值,进行组间比较;应用透射电镜结合图像分析对大鼠海马CA3区突触形态结构进行观察。水迷宫潜伏期采用重复测量设计的方差分析,长时程增强各时段群体电位峰值潜伏期的组间差异采用t检验,长时程增强的诱导率用χ2检验,用XY-540型生物图像处理系统对电镜突触照片进行测量,对所得数据进行t检验。主要观察指标:①主要结局:Morris水迷宫潜伏期测试成绩以及长时程增强诱导率、群体电位的变化。②次要结局:海马CA3区突触形态结构的变化。结果:实验纳入大鼠22只,水迷宫测试中无脱落,其后在电生理实验中正常组和D-半乳糖组各有1只死亡,最后每组随机抽取3只用于电镜观察。①两组Morris水迷宫潜伏期成绩的比较:与正常组比较,D-半乳糖组寻找水下平台潜伏期明显延长[(14.77±10.10),(51.36±12.45)s,P<0.05]。②高频刺激前正常组与D-半乳糖组海马齿状回诱发电位的比较:两组群体电位幅值及群体电位潜伏期均无明显差异[(1.05±0.47),(0.91±0.41)mV;(5.46±2.09),(5.38±2.26)ms;P>0.05]。③两组齿状回长时程增强诱导率比较:与正常组比较,高频刺激后D-半乳糖组明显降低(80%,20%,χ2=7.20,P<0.01)。④两组高频刺激后不同时间段的群体电位比值的比较:与正常组比较,D-半乳糖组于高频刺激后20,30,60min均明显降低(1.104±0.196,0.919±0.162;1.354±0.212,0.999±0.219;1.236±0.174,0.875±0.311;P<0.05)。⑤两组大鼠海马CA3区突触结构各参数的比较:与正常组比较,D-半乳糖组海马CA3区突触后致密物厚度变薄[(40.60±18.26),(26.35±8.15)nm,P<0.05],突触间隙宽度增大[(17.69±6.28),(26.95±5.67)nm,P<0.05],突触活性区长度缩短[(265.13±76.50),(229.13±90.68)nm,P<0.05]。结论:皮下注射D-半乳糖可损害大鼠的空间学习记忆能力,降低大鼠在体海马齿状回长时程增强诱导率,使长时程增强增幅降低,并可显著影响大鼠脑海马CA3区的突触超微结构。提示D-半乳糖对大鼠海马齿状回长时程增强诱导的抑制和对CA3区突触形态结构的影响,是其导致空间学习记忆行为障碍的基础。

PBL教学法应用于局部解剖学教学的初探

为适应医学模式的转变,医学教育从多方面进行了改革,教学方法的改进也是医学教育的关键,其中PBL教学法受到了极大的重视。相对于传统教学法,PBL教学法对于培养学生的实践能力、自学能力及开创能力具有积极影响。文中阐述了PBL在局部解剖学教学中的应用设想。

糖尿病大鼠视网膜突触后致密物蛋白质95的蛋白表达及突触超微结构的改变

目的观察糖尿病不同时期视网膜突触后致密物蛋白质95(PSD95)的蛋白表达水平以及视网膜突触超微结构的变化。方法雄性3月龄SD大鼠56只,随机分为模型组和对照组,分别腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)和0.1mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液,于4、8、12周取眼球,入4%多聚甲醛后固定2h,冷冻切片厚20μm,采用免疫组织化学检测PSD95蛋白表达的变化,显微镜观察视网膜全层并摄片,图像分析;透射电镜观察视网膜突触并摄片。结果 PSD95蛋白表达在糖尿病第8周时开始升高,至12周时升高具有显著意义;视网膜内丛状层的突触结构中的突触间隙增大,突触后致密物厚度变薄,突触活性区长度变长。结论 PSD95的蛋白表达水平以及视网膜突触超微结构的改变可能与糖尿病视网膜病变的发展有关。

PBL教学法在系统解剖学教学中的应用

在五年制临床医学专业系统解剖学理论课教学中采用PBL教学法,学期结束后收集学生的反馈评价表进行分析。结果表明,PBL教学法得到了大多数学生的认可,对于培养学生的自学能力、实践能力及交流合作能力具有积极影响,取得了比较好的课堂效果和教学效果,可以作为教学方法的补充应用于五年制临床医疗专业的系统解剖学教学中。

糖尿病大鼠视网膜神经源性一氧化氮合酶表达及乙酰胆碱酯酶的变化

目的:观察糖尿病大鼠视网膜神经源性一氧化氮合酶(nNOS)蛋白和基因水平的表达以及乙酰胆碱酯酶(AchE)的变化。方法:注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,于注射后12周和16周时将模型组及对照组大鼠的眼球冰冻切片。用原位杂交法、免疫组织化学法和组织化学法分别显示nNOS mRNA、nNOS和AchE阳性神经元或神经纤维,RS IMAGE软件进行图像分析处理。结果:与对照组比较,糖尿病大鼠视网膜nNOS mRNA、nNOS、AchE的光密度值均降低,12、16周都有显著性差异。结论:糖尿病大鼠视网膜nNOS基因转录和表达均下降,AchE含量降低,导致了NO水平下降,成为糖尿病性视网膜病变的主要因素之一。

电针对半乳糖致大鼠学习记忆障碍及突触改变的干预作用

本文研究了 D-半乳糖长期处理大鼠后其学习记忆行为、海马结构参数的改变及电针的干预作用。正常对照组每日皮下注射生理盐水 1m l,模型对照组每日皮下注射 D-半乳糖 (80 0 mg/ kg) ,连续 6周 ,电针组处理同模型对照组 ,并从第 18天开始电针。空间学习记忆行为以 Morris水迷宫潜伏期作为判定标准。实验结束后 ,每组随机取 3只大鼠的海马 CA3区作电镜观察。结果 :(1)模型对照组大鼠水迷宫潜伏期成绩显著低于正常对照组 ,电针组潜伏期成绩与模型对照组相比显著提高 ;(2 )模型对照组大鼠与正常对照组相比 ,突触间隙明显增宽 ,突触后致密物厚度 (PSD)变薄 ,突触活性区长度缩短 ,差异具有显著意义。与模型对照组比 ,电针组突触间隙宽度显著缩小 ,PSD、突触活性区长度差异无显著意义。突触界面曲率三组间无差异。提示 :皮下注射 D-半乳糖可损害大鼠的空间学习记忆能力、使大鼠海马 CA3区突触结构参数发生改变 ,电针可提高模型动物的空间学习记忆能力、改善 D-半乳糖对海马 CA3区突触超微结构的损害。

电针对半乳糖所致大鼠空间学习记忆障碍及海马齿状回LTP诱导的干预作用

本文研究了D 半乳糖对大鼠空间学习记忆行为及对在体诱导海马齿状回LTP的影响 ,并观察了电针的干预作用。正常组每日皮下注射生理盐水 1mL ,模型组和电针组每日皮下注射D 半乳糖 ( 80 0mg/kg)共 6周 ,电针组从第 1 8天开始电针。空间学习记忆行为以Morris水迷宫潜伏期作为判定标准 ;应用记录单脉冲刺激穿通纤维在海马齿状回诱发的群体电位 ,测量高频刺激(HFS)前后单脉冲刺激诱发的电位幅值变化 ,将HFS前的记录作为对照值 ,进行组间比较。结果显示 :①模型组水迷宫潜伏期成绩明显低于正常组 ,电针组潜伏期成绩与模型组比显著提高 (P <0 .0 5) ;②HFS前记录显示 :三组间PS潜伏期和PS平均幅值无显著性差异 ,HFS后 ,1 0只正常组大鼠有 8只产生了LTP。其电位平均幅值增加为基线值的 1 3 5± 3 .9% ;1 0只模型组大鼠有 2只产生了LTP ,其平均值为基线值的 1 2 1 .4± 1 .4% ;电针组 9只大鼠有 5只产生了LTP ,其平均幅值为基线值的 1 3 1 .8± 5.3 %。提示 :D 半乳糖可损害大鼠的空间学习记忆能力、降低大鼠在体海马齿状回LTP的诱导率 ,降低LTP振幅 ;电针可提高模型动物的空间学习记忆能力 。

糖尿病大鼠神经系统内脑源性神经生长因子的表达与阴茎勃起功能障碍的关系

目的:观察糖尿病(DM)大鼠神经系统内脑源性神经生长因子(BDNF)阳性神经元或神经纤维的表达,探讨BDNF与糖尿病性阴茎勃起功能障碍(ED)的相关性。方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立DM大鼠模型(DM组),分别于造模1、2、3、4个月注射阿扑吗啡(APO)作阴茎勃起功能试验,然后取糖尿病及相应月龄正常大鼠(对照组)的脑、腰骶段脊髓、胸腰段交感干、阴茎和前列腺,用免疫组织化学法和免疫荧光法显示BDNF阳性神经元和神经纤维。图像分析BDNF阳性细胞数及灰度。结果:糖尿病2个月时,DM大鼠阴茎勃起实验中阴茎勃起次数与对照组相比差异有显著性(P<0.05),3个月和4个月差异有极显著性(P<0.01)。糖尿病1个月时,大脑皮质、腰骶段脊髓、胸腰段交感干、阴茎和前列腺BDNF阳性神经细胞及纤维比对照组明显减少(P<0.05),随着病程延长下降更明显(P<0.01)。结论:糖尿病性早期神经系统内出现BDNF减少,BDNF的减少与糖尿病性ED的发病密切相关。

电针对D-半乳糖所致空间记忆障碍大鼠海马氨基酸递质改变的影响

目的观察电针对D-半乳糖所致大鼠空间学习记忆障碍的影响,从氨基酸递质含量改变探讨电针作用机制。方法将24只大鼠随机分成三组:正常对照组(n=8),模型组(n=8),电针组(n=8);应用反相高效液相法对各组大鼠海马5种氨基酸递质进行了检测。结果模型组Asp含量比正常对照组显著降低,电针后增高(P<0.05);在模型组Glu含量比正常组升高,电针后含量更高,差异有统计学意义(P<0.05);Gly在模型组有降低趋势,但差异无统计学意义,电针组含量增高,与模型组和正常对照组比差异都有统计学意义(P<0.05);Tau在模型组含量显著降低,电针后增高,差异有统计学意义(P<0.05);GABA在模型组含量显著降低(P<0.05),电针后增高,但差异无统计学意义。结论电针调节D-半乳糖引起的记忆障碍大鼠可能与海马多种氨基酸含量的改变有关。

糖尿病大鼠神经生长因子的表达与阴茎勃起功能障碍的关系

目的：探讨糖尿病(DM)大鼠神经系统中 NGF 的表达与阴茎勃起功能障碍(ED)的相关性。方法：建立糖尿病大鼠模型,分别于造模1～4月注射阿扑吗啡(APO)作阴茎勃起功能试验,然后取大鼠的大脑、胸腰段交感干、阴茎和前列腺,用免疫组织化学法和荧光免疫组化法显示 NGF 阳性神经元或神经纤维,并作图像分析。结果：糖尿病1个月时尚无 ED 出现,但各处的 NGF 阳性神经元及纤维开始下降,与对照组相比有显著性差异,随着病程延长差异更明显；2个月时 DM 大鼠阴茎勃起次数与对照组已有显著差异3个月和4个月时差异非常显著。结论：糖尿病性早期中枢和周围神经系统内 NGF 减少,NGF 的减少与糖尿病性 ED 的发生发展密切相关。

人脑星形细胞瘤中GFAP表达的免疫组化研究

应用抗GFAP多抗对42例人脑星形细胞瘤标本进行免疫组化研究。结果表明，阳性反应信号位于胞浆；阳性反应细胞密度和反应强度随肿瘤恶性程度的升高而下降，Ⅰ级、Ⅱ级与Ⅲ一Ⅳ级肿瘤标本平阳性细胞密度有显著差异（P＜0．05）。

深化医学解剖学的中法双语教学

总结了20年来解剖学中法双语教学的进程和已经取得的成绩。对法文班学生进行问卷调查下,找出存在的问题;并提出今后的努力方向:以学生为主;坚持高水平师资队伍、优质教材和先进的教学手段方法的同步发展;为培养国际化的医学人才而深化双语教学改革。

人脑星形细胞瘤p16基因表达研究

应用生物素标记的p16cRNA探针、p16单克隆抗体，对42例人脑星形细胞瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ级组织标本进行原位杂交和免疫组化研究。结果显示：p16mRNA原位杂交阳性信号呈蓝色或紫蓝色细颗粒状，位于胞浆内。Ⅰ、Ⅱ级杂交阳性细胞密度显著高于Ⅲ－Ⅳ级（P＜0．001），阳性细胞反应强度明显大于Ⅲ－Ⅳ级阳性强度。P16免疫组化阳性反应信号为棕黄色；Ⅰ和Ⅱ级免疫反应阳性细胞密度大于Ⅲ－Ⅳ级，（P<0．005，P<0．01）。p16原位杂交与P16免疫组化结果基本一致，二者呈正相关。研究结果提示，P16对星形细胞瘤的发生发展具有负向调节作用；p16在星形细胞瘤的恶性转化中也起到了重要作用。

糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎和脊髓nNOS及AchE表达的变化

目的:观察大鼠糖尿病性勃起功能障碍(ED)与腰骶段脊髓和阴茎神经源性一氧化氮合酶(nNOS)和乙酰胆碱酯酶(AchE)阳性神经元或神经纤维变化的相关性。方法:注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,4周和12周后注射阿扑吗啡(APO)进行大鼠阴茎勃起功能实验,取大鼠阴茎和腰骶段脊髓,用ABC免疫组织化学法和组织化学法分别显示nNOS和AchE阳性神经元或神经纤维。结果:与对照组相比,糖尿病4周时,大鼠阴茎勃起次数无显著性差异;12周时显著性减少;糖尿病4周时,脊髓和阴茎nNOS和AchE阳性神经元或神经纤维均无显著变化,而12周时均显著减少。结论:糖尿病性ED的出现伴随脊髓和阴茎内NO和乙酰胆碱的减少。